中药动物药的开发

中药动物药的开发

动物药在中国有着悠久的使用历史，关于动物药物的许多最早的记载都有详细的记录。东汉《神农本草经》收载药物365种,其中动物药有67种,唐代《新修本草》收载动物药128种,明朝《本草纲目》中动物药即增至461种。据文献报道,我国有药用动物约1850种,主要是脊索动物门、节肢动物门和软体动物门的动物,其次是环节动物门和棘皮动物门。动物药有“血肉有情之品”、“行走通窜之物”之说,中医认为其功效常常是植物药、矿物药所不能替代的。从功效看,动物药的作用可概括为破血逐瘀、攻坚破积、祛风止痒、搜风通络、壮阳益肾、消癥散结等。为了更好的开发利用动物药资源,本文结合《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》),从品种、鉴别、检查、含量测定方面对动物药的研究应用现状进行了综述。1药药使用约束《中国药典》2010年版一部收载动物药93种,其中正文收载50种,附录收载43种(成方制剂中本版药典未收载的药材和饮片,以下统计均为正文收载品种),成方制剂和单味制剂中有369个处方中使用了动物药。对正文收载的50种动物药进行统计,发现多基源品种现象较为突出,达24个,涉及药用动物76种,其中收录于《濒危野生动植物种国际贸易公约》(ConventiononInternationalTradeinEndangeredSpeciesofWildFaunaandFlora,简称CITES)附录Ⅱ的共有10种,收录于《国家重点保护动物名录》的一级保护动物有2种,二级保护动物有13种。见表1。我国于1980年加入CITES公约,1989年发布了《国家重点保护野生动物名录》。中国药典委员会积极响应,于1993年修订删除了虎骨、犀牛角,1995年删除了熊胆、玳瑁、豹骨;在中成药处方中限制使用天然麝香、天然牛黄,积极支持和合理引导使用如体外培育牛黄、人工牛黄、人工麝香、水牛角等替代品。许多学者对这些药材的替代品做了深入的研究,以确保动物药继续发挥其优势。《中国药典》2010年版一部药材和饮片未收载人工麝香,但在许多成方制剂处方中明确要求使用人工麝香,如十香返生丸、仁青常觉等。朱秀媛等经动物药理实验和临床药理发现人工麝香具有开窍醒神、活血通经、消肿止痛、化腐生肌和解毒的功能,证明其药理作用与天然麝香基本相同。国家食品药品监督管理局《关于牛黄及其代用品使用问题的通知》中对牛黄及其代用品的使用作出了一系列规定,对于国家药品标准处方中含牛黄的临床急重病症用药品种,包括安宫牛黄丸等42种和国家药品监督管理部门批准的含牛黄的新药,可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄替代牛黄等量投料使用,但不得以人工牛黄替代;其他含牛黄的品种可以将处方中的牛黄以培植牛黄、体外培育牛黄或人工牛黄替代牛黄等量投料使用。2动物药鉴定的应用进展动物药的鉴别方法与植物药一样,主要采用性状鉴定、显微鉴定、理化鉴定等方法,但远较植物药困难。过去,主要依靠传统的性状鉴别;近年来,应用现代科学技术和方法于动物药鉴定的研究、应用日渐增加,为动物药的真伪和品质优良度的鉴定提供了科学的方法。下面结合《中国药典》讨论动物药的鉴别发展。2.1中药的共性特征动物药来源复杂,既有动物的全体也有动物的一部分,还有动物的生理、病理产物及动物的加工品。同时,动物的演化千差万别,从低等动物到高等动物,物种范围广泛,种类间差别极大。所以,对于动物类中药的显微鉴定难以像植物类中药那样可归纳出较多的共性特征。但是,动物类中药的显微鉴定原理总体来说还是建立在动物的细胞、组织及器官的微观差异基础上。《中国药典》2010年版一部与2005年版相比较,使用显微鉴别的动物药从土鳖虫、水牛角、地龙、珍珠、珍珠母、桑螵蛸、羚羊角、僵蚕、麝香等9种,增加了乌梢蛇、全蝎、穿山甲、海马、桑螵蛸、蛤蚧,共计15种。此外,《中国药典》2010年版中有109种中成药的鉴别项中使用了动物药的显微鉴别,如追风透骨丸的鉴别中有地龙的显微鉴别,清咽利喉丸中有僵蚕的显微鉴别等。对这109种中成药显微鉴别中使用的动物药进行统计发现,使用频率较高的是僵蚕、全蝎、珍珠、土鳖虫、水牛角等,在一定程度上反映这些药材的显微特征为中成药鉴别的专属性特征。见表2。2.2薄层鉴别测定薄层色谱法(ThinLayerChromatography,简称TLC)是药材和饮片鉴别、成方制剂和单味制剂质量标准的主要研究和控制手段之一,其操作简便、设备简单、成本相对低廉、分离快速,在中药鉴别领域中广泛应用。薄层色谱鉴别在我国各版药典药材和饮片中的应用增幅较大,2005年版药典共收载1507项,2010年版药典仅新增就达2494项。另外,成方制剂和单味制剂的质量标准研究也大量采用了薄层色谱鉴别法。