荧光免疫技术

第十八章荧光免疫技术

Chapter18FluorescenceImmunoassay

第一部分教学内容和要求一、目的要求.掌握：荧光免疫技术原理、类型及临床应用，常用的荧光物质；熟悉：荧光免疫技术的技术要点。了解：荧光素标物的制备与保存，镧系稀土元素标记物的制备，荧光免疫技术主要类型的技术要点。二、教学内容1.荧光标记物的制备：荧光和荧光物质，荧光标记物的制备。荧光免疫显微技术：基本原理，技术类型，技术要点，方法评价，临床应用。荧光免疫测定技术：时间分辨荧光免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用）荧光偏振免疫测定（基本原理，技术类型，技术要点，方法评价和临床应用）。第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题）如下有关荧光免疫技术完整正确的提法A.直观性检测抗原和抗体B.直观性检测抗原 C.直观性检测抗体D.间接检测抗原或抗体 E.间接检测抗原和抗体荧光素易受温度影响，操作时通常选择较佳的温度A.10°C〜15°CB.15°C〜20°C C.20°C〜25°C D.25°C〜30°C E.30°C〜35°C荧光抗体保存3〜4年，应选择A.小量分装、4C B•瓶分装、4C C•瓶分装、-10CD•瓶分装、-20C E.小量分装、-20C下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是A.光源 B.下列组成荧光显微镜的结构中，与普通光学显微镜相同的是A.光源 B.聚光器C.目镜D.物镜下列哪项方法不属于荧光免疫显微技术类型A.直接法B.夹心法荧光抗体染色标本的观察时间:A。当天 B。第二天荧光抗体间接法应标记A.抗原 B.抗体C.间接法D.补体法C。第三天D.1周内补体 D.抗抗体E.滤光片E.双标记法E.5天E.抗体及补体荧光显微技术常用于检验血清中各种自身抗体和多种病原体抗体的方法是A直接法B间接法C双抗体夹心法D.补体法 E.双标记法荧光抗体间接法可检测A.抗原B.抗体C.补体D.蛋白质 E.抗原和抗体在荧光显微镜检查中直接影响检测结果的是A.抗原荧光染色 B.抗体荧光染色 C.补体荧光染色特异性荧光染色 E.非特异性荧光染色11.主要用于测定各种激素、蛋白质、11.主要用于测定各种激素、蛋白质、酶、药物及病毒抗原的技术A. 荧光偏振免疫测定A. 荧光偏振免疫测定底物标记荧光免疫测定临床药物浓度检测的首选方法A.时间分辨荧光免疫测定D.流式荧光免疫技术B.荧光免疫显微技术E.流式荧光免疫技术B.荧光偏振免疫测定E.底物标记荧光免疫测定C.时间分辨荧光免疫测定C.荧光免疫显微技术最适合于时间分辨荧光免疫测定的荧光物质A.异硫氤酸荧光素 B.四乙基罗丹明 C.四甲基异硫氤酸罗丹明D.藻红蛋白 E.镧系稀土元素（Eu3+（二）多项选择题（X型题）对荧光素影响的因素有A.pH、温度 B.漠化物、碘化物等杂质 C.荧光素的浓度D.细胞固定剂 E.化合物常用的荧光素是指A.异硫氤酸荧光素B.四乙基罗丹明C.四甲基异硫氤酸罗丹明D.藻红蛋白 E。镧系稀土元素(Eu3+有关荧光显微技术中制作组织标本过程要求A.尽量保持抗原完整性 B.切片尽量薄C.用丙酮或乙醇固定 D.制好的标本尽快染色E.制好的标本无法及时染色、应置-20°C下低温干燥保存。荧光免疫显微技术在临床可用于检测A.血清中自身抗体的检测 B.各种微生物的快速检查和鉴定C.寄生虫感染的诊断 D.白细胞分化抗原的检测E.HLA分型检测5。 荧光显微技术在组织学检查中具有如下优点A.抗原或抗体的定位 B.抗原或抗体的定性检查C.抗原抗体反应的高度特异性 D.荧光标本能持久保存能在荧光显微镜下清晰地显示其形态、直观性强6。 间接荧光免疫法的优点是A.敏感性高于直接法B•制备一种荧光抗体即可检测多种抗原或抗体C.操作时间较短 D.不易出现非特异荧光反应参与的因素多二、填空题荧光免疫技术的主要类型包括和荧光物质有和荧光抗体染色技术可分为和镧系稀土元素标记物制备的螯合剂有 、和。荧光免疫测定根据抗原抗体反应后是否需要分离结合的与游的荧光标记物而分为和两种类型。非均相荧光免疫测定法包括和均相荧光免疫测定法包括和荧光素标记抗体的方法有和三、 名词解释.荧光免疫技术(fluorescenceimmunoassay).荧光效率(fluorescentefficiency)3.荧光寿命(fluorescencelifetime).荧光的淬灭(fluorescentdyked).