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文档简介
培养基的灭菌培养基的灭菌灭菌是指用物理或化学方法,完全杀死器物表面或培养基内的一切微生物的过程。培养基的灭菌是实现菌种纯培养的先决条件,通常采用湿热灭菌法,包括常压蒸汽灭菌(亦称流动蒸汽灭菌)和高压蒸汽灭菌两种形式。1、灭菌设备菌种培养基多在灭菌灶或灭菌锅中进行蒸汽灭菌。现将蒸汽灭菌所需设备、适用范围见表1-4。表1-4蒸汽灭菌所需设备及其适用范围灭菌方法适用设备灭菌条件适用范围高压灭菌高压蒸汽灭菌锅126℃,1.5-2小时原种、栽培种培养基灭菌常压灭菌一次灭菌灭菌灶100℃,6-8小时栽培种、栽培菌袋培养基灭菌间歇灭菌灭菌灶100℃,1-2小时25℃,24小时,重复进行2-3次栽培种培养基灭菌栽培菌袋(瓶)培养基的灭菌手提式高压蒸汽灭菌锅2、培养基蒸汽灭菌方法1)一次性常压蒸汽灭菌灶操作步骤(1)往灭菌灶内注入八分水。(2)将培养基按层次分别放人灶内,注意棉塞朝中间,且不靠灶壁排列,以利于蒸汽流动,否则影响灭菌效果,拖长灭菌时间。(3)关闭灭菌灶门,点火加温(为缩短灭菌灶使用周期,提高灭菌灶的利用率,也可适当提前加温预热水)。(4)灶门中部温度达到100℃时计算时间,保持6~8小时,注意灶内水位变化,避免干热燃烧现象发生。(5)达到灭菌时间后停止加热,微开灶门,利用余热蒸发棉塞和容器表面水分,1~2小时后打开灶门,取出灭菌物放入预先消毒的冷却室。2)高压蒸汽灭菌锅操作步骤(1)装入灭菌培养基,注意棉塞朝内不朝壁,关闭锅门,紧固螺帽。(2)缓慢将蒸汽通入夹层预热,达到压力4.9×104帕时,打开排气阀,将冷空气排出。(3)当压力升到1.47×105帕,温度达到126℃时,控制进气量和排冷气阀门,使温度压力均恒保持1.5~2小时。(4)停止送气,使温度和压力自然降低,当压力降至4.9×104帕时,缓慢打开排气阀,使压力降到零,微开锅盖,让余热把水气蒸发。(5)打开锅盖,取出灭菌物,搬入预先消毒好的冷却室。3)手提高压灭菌锅操作步骤(1)向锅内注入水到规定刻度,注意导气管要畅通。(2)将灭菌物放入锅内,棉塞一端用牛皮纸扎牢,盖锅盖,紧固锅盖螺帽。(3)通电加热,当压力达4.9×104帕时排放冷气。(4)加热至压力1.08×105帕(琼脂培养基)或1.47×105帕(木屑、粪草培养基),调整电源电压,保持上述要求到0.5小时或1.0小时切断电源。(5)当压力降到4.9×104帕时放开排气阀,压力到零时旋开锅盖螺帽,微开15分钟左右。(6)取出灭菌物,摆成斜面或搬人预先消毒好的接种室(箱)。3、常用灭菌方法的灭菌效果检验随机取灭菌过的培养基数瓶(袋),标明记号和日期,置25℃
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