病理生理学实验讲义

病理生理学实验不损害病人健康临床研究不耽误病情不增加病人痛苦病理生理学实验动物实验动物实验则可人为地严格控制实验条件，在动物身上造病，并对动物进行观察，记录和分析，然后将在动物身上所获得的资料与临床的疾病表现进行比较、分析，从中引出疾病的发生、发展的规律。病理生理实验目的：除验证课堂讲授的部分理论，加深理解外，更主要的是培养同学初步具有实验性研究疾病的技能，为今后临床医学研究打下基础。实验要求：1、养成正规的技能操作习惯，耐心细致地观察实验中出现的每个现象2、不能主观臆造实验数据，做到准确、及时、客观地记录。3、爱护实验器材，如有损坏要登记，按设备处规定酌情赔偿。实验前核对器械、试剂、实验结束清洗，清点器械、试剂。4、同学实验中分工明确，责任到人。轮流取送动物，打扫卫生。5、按时交纳实验报告。实验豚鼠高血钾症实验步骤1、豚鼠称重，用10%乌拉坦1ml/100g体重腹腔麻醉2、接上心电导联黑——红绿——3、设置打印正常心电图4、腹腔注入10%kcl1ml→5分钟→10%kcl0.5ml→……观察有变化时随时记录5、观察到高血钾心电图后，自行选择抢救方案4%NaHCO3或10%CaCl2或50%葡萄糖和胰岛素6、继续注入kcl→室颤→开胸观察心脏停跳状态实验注意事项1、抓豚鼠时要小心，不要任意玩耍豚鼠，防被豚鼠抓伤。2、腹腔麻醉两人配合，头朝下，臀部朝上，左下腹注射麻药3、麻醉后，用绳子绑住四肢，针形电极按黑——红绿——插入踝部皮下，注意勿插进肌肉，因有肌电干扰。另外及时清除电极和电线周围的血和水迹，保持良好的导电状态4、出现室颤开胸观察心脏停搏状态动作要迅速典型的实验结果：P波压低增宽，QRS波群压低增宽，T波高尖Q-T间期缩短传导阻滞，室颤抢救方案：4%NaHCO31、输入碱性溶液有利于钾从胞外移入胞内2、注入高渗液后能使细胞外液容易迅速增加而起稀释作用，致血钾浓度相对下降。3、钠离子具有对抗钾离子对心肌的作用，可以增加细胞的兴奋性，使心率加速。10%氯化钙钙对钾具有拮抗作用，但对血钾浓度无影响，应该注意的是注射氯化钙的速度过快会引起心律失常。葡萄糖和胰岛素：由于细胞内合成糖原增多，钾离子由细胞外液转入细胞内（合成1g糖原时有0.5mmol的K+进入细胞内）所以可以降低血钾。实验缺氧一、几种类型缺氧1、乏氧性缺氧—密闭2、CO中毒性缺氧3、亚硝酸钠中毒性缺氧亚硝酸钠+美兰不密闭亚硝酸钠+0.9%Nacl二、实验步骤乏氧性缺氧取钠石灰5g放入缺氧瓶内，观察瓶内小白鼠呼吸频率（次/分）、幅度、皮肤和口唇颜色，塞紧瓶塞，记录时间，每三分钟观察上述指标一次，记下动物死亡时间。CO中毒性缺氧安装CO发生装置，用移液管向刻度试管中加入甲酸3ml，然后再加入浓硫酸2ml，塞紧橡皮塞，适当加热产生CO，随时观察上述指标。亚硝酸钠中毒性缺氧取体重相近的两个小白鼠（甲、乙），观察正常指标。甲鼠腹腔注射5％亚硝酸钠0.3ml+1％美兰0.3ml。乙鼠腹腔注射5％亚硝酸钠0.3ml+1％生理盐水0.3ml4、将各组死亡的小白鼠解剖腹腔，观察肝脏和皮肤粘膜、口唇颜色。三、注意事项1、按老鼠喜欢钻洞的习性让其进入瓶内2、小白鼠腹腔注射，应头朝下，稍靠左下腹，注射器不能混用。3、需密闭的缺氧瓶塞一定要塞紧，可用适量的水滴加在橡皮塞周围，以防漏气4、每小组桌上都有浓硫酸与甲酸，在盘内使用，绝对不能打翻，因具有强腐蚀性，若滴在桌上、身上等，必须及时用自来水冲洗，用完后，试管立即用自来水冲洗干净（CO产生装置不一定密闭）5、加热浓硫酸、甲酸时火焰不能过旺（防CO产生过多，致使小白鼠立即死亡，樱桃红色不明显），一般稍有冒泡即可，也不能煮沸后立即从火焰上移开，以防NaOH倒吸，加热时试管口绝不能对着人6、美兰染料起到还原剂的作用,在专门注射盘中使用，防止美兰污染桌面，几个类型的缺氧死亡鼠要标记清楚指标类型呼吸变化皮肤、口唇、肝脏颜色存活时间低氧CO中毒亚硝酸钠＋美兰亚硝酸钠＋生理盐水实验呼吸功能不全实验步骤全麻下分离气管，插管，气管插管与呼吸传感器连接并记录正常呼吸曲线复制窒息完全窒息（不超过30秒钟）观察皮肤颜色，窒息后记录呼吸曲线解除窒息10分钟左右呼吸恢复复制气胸免右胸4~5肋间插入16号针头，5-10分钟记录呼吸曲线，抽尽胸腔内气体，封闭可能留下的通道。