说明书载体图谱pmd 19t

TakarapMD®19-T宝生物工程(大连)有限公司pMD®19-TVector是一种高效克隆PCR产物（TACloning）的专用载体。本载体由pUC19pUC19XbaI和SalI识别位点之间插入了EcoRV识别位点，用EcoRV3“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR3’由于本载体以pUC19载体为基础构建而成，所以它具有同pUC19载体相同的功能。此外，本制品中的大大方便了实验操作。本制品中的ControlInsert（500bp）Control本载体与pMD®18-TVectorβ-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，pMD®19-TVector（50μl×1μl×1Solutionμl×2 存：- TAPCR对克隆后的PCR产物使用BcaBESTTM pMD®19-TVector- 页制品说 制品内 pMD®19-TVector的结 实验操 ControlDNA片段的克隆实 一种可供选择的快速克隆 相关说 使用注 【pMD®19-TVectorBcaBESTSequencingPrimerM13-47bindingBcaBESTSequencingPrimerRV-MbindingLacZColE1pMD®19-T1Control135μl（等量）SolutionI。3）16℃反应30分钟。注）①室温（25℃）X-Gal、IPTG、AmpLPCRControl（cfu/μg效率＋90-0DNApMD®19-T1Insertupto55μl（等量）的SolutionIpMD®19-TVector是一种高效克隆PCR产物（TACloning）的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成，在pUC19XbaI和SalI识别位点之间插入了EcoRV识别位点，用EcoRV进行酶切反3‘端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR产物的由于本载体以pUC19载体为基础构建而成，所以它具有同pUC19载体相同的功能。此外，本制品中的ControlInsert（500bp）ControlpMD®19-TVector（50 20μl×1ControlInsert（50 10μl×1Solution 75μl×2* TAPCR对克隆后的PCR产物使用BcaBESTTMSequencingPrimers、M13Primers进行DNA(2,692bp)pMD®19-T(2,692bp)--【pMD®19-TVectorBcaBESTSequencingPrimerM13-47bindingBcaBESTSequencingPrimerRV-MbindingLacZColE1ControlDNADNA5μlpMD®19-T1Control135μl（等量）的SolutionI。3）1630注）①室温（25℃）②5全量（10μl）100μlJM1093042451890μlSOC培养基，3760X-Gal、IPTG、Amp的LPCRControl连接/（cfu/μg效率＋90-0*DNAInsert一般DNADNA5μlpMD®19-T1Insertupto55μl（等量）的SolutionI

-注） PCR（2kb）DNAX-Gal、IPTG、AmpLPCRpMD®19-T1Insertupto55μl（等量）SolutionI。3）16℃反应30分钟。注） PCR（2kb）DNA pMD®19-TVector Control尔数约为0.15pmol。 在进行克隆时，VectorDNAInsertDNA1：2～10 DNA1630注） 室温（25℃）也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低 5 PCR（2kb）DNA全量（10μl）100μlJM1093042451890μlSOC培养基，3760X-Gal、IPTG、Amp的LPCR一种可供选择的快速克隆法DNA5μlpMD®19-T1Insertupto55μl（等量）的SolutionI。3）1630注） 室温（25℃）也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低 5 PCR（2kb）DNA4）2μl上述连接液（10ngVectorDNA）microcentrifugetubes2min。5）50μlE.coliJM109CompetentCellmicrocentrifugetubes5min。6）X-Gal、IPTG、AmpL-琼脂平板培养基上培养（3730 pMD®19-TVector Control0.15pmol。 InsertDNA在进行克隆时，VectorDNAInsertDNA的摩尔比一般为：1：2～10 DNA片段的方法，可--InsertDNAInsertDNATakara（TakaraCode：D301D823A）InsertDNA进行克隆时，VectorDNAInsertDNA1：2～10，我们可以根据自己的实验情况VectorDNAInsertDNA的摩尔数比。InsertDNA使用量的计算方法如下：InsertDNA（ng）=nmol660×InsertDNAbp1μl（50ng）0.03pmol。片段成功插入至p®19-TVeco中后，一般情况下-半乳糖苷酶的表达将受到破坏，重组克隆体在含有X-alIPTAp的L-片段LacZ2kb的PBcaBESTMSequecngPriesP扩增。ControlInsert100.1ng的pUC19PlasmidDNA100μl900μl的SOCμl），记录菌落数。以得到200个克隆体为例计算转化效率，此时的转化效率=200cfu/0.001ng=2×105cfu/ng=2×108cfu/μgpUC19DNA。SolutionI克隆时使用的InsertDNA片段（PCR产物）建议进行切胶回收纯化，否则PCRDNA（甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段、残存引物等杂质都会影响TA克隆效率。20μlDNADNA剂（TakaraCode：D605A）DNA的回收率。连接反应请在25℃以下进行，温度升高（>26℃）较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长本制品来源于pUC19载体，因此，适合pUC19载体的感受态细胞都可以使用，如：JM109

