环氧乙烷灭菌器灭菌验证报告

***A文件版本文件编号A文件版本文件分发明细副本:□生产部正文:文控中心环氧乙烷灭菌验证报告生效日期2012年12月12生效日期日盖受控章2年12月302年12月30日2012年12月30日修改记录修改状态修改内容制订/日期审核/日期修改状态修改内容制订/日期审核/日期批准生效/日期3、引用文件与标准............................................................4。确认小组..................................................................设备与材料................................................................6、操作流程及参数ﻩﻩ灭菌产品得装载及监测传感器得分布.........8、ﻩ安装确认.................................................................9、运行确认..................................................................12、ﻩ产品安全性能确认........................................................14、............................................................产品二次灭菌ﻩ1。1我公司根据ISO11135进行灭菌验证,我公司成立验证小组,主要成员见验证小组成员表。1、2通过验证确认来证明确定过程就是有效得,可再现得,保证最终产品得无菌概率小于或等于SAL10-66本方案适用***公司生产得＊＊＊,及以其有相同组成材料与制造过程得相关产品得EO灭菌。1.1ISO11135—1:2007,Sterilizationofhealthcareproducts—Ethyleneoxide—Part1:Requirementsfordevelopment,validation,androutinecontrolofasterilizationprocessformedicaldevices。2.1ISO10993—7,Biologicalevaluationofmedicaldevices－Part7:Ethyleneo2.2ISO11737-1:2006,Sterilizationofmedicaldevices-Microbiologicalmethods—Part1:Determinationofapopulationofmicroorganismsonproducts.2.3ISO11138－1:2006,Sterilizationofhealthcareproducts—-Biologicalindicators—Part1:Generalrequirements。2.4ISO11138－2:2006,Sterilizationofhealthcareproducts--Biologicalindicators—Part2:Biologicalindicatorsforethyleneoxidesterilizationprocesses、2.52005版《中国药典》附录XVIXIH,灭菌法无菌检查法。所有操作人员均接受相关知识得培训,详见操作人员培训记录。解析室有效容积:4480mm×1350mm×1700mm湿度:60%-90%解析室与清新空气循环速度:5300m3/hEO灭菌器名称:供应商:容积:温度传感器制造商:湿度传感器制造商:环氧乙烷(EO)混合空气置换2湿度≤30%T=41±3℃空气置换2湿度≤30%T=41±3℃t≤10min将载量=9箱保温30min送入解析室次成份:供应商:批号:2012/11/16气体得检测报告详细见供应商出货单生物指示剂(BI)微生物名称:供应商:D值:过期日期:产品证明见附件3:BI资质报告培养基(营养琼脂);(玫瑰红琼脂);(硫乙醇流体培养基);(营养肉汤);(改良马丁培养基)。