荧光素(fluorescein)荧光抗体(fluorescentantibody)荧光免疫显微技术(immunofluorescencemicroscopy)非均相荧光免疫测定法(anevenphasfluoroimmunoassay)9.均相荧光免疫测定法(evenphasfluoroimmunoassay)时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)荧光偏振免疫测定(fluorescencepolarizationimmunoassay)四、 问答题试述用于标记的荧光素应具备什么条件？试述荧光免疫显微技术基本原理。试述荧光免疫显微技术的临床应用。试述荧光偏振免疫测定基本原理。试述荧光免疫显微技术基本原理。时间分辨荧光免疫测定法具有哪些优点？第三部分参考答案与题解一、选择题单项选择题(A型题)7.D8.BA2.B3.E4.D 5.B 6.A7.D8.BE10.E11.C12.B13.E多项选择题(X型题)ABCDE2.ABCD3.ABCDE4.ABCDE5.ABCE6.AB二、 填空题荧光抗体染色技术、荧光免疫测定技术。荧光素、其他荧光素物质（镧系稀土元素）。荧光免疫显微技术、流式荧光免疫技术。多羧基酸类螯合剂、8-二酮体类螯合剂、BCPDA和10菲洛林。均相、非均相。时间分辨荧光免疫测定、荧光酶免疫测定。荧光偏振免疫测定、底物标记荧光免疫测定。搅拌标记法、透析标记法。三、 名词解释荧光免疫技术：是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合起来的一种免疫分析技术。荧光效率：是指荧光物质将吸收的光能转变成为荧光的百分率。荧光寿命：指荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度时所用的时间。荧光的淬灭：指荧光分子在某些理化因素作用下、荧光分子的辐射能力受到激发光较长时间的照射后会减弱的现象。荧光素：是能产生荧光并能作为染料使用的有机化合物。荧光抗体：荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成，是免疫荧光技术的关键试剂。荧光免疫显微技术：是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。非均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后，先把Ab*Ag与Ab*分离，然后测定Ab*Ag或Ab*中的标记物的量，从而推算出标本中的Ag量，该方法称非均相荧光免疫测定法。均相荧光免疫测定法：在抗原抗体反应后Ab*Ag中的标记物失去荧光特性，则不需进行Ab*Ag与Ab*的分离，可以直接测定游离的Ab*量，从而推算出标本中的Ag量，该方法称为均相荧光免疫测定法。时间分辨荧光免疫测定：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素螯合物（如Eu3+螯合物）标记抗体或抗原，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。荧光偏振免疫测定：是利用荧光素经偏振光照射而跃入激发态，在回复至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧光偏振强度与荧光分子的大小成正比的关系而建立的免疫分析技术。四、 问答题用于标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团，结合后不易解离，而未结合者易清除；②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率；③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明；④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫学性质；⑤标记方法简单、安全无毒；⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。荧光免疫显微技术是以荧光显微镜为检测工具，用荧光素标记特异性抗体或抗抗体，检测固定组织细胞上的抗原或血清中的抗体，常用于定性和定位检查的一门技术。临床常应用于：①血清中自身抗体的检测；②各种微生物的快速检查和鉴定；③寄生虫感染的诊断；④白细胞分化抗原的检测。荧光偏振免疫测定基本原理：荧光偏振免疫测定是利用荧光素经偏振光照射而跃入激发态，在回复至基态后可释出光子，经偏振仪形成偏振荧光，荧光偏振强度与荧光