病毒及病毒类疾病的实验室诊断-病毒类疾病的实验室诊断（动物微生物技术课件）

动物微生物应用技术任务四：动物病毒病的实验室诊断一、标本的采集与处理1.采集时间：做病原分离，病毒抗原检查——发病早期或急性期尽快采集；自然死亡——死亡6h内采集；急性血清检查——分别在发病初期、相隔2-3周采取血清标本；一、标本的采集与处理2.采集部位：取决于临床症状和所怀疑感染的病毒。

如：流感病毒感染------鼻咽拭子

乙型脑炎病毒感染------脑脊液

轮状病毒感染------粪便

乙型肝炎病毒感染------血液一、标本的采集与处理3.采集方法与处理

提高病毒的分离率，防止标本污染。可加入50%甘油磷酸盐缓冲液或二甲基亚砜（DMSO）等以防病毒失活。标本的运送：尽快送检；冷冻、冷藏运输；防漏、专人、标记。标本的保存：-70℃可较长时间保存。采集时无菌操作,可加入抗生素以杀死杂菌细胞形态的改变

某些病毒感染宿主细胞后，细胞内出现一种光学显微镜下可见的蛋白质结构，多为圆形、卵圆形或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚基聚集而成，称为包涵体。二、病毒包涵体的检查三、病毒的分离培养与初步鉴定形态学检查及诊断

光学显微镜检查：

*直接观察到较大的病毒体（如痘病毒）

*包涵体狂犬病毒感染------嗜酸性包涵体。

无菌标本可直接接种；污染标本应做除菌处理；除菌方法：过滤除菌，高速离心除菌，抗生素除菌。电子显微镜检查：

*透射电子显微镜

用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的超微结构等*扫描电子显微镜：

用于观察病毒和细菌表面结构和附属结构等

扫描电子显微镜三、病毒的分离培养与初步鉴定透射电子显微镜H1N1流感病毒电子显微镜图片狂犬病病毒电子显微镜图片三、病毒的分离培养与初步鉴定原代细胞培养二倍体细胞培养传代细胞

羊膜腔接种尿囊腔接种卵黄囊接种绒毛尿囊膜接种组织细胞培养

鸡胚培养

动物接种三、病毒的分离培养与初步鉴定1.组织细胞培养

鸡成纤维细胞细胞培养瓶三、病毒的分离培养与初步鉴定12一般选用9～14d的鸡胚来源充足；组织分化程度低；本身很少携带病毒和细菌、对接种病毒不产生抗体及病毒较易增殖等；1.鸡胚培养优点：三、病毒的分离培养与初步鉴定选择不同的接种部位是病毒分离成功的关键常用的主要有：

尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种、绒毛尿囊膜接种2.鸡胚培养三、病毒的分离培养与初步鉴定尿囊腔接种羊膜腔接种常用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养。常用于临床流感病毒初次分离。2.鸡胚培养三、病毒的分离培养与初步鉴定卵黄囊绒毛尿囊膜人工气室羊膜腔气室绒毛尿囊膜尿囊腔

卵白主要用于虫媒病毒、衣原体及立克次体的分离和繁殖。常用于牛痘病毒、单纯疱疹病毒的分离。卵黄囊2.鸡胚培养三、病毒的分离培养与初步鉴定常用的实验动物有小白鼠、乳鼠、豚鼠、家兔、猴和鸡等常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式3.动物接种三、病毒的分离培养与初步鉴定正常细胞病变细胞病毒在细胞内增值引起细胞病变时，细胞出现皱缩、变圆、变性、坏死、溶解及从培养瓶壁脱落，细胞堆积形成葡萄状。4.红细胞致病作用（CPE）三、病毒的分离培养与初步鉴定病毒颗粒红细胞

某些病毒（如流感病毒）表面的血凝素（HA）能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集。血凝现象5.红细胞凝集现象三、病毒的分离培养与初步鉴定三、病毒的分离培养与初步鉴定病毒颗粒红细胞病毒抗体病毒液中若先加入病毒的特异性抗体，抗体与病毒表面的抗原特异性结合，从而抑制病毒与红细胞的血凝现象，称为红细胞凝集抑制试验。红细胞凝集抑制现象四、动物接种试验观察动物的发病时间、临床症状、病理变化及死亡情况。原理：用已知的病毒抗原检测患者血清中的抗体水平或用已知的病毒抗体直接检测标本中的病毒抗原五、血清学实验中和试验（Nt）