EO残留测试测试中心:测试设备:参考标准:ISO10993－7(GB/T14233)t≤t≤30minATM10℃2.1.加热:将灭菌系统总电源接通,设定温度得上下限值,将加热开关推向“开”得位置,系统启动加热/循环,对灭菌柜进行加热,当温度达到设定值后,系统自动停止加热,保持温度衡定。2.2.保温:产品被推入后,关好灭菌柜门,设定保温时间,对灭菌产品进行加热。2.3.抽真空:当保温时间结束后,启动真空泵,设定压力值,将真空阀推向“开”得位置,系统对灭菌柜进行抽真空,当达到设定值后,系统自动停止。2.4.加湿:抽真空后结束后,如果湿度≤30％,需对产品进行加湿,当湿度达到4060%时停止2.5.保压:在预定得负压值下保持30min,使产品包装内得空气排出,同时记录产品中所有温度、湿度2.6.加药:向灭菌柜内注入预定量得灭菌剂,如2kg,同时记录气化器得温度、灭菌剂得温度,加药前压力、加药后压力、加药时间,并用这些数据用气体状态方程式计算灭菌柜内灭菌剂得浓度,同直接称量法比较所得得值应一致(证明灭菌剂全部被加入)。计算公式如下:E.O浓度=(K＊P)/(R*T)K:E、O稀释常数:44000P:引入E。O后压力上升值R:气体常数(纯气:0、08205)T:引入E。O后,箱体内绝对温度(273+t)2.7.灭菌:按预定时间设定好灭菌时间,记录灭菌开始时灭菌柜内压力、灭菌结束时灭菌柜内压力、灭菌开始15min时产品中湿度传感器得湿度值、整个灭菌过与产品中温度传感器得值。2.8.气洗:灭菌结束时,排出灭菌剂,设定抽真空到—20±2Kpa,保持3min,打开排空阀,空气进入,按这样得循环两次,同时记录灭菌柜内压力得变化值。2.9.产品推出:气洗结束后,将放空阀推向“开”得位置,空气进入灭菌柜,打开灭菌柜门,将灭菌“合格”得产品送入解析室。2.10.解析:记录解析室内温度范围,新鲜空气换流流量,并根据以往经验在不同时间点对产品进行E0残留量测试,找出产品EO、ECH残留合格得最短解析时间。7、1ﻩ产品得装载根据产品得包装设计特点及灭菌箱容积要求确定灭菌产品装载量为:90个销售包装／灭菌箱;共90灭菌箱/灭菌批,总使用空间为:4480mm×1350mm×1700mmﻩ(a)正面模式图ﻩﻩﻩﻩﻩ(b)顶视模式图ﻩ有效装载(正面图)图2。在灭菌器中灭菌箱得装载与产品在灭菌箱中得放置每个手术衣外面套一个透析袋,然后25个独立袋装一个纸箱,包装封口参数及包装材料见手术衣包装确认报告(TB/TS/02V-02－01).7。2ﻩ温度与湿度传感器分布依据标准ISO11135进行运行确认与性能确认得时候,需要用10个湿度传感器与2个湿度传感器来监被贴于灭菌器室壁相应位置(磁性吸附),传感器5,10,11与12被细线挂于灭菌柜内图3中相应得位置。在做性能确认,装载样品得情况下,所有传感器均用同产品一样得包装材料装好,参照运行确认放置得位置,放于灭菌产品之间,这些点包括已确认过得最冷点。温度传感器温度传感器湿度传感器表2.温度与湿度传感器对应表T027T03T035T0位置编号传感器编号11M62254M339T0301T029T034422T03设备购买于2012年11月,2012年11月安装调试完毕,安装确认依照标准ISO11135-1得要求按灭菌确认方案,进行确认,确认内容包括:1)确认设备相关技术资料;2)计量器具校准;3)设备安装环境确认;4)管道得安装确认;安装确认结果确认报告1)灭菌器灭菌室箱壁及空间温度均匀性试验:根据ISO11135-1标准要求,选用10个贴触式温度传感器直接贴触柜壁与悬挂于柜室空间(具体分布如图3),启动加热／循环系统,在到达灭菌工艺所需温度(50℃)时,所有传感器记录得温度均在50℃±3℃得范围内,其中5位置处得温度传感品器所记录得温度为最低点,此位置位于灭菌器得柜门、2)真空速率试验:在空载得情况下,将灭菌柜温度升到50℃±3℃,保持温度衡定,将灭菌柜门关好,封闭柜门,启动真空泵,将真空阀开关推向“开”得状态,真空度达到－50kPa时,记录时间(t),同时关闭真空阀,保持60min,结果真空至—50Kpa所用时间(t)<30min。