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文档简介

细胞因子原液肽图分析〔胰蛋白酶裂解法〕标准操作规程《中华人民共和国药典》2005年版第三部。范围：适用于细胞因子原液的检定。目的：对细胞因子原液进展肽图分析。原理：因胰蛋白酶能选择地水解蛋白质中由赖氨酸Lys或精氨酸Arg的羧基所构成的肽链，所以用胰蛋白酶将目的蛋白水解成各特异肽段，用反相柱在乙腈的梯度洗脱条件下将各肽段加以分别鉴定。内容：材料样品：经二人核对批号后测定。试剂TRCK〔sigma；碳酸氢铵 NHHCO 分析纯4 3三氟乙酸 CFCOOH 分析纯3乙腈 CHCHCN 色谱纯3 2冰乙酸 CHCOOH 分析纯3比照品:由中国药品生物制品检定所供给。注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。其它材料0.2ml仪器、设备HPLC：C8C18680电脑打印机扭力天平，TN100B型器皿200ml；500ml、1000ml；1000ml；以上均由本室洗刷组处理干净。方法预备工作“使用中”标志牌。调试仪器设备HPLC：C8C18680电脑打印机，确认运行状态完好，已挂有“备用”标志。配液2．1．3．11%碳酸氢铵，1000ml4 3日期，室温放置。2．1．3．250%乙酸，100ml200ml100ml，注入玻璃瓶中，盖上胶塞，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期室温放置。0.1%三氟乙酸-A1000ml1000ml玻璃瓶内，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，室温放置。B玻璃瓶内，盖上胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，室温放置。2．1．3．520%乙醇500ml，500ml盖紧胶栓，二人复核，贴签，标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期，室温放置。具体操作步骤见设备标准操作规程。样品处理：将浓度为1mg/ml的样品对超纯水充分透析，冻干样品用NHHCO

透析1：50〔W/W〕TRCK4 3 4 30.45μm分析方法：用反向HPLC〔RP-HPLC〕对离心上清进展分析。色谱柱为蛋C8C18100μl，流速为1ml/min，流淌相A70min，A100%30%，B070%，214nm。按挨次关闭所使用的仪器，拔下电源。场地摘下“使用中”的标志牌，挂上“待处理”标志牌。结果判定测定一次。判定结果、填写纪录：测定结果须经二人复核后填写记录。清场称药后将药品瓶盖盖紧，放回原处。“使用”牌，挂上“备用”牌。用过的玻璃器皿用纯化水冲洗干净后返回洗刷组。检查是否关闭全部仪器开关，拔下电源。取下仪器“使用”牌，挂上“备用”牌。用抹布擦净工作台，用拖布

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