在体外孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，经培养后观察CPE或红细胞吸附现象是否消失，即特异性抗体是否中和相应病毒，从而测定残存的病毒感染力的一种方法1.核酸分子杂交技术

2.聚合酶链反应（PCR）-----多种病毒的快速诊断3.基因芯片技术----如检测H1N1甲型流感病毒4.基因测序----如病毒耐药基因型的检测六、分子生物学方法检测动物微生物应用技术鸡新城疫病毒引起的鸡新城疫(ND)是极易传染的毁灭性疾病，被国际动物卫生组织（OIE）列为A类传染病，最常侵袭家鸡和珍珠鸡，也能感染其他家禽和野鸟。八、鸡新城疫病毒（NDV）9/18/202324成熟的病毒粒子直径约为100～250nm，有囊膜的病毒粒子呈圆形，但常因囊膜损坏而形态不规则。囊膜上有纤突长约8nm，为脂蛋白，具有血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）活性。病毒粒子的内部有一核心，就是病毒的核衣壳，直径约17nm。（一）生物学特性9/18/202325八、鸡新城疫病毒（NDV）新城疫病毒（NDV）在55℃经45分钟或阳光直射下经30分钟灭活，但NDV对低温抵抗力较强，在4℃经几周，在-20℃经几个月，在-70℃经几年感染能力不受影响，在鲜鸡蛋中经几个月、在冻鸡中经2年仍有病毒存在。碳酸钠和氢氧化钠对其消毒效果不理想，大多数除垢剂能将其迅速灭活，煤酚皂、甲酚配成2%-5%浓度可以在5分钟内杀死病毒。0.1%福尔马林37℃时6小时可以杀灭病毒。（二）抵抗力9/18/202326八、鸡新城疫病毒（NDV）（三）致病性NDV不同毒株对宿主的致病力相差很大，鸡是高度敏感的，鸭和鹅可能被感染，但不表现临床症状。NDV对鸡的致病性主要由病毒株决定，但感染剂量、感染途径、鸡的日龄和环境条件也有影响。一般越小发病越急，雏鸡感染野外强毒可能突然死亡，较大的鸡可能病程较长，并有典型的临床症状。自然感染的鸡呼吸道症状较重，而肌肉、脑内和静脉注射感染的鸡神经症状较重。9/18/202327八、鸡新城疫病毒（NDV）（四）培养特性NDV易在10-12日龄的鸡胚绒毛尿囊膜内或尿囊腔内生长，一般接种后24-72小时可导致鸡胚死亡，鸡胚呈出血性病变和脑炎，感染的尿囊液能凝集红细胞。鹌鹑胚易感性更高，但病毒滴度没有鸡胚高。NDV大多数毒株能在许多继代和传代动物细胞内增殖，最常用的是鸡胚成纤维细胞、鸡胚肾细胞、仓鼠肾细胞，但细胞培养物的病毒浓度常比鸡胚低一个滴度。9/18/202328八、鸡新城疫病毒（NDV）（五）微生物学诊断通常根据病史、临床症状和病死鸡的剖检即可做出。但温和型新城疫和多种微生物混合感染较难做出确切诊断，在没有神经性症状的情况下可能与其他呼吸道疾病混淆，特别是鸡群中本来就有其他呼吸道感染时，这时就需要进行病毒分离和血清学诊断（血凝试验和血凝抑制试验）。9/18/202329八、鸡新城疫病毒（NDV）动物微生物应用技术一、口蹄疫病毒（FMDV）病毒类型：单股RNA病毒。易感动物：主要引起偶蹄动物发病：牛、猪、羊等。该病也偶见于人和其他动物，因而也是一种人畜共患病。流行形式：口蹄疫流行极广，在世界许多国家时有发生，对畜牧业发展影响很大，是当前世界各国极为重视的家畜传染病之一。被国际兽医组织（OIE）列为A类传染病，是全球性最重要的动物健康问题之一。9/18/202331本病毒是动物病毒中发现最早的一种。口蹄疫病毒属于：小RNA病毒科/口蹄疫病毒属；二十面体对称，直径20～25nm无囊膜，病毒基因组为正股单股RNA，在RNA芯髓外对称衣壳上有32个壳粒。电镜下观察，可见病毒粒子表面的颗粒状结构和一个密度较低的中心。此外尚可见有较小的蛋白质亚单位颗粒，直径7～8nm，无感染性。比较小的颗粒具有球蛋白特性。病毒子在宿主细胞的原浆内可形成晶格状排列。（一）生物学特性9/18/202332一、口蹄疫病毒（FMDV）对酸敏感：病毒在pH为6.5的缓冲液中、4℃条件下14h灭活90％，在pH5.5时1min灭活90％，在pH5．0时每秒钟灭活90％，pH3．0时瞬间灭活，病毒在pH7.0～7.5时十分稳定。对碱敏感；最常用的消毒液为1%NaOH。对一般消毒剂的抵抗力较强；耐低温：低温下能长期保存。病毒的灭活温度为85℃1min，70℃10min，60℃15min，但裸露的RNA对热较稳定。（二）抵抗力9/18/202333一、口蹄疫病毒（FMDV）各型之间没有相互免疫作用。本病毒有较大的变异性，病毒在保存和流行中，常发生血清学的变异，有时流行初期与末期毒型不一致，几乎每年都有新的亚型出现，本病毒已发现65个以上的亚型。