3)正压泄漏试验:在空载得情况下、将灭菌柜温度升到50℃±3℃,保持温度衡定,将灭菌柜门关好,封闭柜门,打开气泵,向柜内加压至50Kpa,保持60min,结果一小时泄漏小于0、1Kpa、4)负压泄漏试验:在空载、温度恒定得条件下(50℃±3℃),封闭柜门,启动真空泵,将真空阀开关推向“开”得状态,抽真空至—50Kpa,保压60min,结果一小时泄漏小于0、1Kpa。5)在空载条件下,保持灭菌室温度恒定(50℃±3℃),将蒸汽发生器得电源开关打开,当蒸汽发生器压力达到50Kpa时,打开加湿开关,向柜内加蒸汽,40min内,温度升到75％,蒸汽发生器有总之,运行确认结果表明设备能达到灭菌过程所要求得性能参数范围。详细见性能确认、确认3个半周期与2个全周期得物理性能,所有物理性能确认参数数据见EO灭菌记录,3个半周期与2个全周期得物理性能参数数据总结分别见表3与表4。在3个半周期物理性能确认时,灭菌参数采用极端条件(温度37℃与灭菌介质EO=1。9Kg),2个全周期也利用极端条件(温度43℃与灭菌介质EO=2、1Kg)。在所有灭菌周期内,灭菌装载样品量与传感器得放置同本文7部分中描述一样,温度传感器放置位置包括运行确认中认为最冷得点,所有灭菌周期内得温度与湿度记录见灭菌产品温度均匀性记录与灭菌产品湿度均匀性记录,结果显示设备性能稳定,满足灭菌需求。表3。半周期物理性能确认结果半周期参数记录半周期参数记录起始温度(℃)最终温度(℃)所用时间(min)产品推入所用时间(min)72935、8253040确认项目加热抽真空起始压力(kPa)所用时间(min)湿度最大值湿度就是小值湿度平均值注入蒸汽前灭菌室内压力(kPa)注入蒸汽时间(min)注入蒸汽后灭菌室内压力(kPa)10个温度传感器中最小值10个温度传感器平均值(℃)2个湿度传感器最大值(％RH)2个湿度传感器平均值(%RH)EO注入前灭菌室内压力(kEO注入重量(kg)EO注入后灭菌室内压力(kEO注入所用时间(min)EO注入时汽化器温度最小值EO注入时EO得温度最小值气体作用时间(min)362.861———2947、246.8428、524058、736。20454。758-—-3048.455、7—48、761、76-49、4347。748.6---47.249、352、6-49、3461作用15min后灭菌器得湿作用过与中产品最大温度值作用过程中产品最大温差值作用过程中产品之间得温差作用15min时EO浓度(mg/L)换气间隔时间(min)表4.全周期物理性确认结果58。6371261、549、336。00、41261.152。339.8570-19、612全周期灭菌参数记录全周期灭菌参数记录确认项目全周期1灭菌时间全周期2灭菌时间2012—12－72012-12—7所用时间(min)5346产品推入所用时间(min)10个温度传感器平均值(℃)最终压力(kPa)湿度最大值湿度就是小值湿度平均值注入蒸汽前灭菌室内压力(kPa)48.7—484-0、1-49。8638。9-抽真空加湿注入蒸汽时间(min)注入蒸汽后灭菌室内压力(kPa)时间(min)10个温度传感器平均值(℃)2个湿度传感器最大值(％RH)2个湿度传感器最小值(％RH)2个湿度传感器平均值(%RH)EO注入后灭菌室内压力(kEO注入所用时间(min)EO注入时汽化器温度最小值EO注入时EO得温度最小值气体作用时间(min)作用开始时灭菌室内压力(kPa)作用结束时灭菌室内压力(kPa)作用15min后灭菌器得湿度(%RH)作用过与中产品最大温度值(℃)作用过程中产品最大温差值作用过程中产品之间得温差(℃)作用15min时EO浓度(mg/L)换气间隔时间(min)换气次数(times)—-3047.848。739。1-48。165632.128.348012 —51.550.841。939、665、8631。527。448068、14238。9630-18。822产品送入解析室和10-6的灭菌水平解析时间解析时间(h)77解析解析室温度范围(℃)20—3920-39换气流量(min/once)连续连续生物性能确认包括以下内容:.灭菌产品得生物负载:检测确认灭菌前产品得生物负载小于100CFU/件;.初始微生物挑战:在空载情况下灭菌10min得,测试BI得抵抗性;.短周期:寻找一个没有微生物存活下来得最短灭菌时间,能达到SAL10—6;根据半周期法及ISO11135-1中生物性能确认要求,如“图4、半周期法”。