冷凝集标本对血细胞分析结果的影响及处理方法2020

冷凝集标本对血细胞分析结果的影响及处理方法韦理2021年1月13日星期三冷凝集与冷凝集素冷凝集（coldagglutination）是指由自身抗体引起的，红细胞在冷环境中的凝集成团的现象。冷凝集反应一般出现在31℃以下，在0～4℃时最强，红细胞凝集最明显；随温度的升高，抗原抗体复合物逐渐解离，凝块消失。冷凝激素（coldagglutinin）是指冷反应型抗红细胞抗体，这些自身抗体只能在低温时与红细胞膜相关抗原结合。正常人的血清中都存在低效价的冷凝集素，参考范围：效价＜1：32。冷凝集素的特点通常为IgM型单克隆抗体，继发于病毒感染的可有IgG。与红细胞膜相关抗原反应温度需低于31℃，在0～4℃时明显增强。当抗体滴度高、暴露于冷环境时间长，则可能由于补体参与而造成红细胞膜破裂而溶血。冷凝集素产生与冷凝集形成机制

冷凝集素产生机制：白血病，恶性淋巴瘤，全身性红斑狼疮，特发性血小板减少性紫癜，肝硬化，血吸虫病，丝虫病，疟疾，非洲锥虫病，非典型肺炎，传染性单核细胞增多症等，均可出现冷凝集素增高。这些疾病产生冷凝激素的机制可能各不相同的。其凝集常见于支原体肺炎、传染性单核细胞增多症等，一般认为，肺炎支原体等病原体感染人体后，能对人红细胞表面唾液酸上的I活性结构进行修饰，使其具有免疫原性，机体针对这一修饰过的结构产生抗体。冷凝集素产生与冷凝集形成机制

冷凝集形成机制：红细胞膜表面物质的构型会随环境温度的变化而发生改变。在体温条件下，红细胞膜物质的构型阻碍了冷凝集素与相应的抗原决定簇结合。而在较低温度时，红细胞膜表面物质的构型发生改变，某些抗原决定簇显露，能与相应抗体结合。这就是冷凝集素只能在低温时凝集红细胞，，而随温度的升高，凝集逐渐解离，消失的原理。冷凝集素临床评价：⑴一般认为，病毒和其他微生物感染产生的免疫反应的副产物中就有冷凝集素，但常人并不发生溶血。在慢性淋巴增生疾病、感染和肿瘤潜在发病的老年人中很可能突破常规，并出现单克隆抗体的特征(一般为K轻链或A轻链型)。⑵冷凝集素效价增高主要见于原发性冷凝集素综合征，其效价可高达1：1000以上，而轻度增高常见于非特异性炎症，间质性肺炎，自身免疫性疾病，多发性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤等。冷凝集与检验工作冷凝集与血库工作：患者血清冷凝集素增高时，给血型鉴定和交叉配血带来困难，这时应对血清进行冷凝集素检查，排除不规则抗体和多凝聚红细胞，才能确保输血的安全性和有效性。冷凝集与血细胞分析：患者血液中冷凝集素增高时，会不同程度地影响红细胞和白细胞的分析结果。如何鉴别冷凝集肉眼直接鉴别：高效价的凝集可肉眼直接观察.视频1

视频2如何鉴别冷凝集对于肉眼观察无明显颗粒的冷凝集标本，可利用下述规律：一般正常人Hb/RBC的比值约为30：1，Hb单位为g/L，RBC的单位为1012/L。若Hb/RBC的比值比30大很多，且MCH、MCHC异常升高，则提示有可能是冷凝集现象。

发生冷凝集后，血常规各结果会发生怎样的变化呢？

MCHC（g/dl）=

发生冷凝集后，血常规各结果会发生怎样的变化呢？

数据中RBC、HCT极低，RBC与HGB不成比例降低（二者比列约为1:30），且MCH、MCHC明显升高，血小板数、白细胞数和分类结果有可能不可靠。MCV=HCT/RBCMCH=Hb/红细胞计数MCHC=Hb/红细胞压积MCHC（g/dl）=

血红蛋白/红细胞=113/2.47=45.7肉眼并未见到凝集,涂片镜检发现缗钱样凝集.血红蛋白/红细胞=100/0.66=151.5肉眼观察血常规管可看到细砂样凝集.肉眼观察血常规管可看到块状凝集.导致以上变化的原因Sysmex系列仪器，检测RBC的原理是鞘流直流电阻抗法，稀释后的血液样本从喷头的前端喷出，被鞘液包着的血细胞从小孔中央，沿着一定的轨道一个一个通过，而冷凝集的血液样本，多个红细胞聚集后形成的红细胞团一起通过计数孔，引起RBC计数降低，同时聚集的细胞团也引起脉冲增大，导致MCV假性升高，但二者又以RBC计数减少为主，由此引起HCT也降低，从而造成由RBC、MCV、HCT计算得出的MCH、MCHC结果异常增高。冷凝集处理方案方法1：水浴法将室温调至25℃以上，标本立即放在37℃水浴中，约半小时后水浴箱内混匀，立即以闭盖模式上机测定（一般能纠正轻度和中度冷凝集）。冷凝集处理方案方法2：稀释法将室温调至25℃以上，准确吸取稀释液120ul放入EP管中，将EP管与标本一同放水37℃温水浴箱中温浴，30分钟后，准确吸取混匀后样本20ul加入稀释液中，充分混匀后，立即用XN-1000的稀释模式测定。（推荐方法）冷凝集处理方案方法3：实验室采集法将室温调至25℃以上，将患者叫到实验室内，在血细胞分析仪旁采集静脉血（采血前、采血中都用37℃水袋对血常规管进行保温），立即上机测定(数秒钟内立即上机测定)。前两种方法都无法很好纠正时，建议实验室采集发冷凝集处理方案方法4：血浆置换血浆法样本垂直放置，在管壁标记标本液面高度，样本以500g离心力离心5分钟，用移液器插至上清液与交界面3mm，缓缓将上层血浆取出弃掉，用生理盐水反复洗涤3-5次，再加入生理盐水至标记刻度，充分混匀后上机测定。（白细胞和血小板易在洗涤中丢失）冷凝集处理方案方法5：显微镜检查法：在以上方法均未能获得满意结果，回归传统的显微镜检查法：将血液标本和2.0ml的生理盐水同置37℃度水浴箱内孵育30min，后用加样器取孵育好的血液10u迅速加入2.0ml的温盐水中