（三）抗原性目前已知口蹄疫病毒有七个主型：A、O、C、南非Ⅰ、南非Ⅱ、南非Ⅲ和亚洲Ⅰ型。9/18/202334一、口蹄疫病毒（FMDV）组织培养利用犊牛、幼猪的肾脏或豚鼠、牛胚胎上皮组织制成细胞单层来培养病毒，病毒繁殖后，使细胞发生病变。鸡胚培养本病毒不易在鸡胚上生长，必须反复交替通过牛与鸡胚或在添有牛舌上皮的鸡胚组织培养继代后，才可能适应于鸡胚或鸡胚组织培养。（四）培养特性9/18/202335一、口蹄疫病毒（FMDV）（五）致病性易感动物：在自然条件下，主要发生于偶蹄兽，其中以奶牛和黄牛最易感，其次是水牛，牦牛、猪，再次为羊和骆驼等。野生偶蹄兽也能发生。传播途径：呼吸道、消化道，创伤、皮肤、粘膜。流行特点：有一定的季节性，以冬、春季节发病较多，夏季可以平息，传播迅速,一般沿交通线进行传播。特征性临床症状：口腔粘膜、蹄部和乳头出现水泡、烂斑、蹄壳脱落。9/18/202336一、口蹄疫病毒（FMDV）猪口蹄疫9/18/202337一、口蹄疫病毒（FMDV）牛口蹄疫9/18/202338一、口蹄疫病毒（FMDV）心包膜弥漫性和点状出血，心包积液浑浊，心肌松软，切面有灰黄色或淡黄色斑点或条纹。虎斑心9/18/202339一、口蹄疫病毒（FMDV）豚鼠接种试验：选择500g以上的健康豚鼠4～6只，剪去后肢足掌部被毛，用湿棉花球洗净，再用70％酒精棉消毒。将足掌部皮肤或口腔粘膜划破，把感染性病料涂擦于划破处。第二天如局部有水疱，即可确诊。乳鼠接种试验：选2-7日龄乳鼠5只，4只做检样，1只做对照，每只颈背部皮下接种0.1ml，观察1周，如有死鼠,及时取出，制备1：3检样，传代。如无死鼠取活鼠冻死传代，传2-3代不死亡为阴性。免疫学诊断法：间接血凝试验、中和试验、液相阻断ELISA。（六）微生物学诊断9/18/202340一、口蹄疫病毒（FMDV）本病康复后可获得坚强的免疫力，免疫期1～3年，能抗同型强毒攻击，但可被异型病毒所感染，并出现典型症状。猪的免疫期较短，仅有几个月。免疫和康复动物所产生的抗体有两种类型——早期型和晚期型。人工自动免疫可用灭活苗或弱毒苗以及基因工程苗。人工被动免疫可用口蹄疫高免血清，高免血清也可用于早期治疗。（七）免疫与治疗9/18/202341一、口蹄疫病毒（FMDV）动物微生物应用技术生物学特性：单股RNA病毒，有囊膜，外形似子弹，核衣壳螺旋对称；抵抗力：加温40℃1h或者60℃30min可灭活；致病性：接触性传播，咬伤。急性直接接触性传染病,人和各种畜禽对本病都有易感性；犬、猫带毒是重要的传染来源；死亡率100%。人感染狂犬病病毒的主要途径：（1）被患病犬或猫咬伤；（2）被带毒的犬和猫咬伤或抓伤；（3）亲密接触犬和猫。二、狂犬病毒微生物学诊断：1.包涵体检查，取大脑、小脑、海马角部分。2.动物实验；3.血清学诊断；预防及治疗：免疫接种及捕杀；人被咬伤后：1.伤口处理消毒：20%肥皂水冲洗，碘酒涂擦；2.被动免疫；3.疫苗接种。二、狂犬病毒动物微生物应用技术十、马立克氏病毒（MDV）（一）生物学特征马立克氏病毒是具有双股DNA的细胞结合性病毒，属于疱疹病毒科疱疹病毒甲亚科的成员，又称禽疱疹病毒Ⅱ型。马立克氏病毒近似球形，为二十面体对称。分三个血清型：致瘤性MDV、非致瘤性MDV、火鸡疱疹病毒及其变异株HVT(对火鸡可致产蛋下降，但对鸡无致病性)。9/18/202346易感动物：MDV主要侵害雏鸡和火鸡，1日龄雏鸡敏感性比14日龄鸡高1000倍。野鸡、鹌鹑和鹧鸪也可感染。发病后不仅引起大量死亡，耐过的鸡具有免疫抑制性。