染色体 实验报告

染色体标本的制备及组型实验生命科学学院张瀛【实验目的】掌握染色体标本的制作方法。认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。【实验用品】小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。【实验原理】染色体标本制作的原理选择活跃的组织：胸腺、骨髓、睾丸、小肠。（选择活跃的组织：胸腺、骨髓、睾丸、小肠。（也可选择人淋巴细胞，加入PHA可使细胞返幼成为淋巴母细胞。）施加药物使组织活跃：PHA、秋水仙素制作染色体标本的先决条件细胞具有旺盛的分裂能力设法得到大量的分裂中期细胞施加药物使组织活跃：PHA、秋水仙素制作染色体标本的先决条件细胞具有旺盛的分裂能力设法得到大量的分裂中期细胞染色体标本制作的四大要点PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。空气干燥：使细胞和染色体展开。固定：用camoy`ssolution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。染色体标本制作的意义根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。染色体标本制作的应用生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。21三体综合症：第21对常染色体多一条，结果这样的人生出来“先天愚型21三体综合症：第21对常染色体多一条，结果这样的人生出来“先天愚型”，伸舌；也有叫“伸舌样白痴”卵巢退化症：共45条染色体，性染色体为XO；外貌表现为女性，卵巢发育不全或无，1.5米以下，不能生育睾丸退化症:共47条染色体，性染色体为XY；外貌表现为男性，比一般男性高，睾丸发育不全，有女性样乳房，智力低下或超常，不能生育，发声尖高。典型的人类遗传病典型的人类遗传病因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。染色体组型把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。染色体核型染色体组型是染色体核型的模式表达。染色体组型及分群依据主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。每条染色体长度描述染色体的四个参数每条染色体长度单倍常染色体之和+X染色体1．单倍常染色体之和+X染色体1．相对长度=相对长度：可用来表示每条染色体的长度。长臂的长度（q）2．长臂的长度（q）2．臂指数=短臂的长度（p）短臂的长度（p）臂指数：可用来确定臂的长度。为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan提出划分标准：1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M）1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM）1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M）1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM）3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST）7．0以上：端部着丝粒染色体（T）短臂的长度（p）×100染色体全长（p+q）3短臂的长度（p）×100染色体全长（p+q）3．着丝粒指数=着丝粒指数：可决定着丝粒的相对位置。按Levan划分标准:50.0-37.5之间：中部着丝粒染色体（M）37.5-25.0之间：亚中部着丝粒染色体（SM）50.0-37.5之间：中部着丝粒染色体（M）37.5-25.0之间：亚中部着丝粒染色体（SM）25.0-12.5之间：亚端部着丝粒染色体（ST）12.5-0.0之间：端部着丝粒染色体（T）4．染色体臂数（NF）：根据着丝粒的位置来确定。端着丝粒染色体（T）：NF=1中部、亚中部、亚端部着丝粒染色体（M、SM、ST）：NF=2人类细胞染色体群染色体组型及分群依据主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次缢痕或随体的有无等方面。A群：1、2、3对，大，M，2着丝粒略偏中央。（可先找出2，再根据大小最大的选出1）B群：4、5对，大，SM，彼此不易区分。（根据最大的选出4）C群：6-12对和X，中，SM，6着丝粒近中央，X大小介于6、7之间，9长臂上有次缢痕，11短臂较长，12短臂较短。（先找出6，再根据最大的找出X，最小的找出12，其余按其特点依次找出）D群：13、14、15对，中，ST，有随体，彼此不易区分。（可根据大小找出13、15）E群：16、17、18对，中，16是M，长臂上有次缢痕，17、18是SM，18短臂较短。（可先找出16，再根据最小的找出18）F群：19、20对，小，M，彼此不易区分。（根据大小）G群：21、22对和Y，21、22对小，是ST，有随体，长臂常呈分叉状，彼此不易区分。Y染色体较21、22略大，也有近端着丝粒，无随体，长臂常彼此平行（可根据长臂是否分叉选出Y，再根据最小的选出22）【实验步骤】取雄性小白鼠以每克体重4μg注射秋水仙素。经14-16小时候，断头法杀死小鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%NaCl）洗去血污。(若使用骨髓细胞，则需剪断股骨，较粗的一端注射KCl溶液，使液体从另一端流入离心管，量大约2ml)放入装有1ml0.3%KCl液的小烧杯中剪碎。（呈乳白色）用铜网过滤到刻度离心管中，再加0.3%KCl液至4ml。37℃静置30分钟，进行低渗处理。以800-1000转/分离心8分钟。弃上清液，加入2ml甲醇冰醋酸固定液（3:1），并用吸管吹气，轻轻打散细胞，固定8分钟。再以800-1000转/分离心8分钟。弃上清液，加1ml固定液，制成细胞悬液，固定5分钟。取洁净的低温预冷载玻片，距10-15厘米高度滴下2-3滴细胞悬液，从一边轻轻吹气，并随时轻轻敲打，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。10．用滤纸擦去载玻片上多余液体，空气干燥或文火干燥，Giemsa染液染色30分钟。11．30分钟后细小水流冲洗玻片背面。置于显微镜下观察。【实验结果】显微镜下观察到染成蓝紫色的染色体。（见下图）【分析与讨论】秋水仙素注射时间长短要适当。由于低渗时间过长会破坏细胞，时间分配要合理。步骤2-3用时大约小于15分钟。步骤4静置约20min后就要开始离心机配平。步骤6同样。注意