该方法能保证灭菌过程杀灭具有特定抵抗性得微生物芽孢,其方法在所有其它参数保持不变(所有关键参数都应设置为下限,以保证这种最差条件均能满足要求),找到没有微生物存活得灭菌效果时需要得最短灭菌时间。在检测生物指示剂(BI)显示没有微生物生长得情况下,还要再重复两次灭菌过程,而且检测均无微生物生长,确立得这一个灭菌时间,再用2倍于这一个灭菌时再进2次灭菌循环运行(所有关键参数都设置ECH测定得产品样品。65生物负载生物指示物的杀0暴露时间生物指示减少6个log432安全因子菌过程依照培养基灵敏度检查方法(中国药典2012),对本批次得培养基进行确认,灵敏度检查前已经对培养基进行无菌性检查,培养基灵敏度检查所用得菌株传代次数小于5代,生命活力旺盛。所测试得培养基包括:营养琼脂培养基(NA)、孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RBA)、硫乙醇酸盐流体培养基与营养肉汤培养基(NB)。a)NA:将金黄色葡萄球菌接种于被检得营养琼脂培养基(NA),经30℃~35℃培养18h~24h后,刮取菌落于0.9%无菌氯化钠溶液内制成均匀菌液,在再逐管稀释成浓度<100CFU/ml得菌悬液,取1ml菌悬液于无菌得得平皿中,接种3个平皿,分别浇注温度不高于50℃得灭菌后(NA),凝固后翻转平皿置于所需温度培养,并用未加菌液得(NA)平皿作空白对照,30℃~35℃培养24h~48h,观察结果。将白色念珠菌接种于被检得孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RBA),经23℃~28℃培养24h~得菌悬液,取1ml菌悬液于无菌得得平皿中,接种3个平皿,分别浇注温度不高于40。C得灭菌后得(RBA),并用未加菌液得(RBA)平皿作空白对照,23℃~28℃培养24h~48h,观察结果、c)凝固后翻转平皿置于所需温度培养。d)NB:将已知含菌量为2×106CFU／片得枯草芽孢杆菌菌片,用无菌得玻璃珠加10ml得0。9%无菌氯化钠溶液将其混匀成菌悬液后,再逐管稀释成浓度＜100CFU/ml得菌悬液,取1ml菌悬液接种于20ml得营养肉汤(NB)培养管,接种3管,并用未接种得20ml得NB做空白对照管,30℃~35℃培养3~7d,观察结果。e)硫乙醇酸盐流体培养基:将生孢梭菌接种于硫乙醇酸盐流体培养基,经30℃~35℃培养18～24h后,无菌操作取出菌液用0。9%无菌氯化钠溶液将其混匀成菌悬液后,再逐管稀释成浓度＜100CFU／ml得菌悬液,取10只无菌试管,每只试管加入12ml硫乙醇酸盐流体培养基,将其中9只ml细菌数〈100CFU/ml得生孢梭菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌悬液,所有试管均置于30℃~35℃培养培养3～7d,并用未接种细菌得试管做空白对照,观察结果。结果:经过培养后,所有接种细菌数＜100CFU/ml菌液得培养基均长菌,灵敏度达到要求,所有记录见培养基灵敏度测试报告、灭菌前产品得生物负载测试过程依照－初始污染菌检测方法、初始污染菌得确定与ISO11737-1从每一批产品中抽取一件产品,按照下列已经确认方法,对灭菌前得手术衣进行生物负载评估、以确定手术衣产品得生物负载水平、步骤:—从已包装好得产品中,每一批抽取一件产品,投入100ml,0。1%蛋白胨水溶液中,蜗旋振荡30s。-取供试液2ml于两个无菌得平皿中,每个1ml,分别注入温度不高于40。C得营养琼脂培养基(NA)与孟加拉玫瑰红琼脂培养基(RBA),凝固后翻转平皿置于所需温度培养。—根据菌落数估算出该类产品得生物负载水平,详细见产品得生物负载测试报告BI在空得灭菌柜中经过一个灭菌周期循环后,灭菌剂作用10min,取出BI投入营养肉汤培养基中经30—35℃培养3-7天,结果显示灭菌10min后,所有BI均有菌生长按本文7得描述装载灭菌产品,依照本文6部分得过程进行短周期循环,EO得作用时间分别为30min,60min,120min,240min。所有重要参数均设定为下限(温度=37℃,灭菌介质EO=1.9Kg),灭菌循环结束后,分别将样品与BI进行无菌测试。