症状类型：可分为4种类型:内脏型（急性型)、神经型（古典型）、眼型和皮肤型。传播途径：高度接触传染，主要是呼吸道，其次为消化道鸡一旦感染可长期带毒排毒。其羽毛囊角化层的上皮细胞含有病毒，易感染鸡通过吸入此种毛屑感染。(二)致病性9/18/202347十、马立克氏病毒（MDV）内脏器官发生肿瘤，缺乏特征性症状，突然发病，流行迅速，病程短，死亡率高。性腺最多见，肾、脾、肝、心、肺、肠系膜、腺胃、肠道肌肉组织等出现大小不等，质地坚硬，灰白色肿瘤快，肿瘤呈弥漫性增长时，器官肿大。1、内脏型（急性型）(二)致病性9/18/202348十、马立克氏病毒（MDV）肝脏弥漫性肿瘤结节9/18/202349腺胃增生、肿大腺胃乳头融合9/18/202350脾脏变形，有肿瘤病灶肠管增粗，肠壁增厚，黏膜溃疡肺脏切面完全瘤化9/18/202351肾脏肿胀、弥漫性肿瘤增生卵泡停止发育，卵巢肉样变睾丸肿胀、变形9/18/202352多见于弱毒感染或HVT免疫失败的青年鸡（2～4月龄），主侵害外周神经，通常造成两翅和两腿不全或完全麻痹，多为一侧。受害神经肿大，增粗2～3倍，外观似水中浸泡过，黄（灰）白色，纹理不清或消失，与对侧神经对比，有助于鉴别。(二)致病性2、神经型（古典型）9/18/202353十、马立克氏病毒（MDV）病鸡单侧翅麻痹，下垂9/18/202354病鸡腿麻痹、瘫痪，呈“劈叉”姿势9/18/202355病鸡腿麻痹、瘫痪，卧地9/18/202356虹膜色素（特征）消失，变为灰色，（灰眼，鱼眼、蛤蟆眼），瞳孔边缘不整，视光反应迟钝或失明。(二)致病性3、眼型9/18/202357十、马立克氏病毒（MDV）此种病型仅在宰后拔毛时发现羽毛囊肿大，形成结节或瘤状物，此种病变常见于躯干、背、大腿生长粗干羽毛部位。皮肤病变以羽毛囊为中心，呈半球状突出于表面，或融合呈丘状。(二)致病性4、皮肤型9/18/202358十、马立克氏病毒（MDV）（三）微生物学诊断病毒的分离：把患病鸡的组织做适当处理后接种于7日龄SPF（无特定病原）雏鸡的腹腔，每只0.3～0.5ml，接种4～6只，接种后严格隔离，并用已知的特异性免疫血清处理病料做对照鸡试验，接种后2～10周观察接种鸡和对照鸡的病理变化，若有典型病变和组织学病变，而对照鸡没有出现，则证明雏鸡发生了MDV感染。琼脂扩散试验：诊断该病的简易方法是琼脂扩散试验，中间孔加阳性血清，周围插入被检鸡羽毛囊，出现沉淀线为阳性。免疫荧光试验等血清方法可检出病毒。病毒分离可接种4日龄鸡胚卵黄囊或绒毛尿囊膜，再做荧光抗体染色或电镜检测作出诊断。禽白血病病毒往往与本病毒同时存在，要注意鉴别。9/18/202359十、马立克氏病毒（MDV）（四）防治由于雏鸡对MDV的易感性高，尤其是1日龄雏鸡易感性最高，所以防治本病的关键在于搞好育雏室的卫生消毒工作，防止早期感染，同时做好1日龄雏鸡的免疫接种工作，加强免疫，发现病鸡立即淘汰。9/18/202360十、马立克氏病毒（MDV）动物微生物应用技术六、禽流感病毒（AIV）禽流感病毒引起禽流感。是由甲型流感病毒引起禽类的一种从呼吸系统到全身败血症等多种症状的传染病，禽类感染后死亡率很高。H5N1、H7N9病毒能感染人类，并有很高的死亡率。国际动物卫生组织定为一类动物疫病。9/18/202362（一）生物学特性流感病毒属正黏病毒科。根据病毒核蛋白（NP）和膜蛋白（MP）抗原及其基因的不同，正黏病毒科分甲型、乙型、丙型流感病毒属和托高土病毒属，禽流感病毒属甲（A）型流感病毒。