-InsertDNA回收时可使用Takara凝胶回收试剂盒（TakaraCode：D301D823A）。进行克隆时，VectorDNAInsertDNA1：2～10，我们可以根据自己的实验情况选择合适的VectorDNA和InsertDNA的摩尔数比。InsertDNA使用量的计算方法如下：本载体1μl（50ng）的摩尔数约为0.03pmol。DNApMD19-TVectorβ--GalITAp的LDNALackb的DNAPRBaBETMSequncingPrimes，PC使用试剂盒中提供的ControlInsert，可以进行10次阳性对照实验。cfu/ng=2×108cfu/μgpUC19DNA。SolutionI克隆时使用的InsertDNA片段（PCR产物）建议进行切胶回收纯化，否则PCR产物中的短片段DNA（甚至是电泳也无法确认的非特异性小片段、残存引物等杂质都会影响TA20μlDNA备进行电转化时，需对连接液进行乙醇沉淀，纯化DNA剂（TakaraCode：D605A）可以提高DNA的回收率。连接反应请在25℃以下进行，温度升高（>26℃）较难形成环状DNA。连接效率偏低时，可适当延长pUC19载体，因此，适合pUC19JM109.确认KOD、Pfx、Pfu等）扩增的PCR产物是平滑末端，不能直接进行TA纯化PCR产物。最好使用切胶回收的PCR片段，以除去PCR产物中的非特异性片段和引物等杂Takara（TakaraCode：D301D823A）108cfu/μgpUC19DNADNA片段的立体结构、DNA片段的长短都会影响克隆效率。一般情况下，大片段DNA的克隆效率（连接效率与转化效率）进行切胶回收纯化DNA片段时，不要使DNASolutionIDNADNA片段较短（500bp）LacZ基因的读框，此时平板培养基上出DNA本载体来源于pUC19载体。因此，用于pUC19pMD®19-TVector与pMD®18-TVectorpMD®19-TVector与pMD®18-TVector相比，β-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示的蓝色更深。pMD®18-TVector连接转化后，一般要经37℃过夜培养，然后再将其于冰箱内pMD®19-TVector10（37℃）便可以呈色。因此，pMD®19-TVector比pMD®18-TVector更适合于蓝白菌落的筛选。--技术咨询热线：技术咨询热线：0411-宝生物工程（大连）有限公司TakaraBiotechnology(Dalian)Co., 真址：KOD、Pfx、Pfu等）PCRTAPCRPCRPCR质。进行切胶回收时可以使用Takara凝胶回收试剂盒（TakaraCode：D301或D823A）。108cfu/μgpUC19DNADNADNADNADNADNADNADNA（500bp），LacZ基因的读框，此时平板培养基上出欲对克隆DNApUC19pUC19pMD®19-TVector与pMD®18-TVectorpMD®19-TVector与pMD®18-TVector相比，β-半乳糖苷酶的表达活性更高，菌落显示蓝色的时间缩短，菌落显示