短周期灭菌器运行条件:温度:47℃(设定值得下限)EO作用时间:30min,60min,120min,240min。BI分布:在短周期,半周期与全周期灭菌循环中,所有BI均密封于透析袋中,置于手术衣中间,以最终灭菌包装包装好“产品”,其中最大得手术衣,内部面积最大,热量最难传导进入手术衣中心,所用材料最多,体积最大,气体最难进入内部,这样得产品代表了所有手术衣中最难灭菌得情况,将BI放于这样得产品中心,将PCD均匀得放置于灭菌柜中,这些位置包括灭菌柜中最难灭菌得位置,如靠门得地方,此处在整个灭菌柜中温度就是最低得位置,灭菌柜得上层,此处就是灭菌剂浓度最低得位置,保证这些最差情况下达到SAL10－6无菌水平。20个BI在灭菌器中得位置见图4。,这些位置包括温度最低,EO最难到图4、灭菌柜内BI分布示意图产品得装载:取三批合格产品,每批520个,包装好后用于灭菌装载产品,这三批装载产品经过一次灭菌后,送入解析室去除EO,重复用来做下一次灭菌过程得装载产品,装载方式见本文7部分。生物负载测试样品、性能确认测试样品、内毒素测试样品与EO、ECH残留测试样品均为合格产品,见表5、6个样品用来做生物负载测试,20个样品经短周期1灭菌后做产品无菌测试,20个样品经第一次全周期灭菌后从中抽出3个样品(黄色)作性能测试,3个样品(绿色)用来做内毒素测试,左边14个样品(蓝色)与其它6个新加入得样品经全周期2灭菌后,其中9个样品(蓝色)已经经受2次全周期灭菌循环,用来确认经两次灭菌后产品得性能就是否受到破坏,证明二次灭菌得可行性,左边11个样品经二次二次灭菌性二次灭菌性能测试样品20122482012249201225020122512012253201225420122552012256EO／ECH残(11件)201225720122582012259短周期1后样品得无菌测试(20件)生物负载测试样品(6试样品(3性能测试样全周期1样品(20件)全周期2样品(20件)2012206结论:经30min短周期运行后,BI部分被杀灭,产品上得生物负载全部被杀灭,证明生物负载得抗性不大于BI,BI就是可接受得、短周期循环灭菌后,BI培养结果显示,灭菌剂(EO)作用60min-120min,均没有达到SAL10—6无菌水平,只有当灭菌时间为240min时,刚好能灭活BI上所有微生物,所以灭活BI得最短时间为240min,240min既为半周期时间。寻找最短灭菌时间得短周期循环过程中,BI测试表6.BI无菌测试结果灭菌时间间/min灭菌水箱温度/℃量／Kg气洗次数培养时间/天培养温度/℃BI结果初始生物性能挑战2012、110373720+/20短周期12012、1303730-3513＋/2260371.93730—359+/20短周期32、6120373730—35半周期12012、12、7240373730—35半周期22012、12、7371。937半周期32012、12、7240371、93730－350+/20全周期12012、4803730-35全周期22012、433730-350+/20根据半周期法及ISO11135-1中生物性能确认要求,找到没有微生物存活得灭菌效果时需要得最短灭菌时间,在检测BI显示没有微生物生长得情况下,还要再重复两次灭菌过程,而且检测均无微生物生长,确立得这一个灭菌时间既就是半周期时间、结果重复2次240min灭菌循环,BI测试无菌生物,无菌效果达到SAL10-6,灭菌过程中测试样品见表5,BI测试结果见表6详细报告见无菌测试报告(短周期运行后BI得无菌测试结果、短周期运行产品无菌测试结)果因为半周期灭菌时间为240min,所以全周期灭菌时间应为480min,全周期灭菌循环参数取设定值上限,以确认灭菌产品性能,灭菌过程样品见表5,BI测试结果显示完全被杀灭,无菌效果达到SAL10—6,BI测试结果见表6、在同样得条件下确认经二次灭菌循环,结果显示产品得包装与产品能经受二次灭菌、二次全周期灭菌循环BI测试报告见无菌测试(全周期BI无菌测试)、8.1.EO残留测试分别抽取解析1天、2天、3天得产品,送往韦士泰检测中心按ISO11607-7标准用比色法测试试产品上EO残留量,结果显示,解析三天后,产品上得EO残留量符合标准要求,详细报告见EO残留测8.2.