9/18/202363六、禽流感病毒（AIV）（二）抵抗力禽流感病毒对外界环境的抵抗力不强，对高温、紫外线、各种消毒药敏感，容易被杀死。病毒在100℃中一分钟可以被消灭，70℃经几分钟即能被灭活。但是，禽流感病毒可在自然环境，尤其是凉爽和潮湿的条件下存活较长时间，如粪便中和鼻腔分泌物中的病毒。9/18/202364六、禽流感病毒（AIV）（三）致病性——血清型甲型：感染人、猪、马、海豹、貂、鲸鱼及几乎所有禽类。乙型：仅感染人。丙型：感染人、猪。9/18/202365六、禽流感病毒（AIV）空气飞沫。水源：粪－水－口。密切接触者：尚无定论。垂直传播：从感染的火鸡所下的蛋中分离出病毒；机械传播：少数报道个别AIV能直接感染人或其它哺乳类动物，尚未发现人或其它哺乳类动物能直接感染禽。蚊虫传播：尚未获得确凿证据，但可能性存在。（三）致病性——传播途径9/18/202366六、禽流感病毒（AIV）（三）致病性——主要症状确认感染人的禽流感病毒有H5N1、H9N2、H7N2、H7N3、

H7N7、H5N2、H10N7。H7N9禽流感病毒为刚发现新型变异病毒。症状表现为呼吸道症状、结膜炎、甚至死亡。人感染高致病性H5N1禽流感病毒后常表现为高热等呼吸道症状，往往很快发展成肺炎，甚至急性呼吸窘迫综合症和全身器官衰竭，甚至死亡。9/18/202367六、禽流感病毒（AIV）临床症状----禽类最急性型：高致病力流感病毒引起，病禽不出现前驱症状，发病后急剧死亡急性型：精神沉郁，肿头，眼睑周围浮肿，肉冠和肉垂肿胀、出血甚至坏死，鸡冠发紫。采食量急剧下降。病禽呼吸困难、咳嗽、打喷嚏，张口呼吸，突然尖叫。抽搐，头颈后扭，运动失调，瘫痪等神经症状。9/18/202368六、禽流感病毒（AIV）临床症状----人潜伏期：7天以内突然起病：发热（＞38℃)咳嗽：咽痛：头痛、头晕、全身酸痛、乏力等中毒症状。可伴有干咳、流鼻涕、流泪等呼吸道症状。少数病例有食欲减退，伴腹痛、腹胀等消化道症状。9/18/202369六、禽流感病毒（AIV）（四）防制加强禽中流感监测；早发现，早制定防患措施，使损失降至最低水平；加强饲养管理，免疫预防；9/18/202370六、禽流感病毒（AIV）动物微生物应用技术9/18/202372犬瘟热病毒属于病原性病毒。主要侵犯狗科、鼬科动物。属于副粘液病毒。单股负链RNA病毒；病毒粒子的直径为115—160毫微米。邓金，莱德劳首先分离成功。感染的狗（尤其是幼狗）在4—5天的潜伏期后出现发热，流泪，流鼻涕，呕吐，腹泻，便粘液，有时有抽风、痉挛等症状。死亡率约50%。在鸡胚成纤维细胞、狗肾细胞的培养细胞中生殖其减毒的病毒可用为活疫苗。九、犬瘟热病毒(CDV)