《中国药典》2010年版一部中采用薄层色谱法鉴别的动物药共计17种,分别是人工牛黄、九香虫、土鳖虫、牛黄、水蛭、地龙、体外培育牛黄、龟甲、阿胶、穿山甲、猪胆粉、鹿角胶、鹿茸、斑蝥、蛤蚧、蜂胶、蟾酥。与2005年版相比较,新增九香虫、龟甲和蛤蚧3种。另外,有90种中成药的鉴别项中采用了动物药的薄层鉴别,例如二十五味珍珠丸中使用胆酸对照品进行体外培育牛黄的薄层鉴别,伸筋丹胶囊中使用地龙对照药材进行薄层鉴别等。中成药成分复杂,进行鉴别时如何选定分析检测成分,如何选择其分析的对照品,十分重要。根据处方组成,鉴别时应首选君药与臣药、贵重药以及剧毒药。由表3可看出,中成药使用薄层色谱鉴别时,对照品中使用胆酸最多,其次是猪去氧胆酸、熊去氧胆酸、去氧胆酸等;对照药材中使用人工牛黄和蛇胆汁最多,其次是蟾酥和地龙。因此,中成药薄层鉴别主要针对处方中的人工牛黄,其次是处方中的蛇胆汁和蟾酥。2.3多组分混合物分离分析方法气相色谱法(Gaschromatography,简称GC)分离选择性好、柱效高、速度快、检测灵敏度高、式样用量少、应用范围广,为当代最有利的多组分混合物分离分析方法之一。麝香是《中国药典》2010年版一部唯一采用气相色谱法鉴别的动物药,其检测成分为麝香酮。采用气相色谱法鉴别的中成药有贝羚胶囊、牛黄抱龙丸、安宫牛黄丸、安宫牛黄散、苏和香丸、局方至宝散、复方珍珠散(珍珠散)、神香苏合丸、紫雪散(紫雪)、麝香抗栓胶囊、麝香保心丸、麝香祛痛气雾剂、麝香祛痛搽剂、周氏回生丸等14种,检测成分均为麝香酮。2.4链式反应法—新的鉴别方法《中国药典》2010年版一部动物药新增加的鉴别方法有聚合酶链式反应法(Polymerasechainreaction,简称PCR)和高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography,简称HPLC)。PCR是一种以双链DNA为模版,利用两端两个单链寡核氨酸引物,在热稳定DNA聚合酶(Tap酶)的催化下,通过碱基配对沿5’→3’方向延伸,合成模版的互补链,在体外快速扩增特异DNA片段的技术。《中国药典》2010年版一部中乌梢蛇和蕲蛇使用了聚合酶链式反应法进行鉴别。蛇类药材伪品、混淆品很多,且作伪掺伪技术高,很难用性状鉴别或其他鉴别方法进行鉴别,聚合酶链式反应法的使用可以从根本上解决这些问题。HPLC分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高,特别适宜分析挥发性低、热稳定性差、相对分子质量大的高分子化合物以及离子型化合物。名贵中药哈蟆油是《中国药典》2010年版一部中唯一使用HPLC进行鉴别的动物药,以其镇咳有效成分1-甲基海因为对照品进行鉴别。3生物活性成分的检测动物药含水分较多,易霉坏变质,故多规定水分检查。其他检查项目如总灰分、重金属、砷盐等可根据具体情况而定。有些药材浸出物指标能明显区别药材的质量优劣,可结合用药习惯、药材质地及已知化学成分类别等,选定适宜的溶剂,测定其浸出物量,但须具有针对性和控制质量的意义。《中国药典》2010年版一部动物药检查项收录情况见表4。其中黄曲霉毒素检查是2010年版药典新增的检查项目,黄曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物,是一种致癌物质。检查黄曲霉毒素是新版药典中新增的检查项目,动物药中唯一收载黄曲霉毒素检查项的是僵蚕。4化学药中的动物药中药的含量测定就是测定其某类或某种成分的含量高低,从而作为判断该中药的质量优劣的指标之一。含量测定主要方法有高效液相色谱法、气相色谱法、分光光度法、薄层扫描法等。《中国药典》2010年版一部中进行含量测定的动物药有15种,见表5。所采用的含量测定方法有7种,其中新增滴定法用于测定石决明、牡蛎和蛤壳中的碳酸钙含量。石决明、牡蛎和蛤蚧作为贝壳类药材,其主要成分为碳酸钙,用滴定法测定其碳酸钙含量可评价药材的质量。《中国药典》2010年版一部中有31种中成药的含量测定成分为处方中动物药的有效成分,见表6。所采用的测定方法有3种,以HPLC为主,测定成分主要是蟾酥和牛黄的有效成分。5动物药的应用《中国药典》是我国记载药品规格和标准的法典,具有法律约束力,保证了用药的安全性和有效性,反应了我国药品生产、医疗和科学技术水平,预示了我国医药行业发展的方向。《中国药典》2010年版一部与之前几版药典相比较,增加了收录品种数量,改善了鉴别方法,加强了安全性检查,完善了含量测定。动物药作为《中国药典》的一部分,其收录的品种数量增加,积极寻找人工代用品从而保护动物资源;其鉴别项有改善,加强了传统的显微鉴别、薄层色谱鉴别、气相色谱鉴别方法的同时,增加了PCR、HPLC等现代先进有效的鉴别方法;其安全性检查越来越全面,特别是重金属检查和易霉变药材的黄曲霉毒素检查;其含量测定越来越完善,新增了滴