产品性能确认8.3.包装完整性产品经全周期灭菌后,包装材料及封口强度没有受到影响,包装上得标签字迹清晰成品检验报告无经有计划得对灭菌过程确认(安装确认、运行确认与性能确认),并对产品得安全性能进行测试,所有得结果证明由州电达灭菌设备厂生产与安装得HDX—1CE灭菌器,以设备技术规格一致,所建立EO灭菌手术衣得参数与灭菌过程符合ISO11135—1标准要求,产品得无菌水平达到SAL10－6得无菌水平,EO灭菌全周期为480min,产品得性能与包装符合要求经过验证,参数符合工艺要求,准予进行生产！批准人:日期:2012、12、11KEEO001验证目得验证目得:确认参加验证得人员具备正确从事验证活动得资格验证依据:ISO11135-1验证内容:验证方法:相关文档:不合格描述:2、12、6审核结论:●合格○不合格审核人:日验证要求:1、采购符合法规要求;2。产品符合产品标准要求。验证依据:ISO11138产品名称:枯草芽孢杆菌生物指示剂型号规格:生产批号:生产企业:验证内容:格格验证方法:相关文档:1234不合格描述:验证结论:审核结论:√√√√√√√√---√√√日期:XFEO003—1供应商:检验时间:2012。12、6检验人员:检验依据:GB/t19973。11234567验证人:日期:2012、12、6验证依据:GB13098-—1型号规格:生产批号:验证方法:核实相关资料、相关文档:不合格描述:验证结论:审核结论:验证人:审核人:日期:2012、KEEO005验证依据:GB15980--1995型号规格:生产批号:验证项目:验证方法:按GB15980—1995附录C相关文档:不合格描述:验证结论:审核结论:7验证人:审核人:日期:2012、12、KEEO005—1产品名称产品名称:型号规格:检验依据:GB15980-1995检验方法:GB15980-1995培养基名称:编号:供应商:152332425463768293710t)结论:7XFEO006验证依据:无菌医疗器械生产实施细则与供应商得随机文件灭菌器规格灭菌验证项目:格9）灭菌器常见故障与排除一览表10)器安全操作规程验证方法:相关文档:不合格描述:验证人:审核人:确○○KEEO006—11234567891112验证人:KEEO007验证项目:得生产区生活区4)EO钢瓶应有固定支撑,并存放于有防验证方法:不合格描述:KEEO008验证要求:确认设备附属量具均经过校验并在有效期内验证依据:ISO11135-1不合格描述:2。07审核结论:●合格○不合格审核人:日期:2012、KEEO0092、各系统得安装符合整机完整得要求灭菌器规格:灭菌器编号:供应商:验证项目:验证方法:相关文档:不合格描述:07KEEO009-1验证人:日期:2012、12。08KEEO009-2号4加XFEO验证人:日期:201KEEO010格格验证方法:相关文档:项目名称不合格描述:验证结论:12、08审核结论:日期:2012。KEEO011格2)显示器安装准确性●合格验证方法:相关文档:OKOKOKUPS电源OKOKOOK不合格描述:验证结论:●合格○不合格验证人:日期:2012、12.09审核结论:●合格○不合格审核人:日期:2012。12、09OKKEEO012验证项目:格2)灭菌温度得上、下限控制格3)灭菌压力得控制4)气化器温度得控制验证方法:相关文档:达度达度达上限:下限:气化器温度上限:下限:上限:下限:KpKpKa达到下限开始工作得压力不合格描述:验证结论:2.09审核结论:○不合格验证人:日期:2012、1KEEO013格格验证方法:相关文档:不合格描述:验证结论:12、12。09审核结论:10min20min20min20min20minOKOKOKOK验证人:审核人:OKOKOK日期:20KEEO014验证方法验证方法:相关文档:不合格描述:验证结论:审核结论:日期:2KEEO015验证项目:1)UPS运行得有效性、可靠性●合格格验证方法:相关文档:UPS30minOK显示器正常显示30minOK电后持续供电10minOK不合格描述:验证结论:2.10审核结论:30minOKKEEO016验证要求: