白术薄层色谱鉴别研究

白术薄层色谱鉴别研究

中药白术是蔷薇科植物科的一种干燥根茎，被《虚拟农经》所述。具有健脾益气、除湿利尿、止汗安胎的功效。白术内酯Ⅲ是白术中的活性成分之一,经药理实验表明其有抗炎、抗癌作用;此外,苍术、白术两者同源,功效较为接近,古时常不分二术,直到张仲景之后,始将二者分开使用。本研究通过对两者进行薄层的图谱比较,确定白术内酯Ⅲ为可区分白术和苍术的成分之一。本文以白术内酯Ⅲ为指标性成分,建立白术薄层色谱鉴别方法,以期为白术的质量控制提供依据。1实验仪器及设备半自动点样仪LINOMATⅣ(瑞士CAMAG);双槽展开缸PF562C(瑞士CAMAG);薄层色谱摄像仪REPROSTAR3(瑞士CAMAG);薄层色谱视频摄像系统Videostoresystem(瑞士CAMAG);薄层加热板TLCPlateHeaterIII(瑞士CAMAG);SartoriusBP211D型电子分析天平;KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。薄层板:硅胶H254预制板(10cm×10cm,20cm×20cm,烟台汇友硅胶开发有限公司),110℃活化60min,新鲜制备。所用试剂均为分析醇(上海化学试剂公司)。白术内酯Ⅲ对照品均由上海中药标准化中心提供,经HPLC检测,其纯度在98%以上。用于薄层鉴别的白术及苍术药材样品由上海中药标准化研究中心吴立宏博士鉴定。2供试品溶液及点样的制备2.1对照品与供试品溶液制备2.1.1对照品溶液制备称取白术内酯Ⅲ对照品适量,用甲醇溶解制成每毫升含0.125mg的对照品溶液。2.1.2供试品溶液制备取本品中粉约0.5g,置100ml具塞锥形瓶中,加甲醇10ml,超声提取30min,静置,滤过,滤液挥干,用1ml甲醇溶解,即得供试品溶液。照薄层色谱法实验,分别吸取上述各样品的供试品溶液和对照品溶液各10μl,分别用微升定量注射器借助半自动点样仪成条带状点于同一块硅胶G板上,以正己烷-醋酸乙酯(3.5∶1)为展开剂,预饱和20min后上行展开8cm,取出晾干。喷以10%的硫酸乙醇溶液,105℃加热至斑点显色清晰,于366nm下观察,供试品色谱中,在与对照药材,对照品色谱相应的位置上有相同的荧光斑点。见图1。3讨论3.1样品预处理方法确定对正己烷、氯仿、甲醇3种溶剂进行了考察,以上提取溶剂得到的薄层色谱信息相同,考虑到经济性和方便性,最终确定甲醇超声提取30min作为样品预处理方法。另外,对样品点样浓度进行了考察,最终确定的点样浓度如样品制备项下所述,既充分显示的斑点信息,又能保证样品不拖尾,不超载。3.2c-2-甲基苯基-3-甲基环已烷-3,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-特,6,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,101,101,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-特,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-四氢-四氢-四氢-四氢-四氢-四氢-四氢-四氢-四氢-四氟-3-三烷-三烷-三烷为获得最佳展开效果,试验了多种展开系统:正己烷-醋酸乙酯(3∶1,3.5∶1,6∶1,5∶1,20∶1),石油醚-醋酸乙酯(3∶1,3.5∶1,6∶1,5∶1),环已烷-醋酸乙酯(3.5∶1,5∶1)。在以上试验基础上再进行优化,最后确定展开剂系统为正己烷-醋酸乙酯(3.5∶1),该条件下得到的色谱分离度好,斑点清晰、Rf重复性好。3.3液喷雾显色结果比较了5%香草醛/硫酸和10%硫酸乙醇溶液喷雾显色效果,5%香草醛硫酸显色后得到的色谱信息并不多,而10%硫酸/乙醇显色后得到的366nm下荧光色谱信息较丰富。3.4基于成果的鉴别用药白术和苍术均为苍术属(Atractylodes)植物,白术临床主要用于补脾气,性温,味甘,微辛带苦,功能健脾益气、燥湿利水、止汗安胎,用于脾虚食少、腹胀泄泻、痰饮、水肿、胎动不安等症,而苍术以燥湿为主,两者功效不同。古时常不分二术,直到张仲景之后,始将二者分开使用。从图1可以看出,在与对照品相同的位置上,苍术不显斑点,本实验用白术内酯Ⅲ作为白术的专属定性鉴别成分比较合适。另外,用以上薄层色谱条件可以清晰的看出苍术和白术化学成分差别显著,但具体是何种成分有待进一步研究。3.5质构及热反应另外,在摸索白术薄层色谱条件时发现,加热温度对样品色谱信息有影响,由图2中可以看出显色后随着温度的升高和加热时间的增长,斑点会明显减少,苍术样品表现的更为突出,根据文献论文报道,苍术酮很不稳定,对光对热都不稳定,会向白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ发生转化;白术内酯Ⅲ会在加热的条件下向白术内酯Ⅱ转化,这也印证了为什么白术内酯Ⅲ的颜色会随加热时间发生变化(李伟.《白术的有效物质及质量研究》.南京中医药大学,2001硕士论文)。为此本实验用相同的实验条件重现该脱水反应,发现与文献报道的白术内酯Ⅲ会脱水生成白术内酯Ⅱ并不一致,究竟生成何种物质,本课题组将作进一步研究。3.6覆药与假药的鉴别《中国药典》上采用苍术酮在薄层层析板上的显色反应作为定性指标。如图3所示,《中