磁粒法核酸提取的特点课件

磁珠式核酸提取体系磁珠式核酸提取体系核酸提取的总体要求高质量：纯度高并且尽可能不破坏核酸高产量：样本量一定时尽可能提取多的核酸高通量：同时提取多个标本自动化：降低劳动量；生物科技的飞速发展，需要处理的核酸样本迅速增多，自动化提取核酸成为一种迫切需要的选择。核酸提取的总体要求高质量：纯度高并且尽可能不破坏核酸磁粒法核酸提取的特点步骤：裂解→核酸结合→洗涤→洗脱特点：提取时间短不使用酚、氯仿用磁分离替代离心分离易于自动化，可以实现高通量提取目前处于市场发育阶段，是未来发展的方向主要产品为国外产品：Promega、Roche、KingFisher、Dynal等，大多需要与专用仪器配套磁粒法核酸提取的特点步骤：提取方式时间自动化酚、氯仿经典方法长难有玻璃粉法短难没有离心柱法短难没有磁粒法短容易没有各种提取方式操作比较提取方式时间自动化酚、氯仿经典方法长难有玻璃粉法短难没有离心磁粒法核酸提取基本步骤裂解细胞或病毒颗粒核酸与磁粒结合磁分离弃上清洗涤缓冲液洗涤磁粒磁分离弃上清洗脱液将核酸从磁粒洗脱磁分离弃磁粒，收集上清磁粒法核酸提取基本步骤裂解细胞或病毒颗粒结合洗涤洗脱磁粒法提取核酸示意图结合洗涤洗脱磁粒法提取核酸示意图磁粒提取试剂操作方式磁架磁笔自动提取仪磁粒提取试剂操作方式磁架裂解结合磁分离吸去废液洗涤洗脱磁架提取核酸示意图裂解结合磁分离吸去废液洗涤洗脱磁架提取核酸示意图裂解结合转移磁粒洗涤洗脱转移磁粒磁笔提取核酸示意图裂解结合转移磁粒洗涤洗脱转移磁粒磁笔提取核酸示意图自动仪器提取

自动提取的原理与磁笔提取相同，只是用机器的运转代替手工操作，实现高通量提取和减少工作量。自动仪器提取

自动提取的原理与磁笔提取相同，只磁珠提取方法的优化裂解：裂解液配方，作用时间和温度等结合：结合液的选择和用量等洗涤：洗涤液配方等洗脱：洗脱时间和温度等磁珠提取方法的优化裂解：裂解液配方，作用时间和温度等主要实验结果与其他方法或类似商业化试剂盒的比较核酸提取的灵敏度：HCVRNA，HIVRNA，HBVDNA主要实验结果与其他方法或类似商业化试剂盒的比较与Qiagen磁珠式核酸提取试剂盒的比较

HCVRNA提取比较Ct值方法HCV样本1HCV样本2HCV样本3Promega体系平行127.6030.2127.39Promega体系平行227.7230.8427.20Qiagenkit平行127.8639.0028.82Qiagenkit平行227.3333.5828.55与Qiagen磁珠式核酸提取试剂盒的比较HCVRNA提HBVDNA提取比较方法HBV样本1HBV样本2Promega体系平行126.6532.78Promega体系平行226.8432.52Qiagenkit平行126.7032.96Qiagenkit平行226.7132.28HBVDNA提取比较方法HBV样本1HBV样本2Prome提取灵敏度实验阳性样本梯度稀释国家灵敏度参考品提取灵敏度实验阳性样本梯度稀释HCVRNA提取HCV阳性样本10倍稀释梯度：100,10-1,10-2,10-3,10-4HCVRNA提取HCV阳性样本10倍稀释梯度：100,10磁珠提取与柱提取法比较（数据见下页）磁珠提取与柱提取法比较（数据见下页）稀释组柱提取磁珠提取10-024.1324.3425.2810-127.1529.2028.5710-231.2333.3432.6410-335.3435.8735.3910-438.1638.0738.69磁珠提取方法与柱提取法及水溶液梯度稀释样本比较磁珠提取与柱提法的提取效果相当。在低浓度样本提取方面，荧光增量与稀释组无显著差异，此方法在去除样本中抑制物方面效果良好。

稀释组柱提取磁珠提取10-024.1324.3425.281HCVRNA国家标准品检测10份阳性参考品:P1~P10HCVRNA国家标准品检测10份阳性参考品:P1~P10HCV阳性参考品CtHCV阳性参考品CtP134.58P6NDP2NDP736.18P336.96P8NDP434.81P932.16P535.44P1036.73HCV阳性参考品CtHCV阳性参考品CtP134.58P6NHIVRNA提取HIV阳性样本梯度稀释成1/5，1/25，1/50，1/100和1/200五个浓度，提取RNA，原样本提取后用TE按相同比例稀释，上机比较。稀释组磁珠提取1-28.881/532.0931.291/535.7833.931/5037.1735.591/10038.8336.121/200-37.33

HIVRNA提取HIV阳性样本梯度稀释成1/5，1/25HIV样本稀释梯度：1/5，1/25，1/50，1/100和1/200HIV样本稀释梯度：1/5，1/25，1/50，1/10HIV核酸国家参考品检测HIVRNA灵敏度和定量参考品：B2－B5（至少检出B2-B3）HIV核酸国家参考品检测HIVRNA灵敏度和定量参考品：BHIVRNA线性参考品：A2－A5。HIVRNA线性参考品：A2－A5。HIVRNA荧光定量标准曲线,线形相关系数:0.9907HIVRNA荧光定量标准曲线,线形相关系数:0.9907HIV阳性参考品:P1,P2,P3,P5,P7,P8HIV阳性参考品:P1,P2,P3,P5,P7,HIV阳性参考品CtHIV阳性参考品CtP132.94P526.42P235.98P728.93P337.61P832.55HIV阳性参考品检测HIV阳性参考品CtHIV阳性参考品CtP132.94P52中检所HBV核酸定量标准品检测灵敏度参考品L0L1L2L3L4L5L6理论浓度对数值8.3427.6196.6495.6724.7153.6362.043Ct15.0416.9720.4022.0426.3429.03