动物微生物应用技术单股DNA病毒，二十面体对称，无囊膜；以剧烈呕吐、腹泻、白细胞显著减少为特征；多发于幼犬，死亡率高；现动物医院多用胶体金快速诊断试条，可快速测定；疫苗防治，无特效治疗药物。9/18/202374五、犬细小病毒（CPV）动物微生物应用技术三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种繁殖障碍和呼吸道的传染病，本病又叫蓝耳病，其特征为厌食、发热、怀孕后期发生流产，死胎，木乃伊胎，仔猪感染产生呼吸道症状。9/18/202376（一）生物学特征PRRSV属于冠状病毒科，动脉炎病毒属，根据基因序列的不同将PRRSV分为两个大类，即美洲型（代表株为VR2335）和欧洲型(代表株LV）。基因组为单链RNA+病毒，病毒粒子呈球形，二十面体对称，有囊膜，不凝集鸡、哺乳动物和人的红细胞。9/18/202377三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）（二）抵抗力（三）抗原性PRRSV对氯仿等脂溶剂敏感，对热稳定性差。对PH值变化敏感。病毒感染单核细胞和巨噬细胞可造成免疫抑制。9/18/202378三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）

PRRSV对细胞的选择极为苛刻。适于PRRSV生长的原代细胞有猪肺巨噬细胞（SAM),传代细胞有CL2621、Marc-145细胞。（四）培养特性9/18/202379三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）（五）致病性本病毒可侵害任何年龄的猪。妊娠母猪和哺乳仔猪受害最严重，发病初期均表现为发热，嗜睡，食欲不振，倦怠，呼吸困难，咳嗽等。母猪以繁殖障碍为特征。主要表现为早产，晚期流产，产弱仔，死胎，木乃伊。感染猪四肢末端、尾、乳头、阴户和耳尖发绀，以耳尖发绀最为常见。仔猪感染，表现为严重呼吸道症状，也有神经症状。公猪和青年猪，育肥猪的临床症状较轻。9/18/202380三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）病猪卧地不起仔猪呼吸困难9/18/202381三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）耳部皮肤发绀流产的死胎9/18/202382三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）（六）微生物学诊断

病毒的分离培养酶标抗体染色法血清中和实验，IFT、ELISA。9/18/202383三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）（七）防制本病目前尚无有效药物进行治疗。主要采取综合措施，加强管理，彻底消毒，严格检疫，切断传播途径。目前国外使用的方法主要有

