真菌基因组DNA快速提取试剂盒操作方法及步骤说明书

杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio--1-真菌基因组DNA快速提取试剂盒名目号：DN41DN4101DN4102DN4103

包装单位50次100次200次适用范围：适用于快速提取真菌组织细胞基因组DNA试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成AP1AP2

保存-20℃

50次250μl25ml10ml

100次500μl50ml20ml

200次1ml100ml40ml缓冲液AP3/EWB

15ml 25ml 50ml室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇15ml 25ml 50ml室温 第一次使用前按说明加指定量乙醇洗脱缓冲液EB 室温吸附柱AC 室温收集管〔2ml〕 室温

15ml50个50个

20ml个100个

40ml个200个12个月不影响使用效果。杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio杭州昊鑫生物科技股份“://hzhxbio/“htpp://hzhxbio--2-储存事项:、AP3/E低温时可能消灭析出和沉淀，可以在65℃水浴几分钟帮助重溶解〔AP3参加乙醇前可加热，参加乙醇后不行加热，恢复澄清透亮后冷却到室温即可使用。pH盖紧盖子。产品介绍：DNA吸附柱和型独特的溶液系统，适合于从真菌组织细胞中快100mg20mg枯燥需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀，并能快速高效地去除多糖类、酚类和酶抑制物等DNAPCR、酶切和杂交等试验。〔细胞〕磨碎后经裂解液裂解；蛋白质、多糖、细胞残片通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,DNA从硅基质膜上洗脱。产品特点：可重复性好。抑制了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。快速，简捷，单个样品操作一般可在1小时内完成。数种去多糖、多酚成份和屡次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反响。留意事项使用转速可以到达13000rp如Eppendorf5415C或者类似离心机。开头试验前将需要的水浴先预热到65℃备用。缓冲液AP3/E中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避开沾染皮肤，眼睛和衣服。假设沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。不同来源的真菌组织细胞材料中提取DNA100mg颖组织典3-25μ。洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，也可以使用水洗脱，但应当确保pH7.5，pHDNA应当〔10mMTris-HCl，1mMEDTpH8.0EDTA真菌种类简单，没有一种试剂盒可以提取全部种类的真菌DNA。假设有的真菌多糖多酚含量过于丰富、次级代谢产物太简单导致本试剂盒效果不佳，可以选择DN14CTABDNA提取试剂盒提取真菌，一般该试剂盒对于多DNA提取效果良好。操作步骤：〔试验前请先阅读留意事项〕提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中参加指定量无水乙醇，充分混匀，参加后请及时在方框打钩标记已参加乙醇，以免屡次参加!第一次使用前请先在缓冲液AP3/E中参加指定量无水乙醇!取适量真菌组织在研钵中参加液氮充分碾磨成细粉。离心管，不要解冻，参加400μlAP14μlRNaseA(10mg/ml)，旋涡振荡，充分混匀帮助裂解。10秒的步骤帮助裂解。大多数状况下不需要离心去除未完全裂解的组织，由于后面有一个离心去除的步骤。AP1参加2%PVP40，000;多酚含量特别高AP10.2%beta巯基乙醇。也可两者同时参加。65102-3次，混合样品。130μl缓冲液AP2514,000rpm5-10分1.5ml离心管，留意不要吸到界面物质。1.5AP3/E请先检查是否已参加无水乙醇!吹打混匀。AP3/E可能会消灭絮状沉淀，但不影响DNA提取。留意将AP3/E直接参加到上清并马上吹打混匀。〔包括可能消灭的沉淀AC〔吸附柱放30-60秒，倒掉收集管中的废液〔650μl离心，弃废液，再参加剩余的溶液，再次离心。600μlW〔请先检查是否已参加无水乙醇!12,000rpm30弃掉废液。600μlWB，12,000rpm30秒，弃掉废液。漂洗液中残留乙醇抑制下游反响。取出吸附柱AC吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓rpm1分钟。将得到的溶液重参加2分钟，12,000rpm1分钟。洗脱体积越大，洗脱效率越高，假设估量和需要产量高，可增大洗脱体积，假设需要DNA但是最小体积不应少于50lDNADNA产量。假设要长时间存放，可以放置在－20℃。问题与解决方法问题 评论与建议DNA产量低

*处理材料过量或者裂解不完全-建议：使用适量的起始材料，充分研磨或者匀浆*结合条件不恰当-建议：51.5倍体积AP3/E量要准确RNA残留未提取到DNA

*RNA含量太丰富-建议：提高RNaseA处理浓度*漂洗液WB中遗忘加无水乙醇-建议：第一次试验时，在漂洗液WB中参加指定量无水乙醇。*研磨裂解不充分，团块多；裂解物太粘稠；离心力太小-建议：参离心柱堵塞 见步骤2，加一个离心步骤去除；减低起始材料量，不要处理过量，加大离心力洗脱下来的DNA溶液带颜色或者膜上有明显的色素残留

*漂洗次数不够-建议：8500μl乙醇再漂洗一遍*起始材料太多过量-建议：削减起始处理材料，不要过量洗脱下来的DNA产量低

*离心柱残留有较多乙醇或者底部不慎沾有乙醇-建议：确保做了步9，否则残留乙醇会影响洗脱效率。*使用了水或者其它非最正确液体代替洗脱缓冲液-建议：认真阅读步105和只使用洗脱缓冲液EB洗脱。*洗脱缓冲液量偏低-建议：200μl洗脱缓冲液洗脱特别偏高DNA下游酶切不能切开或者酶切不完全

*一些硅基质膜成分一起洗脱下来，干扰了吸光值-建议：将洗脱的DNA1