免疫诊断试剂盒使用的质量控制

免疫诊断试剂盒使用的质量控制

免疫诊断，尤其是elisa试验，由于其高度灵活性和特异性的特点，已在临床检验中得到广泛使用。例如，ga肝病毒抗体、乙肝病毒检测、肝肾抗体、穆米林群岛抗体、人类免疫缺陷病毒（hiv）等。免疫诊断试剂盒检测诊断是目前常用的免疫学检测方法,其操作简单,无需特殊昂贵设备,各级医院都可使用,尤其适合条件一般的基层医院。但试验操作中很多环节对试验检测效果影响较大,如不注意有可能导致检测结果的不准确,造成假阳性或假阴性。笔者通过多年的临床实践对免疫诊断试剂盒使用的质量控制应加以重视的环节作了总结,具体如下。1免疫诊断试剂盒效果低,灵敏度不高免疫试剂盒品种繁多,质量参差不齐,选择高质量的试剂盒是保证结果准确的关键。应选用有国家批准文号,质量靠得住的产品,不能只图便宜而忽视质量保证。在不同的检测项目上,不同厂家生产的试剂盒灵敏度与特异性存在一定的差异,灵敏度低的试剂盒对低水平的样品会有影响,因此要选择所选检测项目声誉好的厂家的免疫诊断试剂盒。如有些厂家“两对半”检测试剂在同行中领先,有些厂家在检测HIV抗体的试剂盒上做得比较成功等。试剂盒上都注有生产日期和保质日期,临床检验者应在保质期内使用免疫试剂盒,坚决杜绝使用过了保质日期的试剂盒。2包装温度的影响平时试剂盒应妥善保存于4℃冰箱内,使用前试剂盒从冰箱取出在室温37℃平衡30min.注意不能马上拆开包装,因为此时的微孔反应板的温度相对于室温来讲温度较低,容易吸收空气中的水分,造成包被物的“潮解”而影响检验质量。免疫试剂盒用完后立即放入4℃冰箱中,同时注意避免频繁开关冰箱并经常检查冰箱的储存温度并做好记录。3血清或血浆样品的采集标本的正确处理与否直接影响诊断试剂盒的检测质量。因此大家要注意以下几点:(1)抽血时应尽量避免溶血,因为标本溶血时会释放大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,导致非特异性显色,干扰测定结果。(2)对送来检测的标本接收时应认真查对,不符合要求的标本坚决拒收。(3)血液未开始凝固或凝固不完全时强行离心,血清中容易残留纤维蛋白原,造成结果的假阳性。因此非抗凝血自然凝固1h～2h后,再3000转/min离心15min制备检测血清;用抗凝剂采血管采血后应颠倒混匀5～10次,并放置一段时间后3000转/min离心15min.(4)对不能及时检测的标本要妥善保存于冰箱,并做好原始记录,同时标本管上最好标上待检者姓名和送检日期。(5)血清或血浆样品保存时间和条件对结果的影响很大。标本5d内检测,可在2～8℃冰箱保存,若长期贮存,应于-20℃密封保存。但是保存过久的标本血清IgG可聚合多聚体,在ELISA间接法测定时易导致本底过低,造成假阳性;同时标本放置过长,抗原或抗体免疫活性减弱,亦可形成假阴性。(6)从冰箱取出的标本在检测前要预温至室温,对冰冻的样品要融化好并且充分混匀。另外,大家要注意ELISA一步法检测的标本不能使用叠氮钠(NaN3)防腐。4注意事项4.1水育箱温度操作前充分了解免疫诊断试剂盒检测的环境温度(应保持在18～25℃)、试剂盒检测的孵育温度和反应时间、洗涤的次数等;还要查看水育箱温度是否符合要求;试剂盒是否在保质期内;有没有某种试剂组分变质,注意不同批号的试剂组分绝不能交叉使用。4.2不触微生物反应板严格按照试剂盒说明书所规定的量和顺序进行。加样时应将标本加在微孔反应板底部,同时吸头不触到微孔反应板底部;使用加样器应垂直加入标本。加样时标本不可溅出,不可产生气泡。加样时如标本不慎溅出孔外,用吸水纸吸干,并做好记录。标本加样较多时应分批操作,以免加样至温育之间等待时间过长,影响试剂盒的检测质量。4.3控制温育时间温度应恒定为37℃,注意尽量少开启恒温箱门。温育时微孔板不能叠加。严格按试剂盒说明书控制温育时间,不能人为延长或缩短温育时间。温育时要加贴封片,防止孔内液体蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果,且封片不重复使用。4.4洗板机的操作洗涤液配制准确而且现配现用,配制洗涤液用新鲜、干净、无细菌污染的蒸馏水或去离子水,盛放洗涤液的容器经常清洗,保持干净。洗板时保证洗涤液注满各孔,洗完板后在吸水纸上轻轻拍干。使用洗板机清洗的应经常用细针清除洗板针内的纤维蛋白等杂质,保证洗板机的畅通。洗板时洗板的次数和浸泡时间按试剂盒说明操作并合理安排多板清洗的间隔时间,避免反应板过多造成等待时间过长。洗板时板的位置要调好,这样有利于洗涤更彻底,消除假阳性和假阴性发生。4.5加量、时间的影响加显色剂和终止液时,姿势要规范统一,加量要准确。不同批号的显色剂和终止液不可混用。加终止液时不能产生气泡,否则会使比色不准确,并注意避光。4.6hcv抗体检测酶标仪读数时应保证微孔板底部清洁干燥。要按说明书的规定及时进行读数和结果判定。酶标仪测定时要使用双波长,单波长容易产生测定干扰(标本的浓度、干扰色等)和电路干扰(包括噪声、漂移、电压等),在实际工作中,有文献报道,使用单波长检测导致HCV抗体部分弱阳性标本漏检。酶标仪比色选用双波长,可以排除微孔板底部划痕的影响,还可以减少实验误差,提高临界值标本的分析质量。5注意事务性建立完善的质量保证体系,重视影响实验结果的各种因素,并在操作过程中注意。将试剂盒质量控制贯穿到整个实验过程中,包括待检者的准备、标本的采集与处理、操作过程、检验结果的审核、结果的登记与保存、报告单的发放等一系列的制度。6检验人员的要求除以上常见的注意点外,要做好试剂盒使用的质量控制还包括其他很多方面。现简单列举如下:(1)首先,检验人员的素质是影响检验结果的重要因素。检验人员应具备良好的责任感和事业心,能熟练掌握免疫诊断试剂盒使用的基本理论和技术;(2)注意生化和免疫标本不要混用,以防交叉污染;(3)注意洗板机的清洗力度,防止清洗不彻底造成阳性标本对其他标本的影响;(4)尽量减少加入样品、试剂及混匀的操作时差。操作时差每个实验都存在,容易使抗原抗体反应和酶促反应时间不一,导致试剂盒检测质量下降;(5)做好室内室外的质量控制以及双份质控品的监测,确保结果的可靠性。7干扰物质的干扰免疫诊断试剂盒灵敏度高、特异性强、稳定性好且操作简便、安全,已经被临床广泛接受和应用,成为现代医学检验的重要组成部分。但和所有诊断方法一样,它也存在着不足,比如一些内源性干扰物质的非特异性显色问题始终难以消除。有学者认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子(RF)、甲胎蛋白(AFP)、补体、嗜异性抗体等,某些自身抗体都会影响结果造成假阳性。如果标本血清脂质过高、胆红质、血红蛋白及血液黏度较大等也会对检测