1.从不发病国家和地区引进猪及其产品；

2.进行血清学监测；

3.对患病动物实行扑杀、销毁、以控制疾病蔓延；

4.使用疫苗；9/18/202384三、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）动物微生物应用技术十一、猪瘟病毒（HCV）由猪瘟病毒引起猪的急性、热性、高度接触性的传染病。各种年龄的猪只发病。发病率极高，死亡率很高，有时高达80～100%，对养猪业造成极为严重的危害。猪瘟已遍及世界各地，被国际兽疫局(OIE)列入A类传染病。9/18/202386是猪瘟的病原体，属于黄病毒科/瘟病毒属的成员；基本呈球形，直径40~50nm；有囊膜，囊膜上有55和46kD两种糖蛋白；核衣壳20面体对称；基因组为单股RNA，约12kbp。（一）生物学特性9/18/202387十一、猪瘟病毒（HCV）抵抗力较强：60℃16~24小时、72~76℃1小时，才能致死对紫外线抵抗力较强；5%NaOH需1小时，才能灭活；在pH4.8-5.5时比在中性环境中更稳定；干燥的空气环境，病毒很快灭活；对乙醚、氯仿、胰酶等敏感；5%石炭酸15分钟可灭活。（二）抵抗力9/18/202388十一、猪瘟病毒（HCV）病毒只有1个血清型。猪瘟病毒和牛粘膜腹泻病毒具有共同的糖蛋白抗原，两种病毒在核酸类型、形态和理化特性等方面均较相似，但可用单克隆抗体予以鉴别。（三）抗原性9/18/202389十一、猪瘟病毒（HCV）HCV可在猪肾、脾、睾丸、胎皮、骨髓、淋巴结、白细胞等原代细胞中生长。HCV能增强NDV对猪睾丸细胞的致病效应。HCV和NDV在猪睾丸细胞上均不产生CPE,但在接种HCV后3天再接种NDV，可产生明显的CPE，而且提高了NDV的滴度，根据CPE的有无可间接测定HCV，此试验称为“鸡新城疫病毒强化试验”（END试验）。（四）培养特性9/18/202390十一、猪瘟病毒（HCV）不同品种和年龄的猪对HCV均易感；特别是幼猪。该病表现为：最急性、急性、慢性。发病率和死亡率均可高达90%以上。急性发病的主要特征是由于血管变性而致全身广泛出血、坏死和梗死。怀孕母猪感染，可引起幼猪的先天性感染。（五）致病性9/18/202391十一、猪瘟病毒（HCV）仔猪扎堆皮肤出血9/18/202392皮肤淤血皮肤坏死结痂9/18/202393淋巴结出血9/18/202394雀斑肾脾脏出血性梗死9/18/202395猪喉、会厌软骨粘膜出血9/18/202396回盲口附近粘膜呈纽扣状坏死9/18/202397繁殖障碍型母猪产弱仔产的死胎、木乃伊胎9/18/202398仔猪发生结膜炎9/18/202399（六）微生物学诊断病料的采集高热期的血液、淋巴结、脾和扁桃体；慢性病例可采集流产胎儿和死产猪的脏器。END试验荧光抗体试验酶标抗体技术：组化法和ELISA兔体反应试验健康猪接种试验

9/18/2023100十一、猪瘟病毒（HCV）兔体反应试验：取健康易感兔测定体温后,接种送检病料,每天测定体温,7天后再接种兔化猪瘟弱毒并连续测温3天。如果兔体温没有升高或升高不到1℃，则证明病料中存在HCV。（同时设不接种病料的对照兔,它们在接种兔化弱毒后体温应该升高）病料兔无体温反应兔化弱毒兔病料含HCV7天有体温反应9/18/2023101十一、猪瘟病毒（HCV）（七）免疫与治疗1)根据具体情况，制定相应的防制措施；主要是采用猪瘟兔化弱毒疫苗和灭活疫苗进行主动免疫。可应用高免血清进行被动免疫和治疗，但价格昂贵，有效期短。2)患猪瘟耐过的猪可获得很高的免疫力。9/18/2023102十一、猪瘟病毒（HCV）动物微生物应用技术四、猪圆环病毒（PCV）猪圆环病毒是一种圆形小颗粒病毒，属圆环病毒科圆环病毒属。猪圆环病毒存在两种血清型，即PCV-1和PCV-2，PCV-1无致病性，PCV-2是引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征的病原体。该病主要发生在仔猪，一般在断奶后2～3周开始发病，主要特征为进行性消瘦，皮肤苍白或黄疸，呼吸急促等。9/18/2023104（一）生物学特性猪圆环病毒是一种小的、二十面体对称、无囊膜、含有1.76—2.3kb的单股环状DNA病毒。病毒粒子直径为16.8—20.7nm。是目前发现的最小的动物病毒之一。不凝集牛、羊、猪、鸡等多种动物和人的红细胞。

9/18/2023105四、猪圆环病毒（PCV）猪圆环病毒对外界理化因子的抵抗力较强。在pH3的酸性环境中很