10分钟左右呼吸恢复。复制肺水肿抬高兔台，注射器针头插入气管插管分叉处，缓慢滴入10%葡萄糖液2ml，5-10分钟后，放平兔台，记录呼吸曲线听诊器听到湿色罗音时,处死动物开胸,用线结扎两侧肺门,取出肺称重肺重（g）肺系数＝体重（kg）（正常为4－5）切开肺脏，观察有无泡沫液体流出。注意事项：复制气胸的针头不能潮湿复制气胸时针头钻入有一突破感，不能过深，否则损伤肺脏50ml注射器抽吸空气后，针头和针筒一起拔出，封闭通道，滴入高渗葡萄糖时要缓慢，不要过快，防窒息。处死动物时要结扎肺门，防水肿液流失实验弥散性血管内凝血DIC实验步骤：家兔称重，20％乌拉坦按7ml/kg体重腹腔麻醉颈总动脉插管取血玻片：最先流出的几滴血弃去，放一滴在玻片上离心管：0.5ml抗凝剂＋4.5ml血,轻轻上下颠倒混匀取血后立即从动脉插管内推入少量生理盐水按2.0ml/kg体重加4％兔脑粉生理盐水浸液，用生理盐水稀释至30ml(小烧杯中)，用头皮静脉针由耳缘静脉缓慢注射，15－20分钟注射完注射完兔脑粉后立即第二次取血，15分钟后第三次取血三个血标本3000rpm离心10分钟，分离血浆检测凝血时间（玻片法）取动脉血一滴于玻片上，立即计时至出现纤维蛋白丝为止，从血液流出至出现纤维蛋白丝的时间即为凝血时间凝血酶原时间（PT）取血浆0.1ml于试管中放37度水浴，加入P试剂0.2ml，同时开动秒表，5秒后从水浴取出倾斜试管或轻摇看是否出现液体停止流动，按停秒表，记录时间血浆鱼精蛋白副凝试验（3P试验）取血浆0.9ml于试管中，加入1%硫酸鱼精蛋白液0.1ml,轻轻摇匀，37度水浴15min,取出试管观察，轻摇试管，看到白色纤维或凝块为阳性，均匀混浊，无白色纤维为阴性。实验肝性脑病造成急性肝功能不全的动物模型，并以十二指肠插管灌注氯化铵溶目的：采用肝大部分切除术，液，观察血氨升高在肝性脑病机理中的作用。步骤：横膈之间的镰状韧带1、家兔称重局麻，仰卧固定于兔4、再将肝叶向上翻，用手剥离肝台上，腹部正中去毛2、从胸骨剑突起，作上腹正中切口，切口长约8cm3、打开腹腔，向下压肝，剪断肝与胃韧带5、用粗棉线在肝叶的根部结扎（仅留下二小叶），注意棉线不要剪去6、用眼科小剪刀在十二指肠壁作一小切口，将导尿管插入肠腔约5cm，并固定导尿管防滑脱血管钳夹住腹壁切口，关闭腹腔8、观察家兔角膜反射及对疼痛刺激反应每隔5分钟向十二指肠插管中注入复方氯化铵溶液5ml，观察动物有无反应性增强，直至痉挛发作为止，记录所用的复方氯化铵溶液总量，并计算每公斤体重的用量。分组：1、实验组：肝大部切除，十二指肠插管注入氯化铵2、对照组：肝大部切除，十二指肠插管注入生理盐水5ml/5分钟3、假手术组：分离肝脏（不切除），十二指肠插管注入氯化铵5ml/5分钟兔失血性休克实验目的：复制失血性休克模型。观察动物失血前后的表现。探讨失血性休克的机理。实验对象：家兔实验用品：生物信号采集及分析系统（PowerLab）、压力换能器、呼吸换能器、心电导联线、体温计、注射器等。实验步骤：家兔麻醉，固定。颈部手术：切开颈正中皮肤，分离气管和左侧颈总动脉，插入气管插管描记呼吸；插入颈动脉插管，接三通管，一侧记录血压，另一侧连注射器。放血前观察动物生理指标：一般情况，皮肤粘膜颜色，肛温、血压、心率、呼吸等。放血至血压为40mmHg止，血液置于与失血量等量的生理盐水中，混匀。放血速度适宜。放血量根据家兔大小确定，放血