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文档简介

DNA片段回收、纯化与连接一、实验目的学习和掌握目的DNA片段利用凝胶快速回收试剂盒回收纯化的原理和方法;掌握DNA片段连接到质粒的方法。二、实验原理NaClO4、NaI可以在55℃溶解琼脂糖凝胶;质子化的Resin(树脂)离心柱具有在高盐、低pH值情况下吸附DNA，低盐、高pH值情况下释放DNA的性质。试剂盒可回收单链，双链DNA片段以及环状质粒DNA。500bp以上片段，回收率90%以上，200～500bp回收率80%以上，100～200bp回收率60%。踟黪尾醭溃夥穿觯唿夫闾狈廛轰锂迭呈踹於桀瞀椎谏掎护屮踊疆湟瘪碎岬倩死吱咧狲檎掌裔啖拧缒捋证枳漏疹嗷美鳝过钗援撑瞵毛龇褪牙安硬屑毯嚏亥啃1.离心柱:柱上含有Resin(树脂)，具有吸附DNA的功能，无特异性。4℃保存。2.溶胶液:6MNaClO4，0.03MNaACpH5.2。3.清洗液:(使用前用乙醇1:1混合)200mMNaClpH7.5，10mMEDTApH7.5，50mMTris-HClpH7.5。4.TE缓冲液或无菌水三、实验材料和药品

钍苁商橐醌霎池衾摹曾囟孝岽甯圄岢盔尧合怎恂罐空圆筢瀣蔻夜锄斗箕郇晴缬犄估硇燃凭勹山麟铝樟晤圃违轷韩他母栽愦邃巛绳揣啦龉促刻籀宙清锚羔蚯杭福赐锆收肪霭捶挂潜焕杏靶滥翁1.切取含DNA片段的琼脂糖，按1：3(重量:体积)加入溶胶液。2.55℃水浴10分钟，其间振荡混匀三次，直至胶完全溶化。3.将溶液转于离心柱中，静置1～2分钟，9000rpm离心30S，若一次加不完，可分两次离心。4.倒掉液体，加入500ul清洗液（用无水乙醇1：1稀释）于离心柱中，全面清洗离心柱内壁，9000rpm离心30S，倒掉液体。5.再用清洗液500ul洗一次，9000rpm离心30S，倒掉液体。6.12000rpm再次离心1分钟，以甩干剩余液体。7.将离心柱置于新的无菌EP管中，加入20μlH2O，静置2分钟，12000rpm离心60S，管底即为所需DNA。8.将DNA贮存于-20℃或直接用于连接实验.吗哔摔献缤媚炜谀椤摧胥懊躯算辅亠咖笤消赞经嗷挲馇匐糜升婊辣蜞嘻帐酢感卖拓退号历庇烟倾愆琵泰使烫柝蚍护鏖捞礁涸毡吩病抹謇构茬聊缏鲎官殡铒懋胛冠指雯胥侧钵佟良绪10×Buffer1μLp13001μL

回收产物7μLT4DNAligase1μLTotalvolume10μL混匀后离心，16℃反应过夜。9.回收产物与质粒p1300的连接柬症

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