栀子金花丸中黄连、黄柏薄层鉴别研究

栀子金花丸中黄连、黄柏薄层鉴别研究

栀子黑李子是一种常见的中药，于2005年在《中国药典》版的第一部分出版。在检验过程中发现该品种黄连的鉴别存在问题,检测结果很难判定。通过对样品用量和中性氧化铝的用量进行考察,筛选出合理的样品处理方法,并增加了黄柏对照药材。结果排除了干扰,增强了方法专属性。结果满意。1试剂:复合药材,改革目,见表1定量毛细管(日本岛津),预制硅胶G薄层层析板(规格10cm×10cm,烟台大学生物科学与工程研究所,批号:20090324),MERCK薄层层析板(批号:OB678541)。中性氧化铝(100～200目、200～300目);试剂均为分析纯。黄柏对照药材(批号:120937-200506,中国药品生物制品检定所),黄连对照药材(批号:120913-200407,中国药品生物制品检定所),盐酸小檗碱对照品(批号:110713-200609,中国药品生物制品检定所);栀子金花丸(批号:090254、090425、090321,山东孔圣堂有限公司)。阴性样品:按处方工艺分别制备缺黄连阴性样品和缺黄连、黄柏阴性样品。2方法和结果2.1对照品溶液的制备供试品溶液的制备取本品20g,研细,加在中性氧化铝柱(200～300目,5g,内径2cm)上,用无水乙醇50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加乙醇2mL使溶解,作为供试品溶液。对照药材溶液的制备分别取黄连、黄柏对照药材各0.05g,分别加甲醇5mL,超声(功率:250W,频率:33kHz)处理15min,滤过,滤液加甲醇至5mL,作为对照药材溶液。对照品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,吸取供试品溶液4μL,吸取对照药材溶液和对照品溶液各1μL,分别点于同一预制硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂,置氨蒸气预饱和15min的层析缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,结果供试品色谱分离效果较差,虽然在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,有斑点出现,但因为杂质干扰严重,结果不易判断。见图1。2.2对照品溶液的制备供试品溶液的制备取本品5g,研细,加甲醇25mL,超声处理20min,滤过,滤液加至中性氧化铝柱(100～200目,5g,内径1cm)上,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,作为供试品溶液。阴性对照溶液①的制备取处方中除去黄连的阴性对照样品约5g,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。阴性对照溶液②的制备取处方中除去黄连、黄柏的阴性对照样品约5g,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。对照药材溶液的制备分别取黄连、黄柏对照药材各0.05g,分别加甲醇5mL,超声处理20min,滤过,滤液加甲醇至5mL,作为对照药材溶液。对照品溶液的制备:同原标准。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)试验,分别吸取阴性对照溶液①、阴性对照溶液②、供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各1μL,分别点于同一预制硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-浓氨试液(12∶6∶3∶3∶1)为展开剂,置氨蒸气预饱和15min的层析缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视,结果:供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照色谱中则无相应的荧光斑点,见图2。3讨论3.1黄进行吸附法分离原标准取样量(20g)过大,中性氧化铝使用量(5g)少,不能将样品中的干扰成分(主要是大黄)进行有效吸附,导致薄层底色中掩盖了黄连的成分,使得结果难以判断。同时,由于原标准中供试品系原粉直接加在氧化铝柱上,进行洗脱,提取时间长且提取效果差。因此,可采用增加中型氧化铝用量或减小取样量的方法处理样品,经试验比较,采用提取后过氧化铝柱的方法,简便且提取效果好。3.2专业试验由于处方中有黄柏药材会对盐酸小檗碱斑点干扰,故增加了黄柏对照药材作对照。3.3试剂的选择原标准展开剂含有毒性较大的苯,将苯改为