补肾健脾活血中药对溶血性贫血大鼠造血及红细胞生成素、粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-2的影响

补肾健脾活血中药对溶血性贫血大鼠造血及红细胞生成素、粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-2的影响

采用补肾健脾活血、活血通络的活骨髓片，以及具有补肾益肾精、经络骨髓通经的活髓膏。为此,设计了补肾、健脾、活血化瘀中药以及活髓片、活髓膏对乙酰苯肼造成大鼠溶血性贫血和环磷酰胺造成小鼠骨髓抑制性贫血影响的实验,以探讨补肾、健脾、活血化瘀中药对生血作用的不同机制,以及活髓片、活髄膏的疗效机理。方法及检测总参数4白介素-2(interleukin-2IL-2)、红细胞生成素(granulocyte-macrophggecolonystimulatingfactor,GM-CSF)试剂盒,由北京东亚免疫技术研究所提供;粒-巨噬细胞集落刺激因子(erythropoietin,EPO)试剂盒,由美国INCSTAR公司生产;于实验第13天灌胃2h后,眶静脉采血,进行血常规检测,并采用放射免疫分析法,用BECKMANDP5500型γ计数器检测IL-2、GM-CSF、EPO。5统计学方法两均数差别的显著性检验用t检验,两样本率的比较用χ检验。结果1各组大鼠的生存率2各组大鼠的rbc和hb的比较3两组il-2、epo及差异GM-CSF水平:补肾组、健脾组及合治组均高于正常组、对照组和活血组(P<0.05)。实验各组IL-2均高于正常组(P<0.05),然各实验组之间差异无显著性(P>0.05)。实验各组EPO高于正常组(P<0.05或P<0.01);各用药组均高于对照组(P<0.05或P<0.01);健脾组最高,与补肾组、活血组、活髓组比较,差异有显著性(P<0.05)。中药在促进造血作用机制上的差异APH曾在40年代作为红细胞增多症的治疗药物应用于临床,后来因其过度溶血造成的不良反应较大而被淘汰。APH是强氧化剂,较专一地对红细胞有缓慢的进行性氧化性损伤作用,尤其是干扰了红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD),促进血红蛋白变性而形成海氏小体,使红细胞易于崩解,最终造成机体的溶血性贫血,故出现红细胞数明显减少,血红蛋白、血容量随之低下。贲长恩等的实验表明,APH造成的大鼠溶血性贫血,属于中医血虚或气血两虚模型。有实验进一步表明,APH造成的溶血性贫血大鼠更多地表现出脾虚症状,而无肾虚改变。本实验中以健脾组大鼠生存率最高为上述观点提供实验证据。同时提示中医辨证施治是有内在的客观物质基础。实验结果表明,各组的生存率和Hb反映出了各组用药的不同效果。APH造成的大鼠溶血性贫血,采用健脾中药组无论是存活率,还是Hb均为最佳,其原因可能在于APH造成的大鼠贫血,主要是表现脾虚、气血不足,从中医辨证的角度来讲最为对证,内外合治组较健脾组稍差,但较补肾组及活髓组似乎更佳,提示采用多途径治疗以提高临床疗效,具有广泛的应用前景。补肾组和活髓组大致相近,活血组的治疗效果最差,初步表明健脾药、补肾药、活血化瘀中药在促进造血的机制上存在着差异。GM-CSF由T细胞、内皮细胞、成纤维细胞、巨噬细胞产生,是广谱效能的髓系造血因子,其靶细胞是多能干细胞、粒单祖细胞、中性粒细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞、巨噬细胞。实验表明补肾组、健脾组及合治组的GM-CSF水平高于正常组、对照组、活血组(P<0.05),说明前三组中药具有促生GM-CSF的作用。IL-2是促使T细胞从G1转至S期的关键性因子,主要由被抗原或丝裂原激活的细胞产生,细胞产生量较少。IL-2是现已被公认的造血抑制因子,可能通过增强Ts活性引起造血抑制,同时,IL-2又可能刺激IFN增强其对造血的抑制。本实验表明APH造成的溶血性贫血大鼠其各组的IL-2水平均高于正常组(P<0.05),表明实验各组大鼠均有不同程度的造血抑制,然实验各组相互间比较未见差异性(P>0.05)。EPO是调控红细胞生成的主要激素,可与红系祖细胞受体结合而促使CFU-E和BFU-E的增殖和分化,每个CFU-E细胞约有1000个EPO受体。实验各组EPO水平均较正常组高,而各实验组EPO水平亦均高于对照组,说明实验各组因APH溶血的刺激和/或药物的作用而使EPO水平提高。其中健脾组EPO水平最高,与补肾组、活血组、活髓组比较差异显著(P<0.05),这亦可能是健脾组疗效最佳的原因之一,也可能是健脾药与补肾药、活血化瘀药作用机制不同的地方之一。补肾组、活血组、活髓组及合治组EPO水平亦均较对照组高,表明上述各组中药都具有不同程度的促EPO生成作用。合治组再次显示出了较好的作用势头,均高于补肾组,活髓组及活血组(尽管统计学无意义),但与对照组相比差异极显著(P<0.01)。补肾、健脾、活血化瘀中药均能促进造血,然其作用环节及作用靶点有所不同,这与中药的治疗机制在于多环节与多层次整体上调节机体有关,本实验表明补肾、健脾、活血化瘀中药促进造血有着不同的机制,其不同机制的揭示对解析中医理论的客观物质基础具有重要意义。1实验动物及分组Wistar雄性大鼠,体重180～220g,由广州中医药大学动物中心提供。将大鼠随机分为7组:正常组、模型对照组(对照组)、六味地黄汤组(补肾组)、四君子汤组(健脾组)、丹参饮组(活血组)、活髓片组(活髓组)、活髓片加活髓膏组(内外合治组,简称合治组)。正常组10只,其余6组各25只。2造模方法乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine,APH)由上海化学试剂总厂所属上海试剂三厂生产,批号:910516。将APH加入生理盐水中,制备成2%APH生理盐水溶液。于实验的第1、4、7天经皮下注射给药造模,首次剂量20mg/100g体重,后两次注射剂量减半(10mg/100mg)。3药物制备及给药方法补肾药选六味地黄汤,由熟地黄、山萸肉、山药、泽泻、茯苓、丹皮组成;健脾药选四君子汤,由人参、茯苓、白术、甘草组成;活血药选丹参饮去檀香加红花,即丹参、红花、砂仁组成;活髓片药由黄芪、人参、枸杞子、川芎等药组成;活髓膏中含有鹿茸、补骨脂、川断等生药。除活髓膏外,将上述中药制成浓缩煎剂,每毫升含20mg生药,按大鼠与人之剂量互算后,以每次4ml剂量给大鼠灌胃,对照组灌服等量蒸溜水。灌胃由实验第1天起至第13天结束,每日2次。见表2。各治疗组与正常组及对