高效液相色谱法测定化妆品中氢和苯酚

高效液相色谱法测定化妆品中氢和苯酚

作为一种消毒和防腐药物，苯乙二醇和氢乙二醇可用于皮肤伤口和湿疹，具有一定的美白效果。但由于它们的毒性大,长期接触会引起白血病及心血管疾病,我国卫生部2007年1月颁布的《化妆品卫生规范》中规定苯酚、氢醌为美白祛斑类化妆品的禁用物质。2007年卫生部颁布标准中测定方法在1999年标准基础上加以改进,推荐方法为高效液相色谱-二极管阵列检测器结合气相色谱-质谱联用分析法、气相色谱法、高效液相色谱法3种。对于可能出现的阳性结果第一种方法采用气相色谱-质谱联用确认,后两种方法使用保留时间定性,相关参考文献中也大多使用保留时间定性的方法。但由于化妆品种类繁多,基体复杂,单纯用保留时间定性可靠性差,容易造成“误判”。作者利用常规的高效液相色谱(紫外检测器)和紫外分光光度计,建立了反相高效液相色谱结合紫外法对化妆品中苯酚、氢醌定性确认和定量检测的方法,并对市场上不同品牌中高低档美白祛斑类化妆品进行测定,结果准确,可为没有配置二极管阵列检测器及气相色谱-质谱联用设备的化妆品生产厂家及质监部门提供一定参考。1实验部分1.1仪器、检测方法Agilent1100高效液相色谱仪(紫外检测器),Agilent色谱仪器公司;TU-1901紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限公司;超声波清洗仪,上海医用仪器厂;MettlerAE240分析天平(1/100000天平),梅特勒-托利多(上海)仪器有限公司。苯酚,分析纯,重结晶,汕头西陇化工厂;氢醌,色谱纯,sigma公司;甲醇,色谱纯,美国Tedia公司;其余试剂均为国产分析纯。1.2流动相、流速色谱柱:AgilentTC-C18(250mm×4.6mm,5μm);进样量20μL;流动相为V(甲醇)∶V(水)=55∶45,流速为1.0mL/min;紫外检测波长λ=280nm。1.3标准储备液配制精密称取苯酚标准品0.10701g,氢醌标准品0.09703g置于烧杯中,少量甲醇溶解,移至100mL容量瓶中,用甲醇稀释并定容,摇匀,配成质量浓度分别为1.0701g/L、0.9703g/L的标准储备液。精确称取化妆品试样约1.000g于具塞比色管中,加甲醇定容至10mL,超声提取20min,离心分离,取上清液以0.22μm滤膜过滤。2结果与讨论2.1检测波长的选择经紫外全波长扫描,苯酚、氢醌甲醇溶液在212nm、228nm及280nm处有较大吸收。考虑到在前两个检测波长下,流动相中甲醇的紫外吸收较强,基线不稳,且化妆品中许多组分都有吸收,造成较大干扰,故选择280nm为检测波长。另据有关文献报道,用ODS柱,甲醇为流动相,目标物无响应,经实验验证未曾发现类似问题。采用如下色谱条件:AgilentTC-C18色谱柱,流动相为甲醇/水(体积比55∶45),流速1.0mL/min,检测波长λ=280nm,进样量20μL,分析苯酚、氢醌混合标准溶液,结果见图1。由图1可见,苯酚、氢醌有较好的分离效果。根据对两种物质的标准溶液分别进样,确定氢醌的保留时间为3.692min,苯酚的保留时间为5.878min。2.2标准曲线的制备精密吸取标准储备液0.2mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL分别置于10mL容量瓶中,甲醇定容。按上述色谱条件,进样20μL测定。每份标液测定5次,取峰面积平均值,以峰面积A为纵坐标,相应的质量浓度为横坐标,作图得标准曲线,见图2。对标准曲线进行回归,得到氢醌的回归方程为:y=23.083ρ+1.049(r=0.9999);苯酚的回归方程为:y=12.861ρ+1.062(r=0.9998)。2.3加标回收率试验取氢醌质量浓度为97.03mg/L、苯酚质量浓度为107.01mg/L的标准溶液,补充进样3次,共8次,测得结果平均值为97.12mg/L和107.09mg/L,计算RSD分别为1.7%和1.9%。精密量取氢醌质量浓度为10.40mg/L、苯酚质量浓度为13.56mg/L供试液2mL,定量精确加入标准溶液(氢醌48.51mg/L、苯酚53.51mg/L)0.2mL、0.4mL、0.6mL、1.0mL,使用与样品相同的方法制备和测定,取5次测定平均值计算回收率,回收率在96.2%～102.8%,结果见表1。从表1中可知,该方法具有良好的准确度、精密度和重现性。2.4紫外光谱分析对南通大型商场、个体批发市场销售及美容院销售使用的38种中高低档美白护肤产品使用上述色谱方法进行苯酚、氢醌相对含量的测定,采用保留时间定性。其中购自大型商场的某著名欧产高级日霜及国产高级颈霜的分析结果见图3。由图3可见,样品色谱图中有一与标准物质保留时间相同的成分,若单纯以保留时间进行定性,势必得出化妆品中含有氢醌的结论,可能会引起对商品质量的“误判”。对标液和样品提取液进行紫外扫描,吸收光谱见图4。由图4可见,标液与样品溶液的紫外光谱吸收峰位置和形状完全不同,说明是两种不同的物质,从而确定样品中不含氢醌、苯酚。对38种样品测定结果,单纯以保留时间定性,发现有11种样品出现阳性结果,以紫外光谱和保留时间共同确认,最终在两个样品中检出氢醌和苯酚,定性结果与参照《化妆品卫生规范》中气相色谱-质谱联用确认结果完全一致。2.5b氢和苯酚质量分数将检出含氢醌的样品按1.3中样品溶液的配制方法处理,在上述色谱条件下测定5次,取峰面积平均值,按线性方程计算氢醌、苯酚的质量分数。样品一(某美白祛痘按摩膏)中氢醌、苯酚质量分数为13.6μg/g、19.7μg/g;样品二(某祛斑面膜)中氢醌、苯酚质量分数为21.7μg/g、16.2μg/g。3标准曲线及方法用甲醇超声提取目标物,高效