药学中的生物技术和方法2015-1-基因工程和干细胞技术

IV-GeneandstemcelltechnologyGenetechnologyGeneCloneGeneAnalysisandIdentificationGeneTransformationGeneEditingGenecloneGenelibraryGenomicDNAmRNADNAfragmentscDNARestrictionenzymeDNAlibcDNAlibligationligationReversetranscriptionvectorToolsforgenecloneRestrictionendonucleaseDNApolymeraseandDNAligaseVector:plasmidorl-phageHostcellsPCRandRT-PCRPCR(PolymeraseChainReaction)cDNA合成

与

RT-PCRMultipleAnnealingandLoopingBasedAmplificationCycles(MALBAC)forSinglecellgenomicsequencing

高通量DNA测序DNAanalysisI:DNAhybridizationprobeDNAlibpositiveclonesScreeningthegenomiclibraryoftrypanosomacruziDNAanalysisII:实时荧光定量PCR技术（RealTimePCR）DNA测序:基因分析的终极技术第一代第二代第三代第一代：Sanger法（DNA双脱氧链终止法---末端距离分析法）第二代：合成测序法-高通量测序（碱基时序法）左起：谢晓亮、乔杰、闫丽盈、汤富酬2014年9月19日，世界首例经MALBAC基因组扩增高通量测序进行单基因遗传病筛查的试管婴儿在北京大学第三医院诞生，这标志着我国胚胎植入前遗传诊断技术已处于世界领先水平。2代半：Single-moleculereal-time(SMRT)sequencingtechnology单分子实时测序技术第三代：单分子DNA读序（纳米孔技术）蛋白质分析技术和蛋白组学Samplereserve蛋白序列物种转录后修饰蛋白质相互作用基因导入系统感受态细胞：直接转染载基因质粒细胞模型：脂质体、电转染和病毒载体整体动物：病毒载体病毒载体：插入整合型：逆转录病毒载体。但其存在潜在的安全性风险；非整合型：慢病毒载体、腺病毒载体脂质体转染法慢病毒转染法植物细胞的基因转染基因编辑方法已克隆的基因：PCR法细胞内基因：1

：PCR法2

：RNAi基因沉默法3

：sRNA指导定位编辑法PCR基因点突变技术RNAi基因沉默法实用中的shRNA基因沉默技术CRISPR(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats)/Cas9基因编辑技术报告基因技术I：荧光蛋白标签钱永健，下村修，MartinChalfie报告基因技术II：信号转导检测Biotech.forStemcells

干细胞具有自我更新和多能分化能力，主要包括胚胎干细胞(ES)、间充质干细