甾体激素类药物的分析

第十章甾体激素类药物的分析1概述激素（Hormone，荷尔蒙）----是人体内各种内分泌腺所分泌的一种生物活性物质。激素作用于特定的称为靶器官的组织、细胞上而发挥作用。如果激素分泌出现平衡失调，可使人体发生病变，如甲亢、糖尿病等。2甾体激素类药物均具有环戊烷骈多氢菲母核，基本骨架为：第一节基本结构和分类3一、肾上腺皮质激素4结构特点：①A环3位为羰基、4，5位间为双键，形成共轭体系，标记为：Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和酮结构），或写成:Δ4-C3=O；②C环11位上有羰基或羟基；③D环17位上有α-醇酮基侧链（），并且多数还具α-羟基。5二、雄性激素及蛋白同化激素（1）临床常用的雄性激素为睾丸素（睾酮）的衍生物，如丙酸睾丸素、苯乙酸睾丸素。（2）常用的蛋白固化激素有苯丙酸诺龙（苯丙酸去甲睾酮）、康力龙、康复龙等。6（1）结构特征（两种激素之共同点）：①A环3位Δ4-3-酮基（又称α、β不饱和酮结构）；②D环17位上无侧链，多为羟基。（2）两种激素结构之不同点：蛋白同化激素10位上大多无角甲基，有的4位有卤素。7（三）孕激素又称黄体素或孕酮，临床上主要为黄体酮、己酸孕酮、安宫黄体酮和甲地孕酮等。①A环Δ4-3-酮基（α、β不饱和酮结构）；②D环17位上有甲基酮，有些具有羟基；8（四）雌激素临床上常用雌二醇及其各种酯和炔雌醇及其衍生物，以及活性的雌酮、雌三醇等。①A环为苯环，3位上有酚羟基，10位无角甲基；②D环17位上有羟基或羰基，有的还有乙炔基。9肾上腺皮质激素雄性激素与蛋白同化激素雌激素孕激素C3C3＝OΔ4-3=O或Δ1，4-3＝OC3＝OΔ4-3=OC3－OHA环为苯环C3＝OΔ4-3=OC10C13有两个角甲基有的两个有的一个（C13）C13有一个有两个角甲基C17α－醇酮基－OH或其酯－OH或有－C=CH甲酮基10第二节鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（甾核）许多甾体激素可与硫酸、磷酸、高氯酸、盐酸等呈色，主要与硫酸等呈色，机理可能是酮基的质子化反应。方法：取样品少许观察颜色、荧光

再观察H2SO4加水稀释后一、化学鉴别法11（二）官能团的反应1、C17－α－醇酮基的反应皮质激素C17-α-醇酮基具有还原性，能与许多氧化剂，如氨制AgNO3、斐林试剂、四氮唑盐反应。其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可用作层析法的显色剂，还可用于含量测定。121、与碱性酒石酸铜试液反应铜（Ⅱ）在碱性条件下可被还原物质还原为红色的氧化亚铜沉淀。如：中国药典鉴别氢化可的松＋2Cu+4OH2+-+Cu2O+H2O橙红色132、与氨制硝酸银试液的反应银（Ⅰ）在碱性条件下可被还原物质还原为黑色的金属银沉淀。如：中国药典鉴别醋酸去氧皮质酮＋2Ag+2OH+-NH3+2Ag+CH3COOH黑色143、与碱性四氮唑盐显色反应氯化三苯四氮唑（或蓝四氮唑）在碱性条件下可被还原物质还原为红色的单甲鐕（或蓝色的双甲鐕）。H2O+OH+-++CH3COOH红色152、酮基的呈色反应机理：分子中C3=O和C20=O能与一般羰基试剂如：2，4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼等显色。主要是C3=O与异烟肼缩合生成异烟腙而呈黄色。16盐酸酸性条件下：

Δ4-3＝O：即刻反应

Δ1，4-3＝O：1～3minC20＝O：长时间173、甲酮基或活性亚甲基的反应含H3C-C=O（甲酮基）和活性亚甲基的激素类药物与亚硝基铁氰化钠、芳香醛、间二硝基苯反应呈色。（1）甲酮基的呈色反应：如黄体酮蓝紫色，其它甾体呈淡橙色或不显色。（专属反应）亚硝基铁氰化钠18（2）亚甲基的反应：如硫酸普拉睾酮紫红色乙醇间二硝基苯氢氧化钠194、酚羟基的呈色反应：

A环为苯环的雌激素+重氮苯磺酸盐红色偶氮染料。例如：+H+苯甲酸雌二醇+205、炔基的沉淀反应含炔基的甾体激素，如炔雌醇、炔诺酮，遇硝酸银试液，即生成白色的炔雌醇银盐沉淀及白色炔诺酮银沉淀。6、卤素的反应（有机氟的呈色反应）一些含有氟的甾体激素药物（如醋酸氟轻松、醋酸地塞米松等），以氧瓶燃烧后生成无机氟化物，再与茜素氟蓝及硝酸亚铈起呈色反应。217、酯的反应一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物来鉴别。本类药物C17或C21位上羟基的酯，可发生水解反应，生成相应的酸与醇，如为醋酸酯，水解后生成的醋酸可与乙醇反应，生成有香气醋酸乙酯。戊酸或己酸酯类水解后可生成有特臭的戊酸或己酸，进行鉴别。22（一）缩氨基脲的生成如苯丙酸诺龙（甾酮）+缩氨脲苯丙酸诺龙缩氨脲-H2O（二）酯的水解如丙酸睾丸素睾丸素醇制KOHH2O水解二、制备衍生物测定熔点利用甾醇、甾酮类药物与一些试剂反应生成酯、肟、缩氨脲，或用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体，然后测定它们的熔点进行鉴别。23三、紫外分光光度法

一些甾体激素药物分子中存在和共轭系统，在紫外光区有特征吸收。24四、红外吸收光谱一般是将供试品所绘制的IR光谱与药典附录中收载的标准IR图谱进行对照比较（多采用KBr压片法），完全一致者即为同一药物。五、薄层色谱主要用于甾体激素的鉴别、纯度检查及含量测定前分离和制剂稳定性研究，具有简便、快速、灵敏、分离度高等优点。25六、高效液相色谱法在一定的色谱条件下，比较甾体激素样品与其对照品峰的保留时间进行鉴别。一般都规定在含量测定项下的高效液相色谱图中，供试品峰的保留时间进行应与对照品峰的保留时间一致。26第三节特殊杂质检查

甾体激素类药物多由其它甾体化合物或结构类似的其它甾体激素经结构改造而来，所以可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂等杂质。有些杂质与该甾体激素药物结构类似，也具有一定的药理作用而又互不相同，因此在甾体激素类药物的质量控制中，“其他甾体”的限度检查显得很重要。27一、其它甾体的检查我国药典和一些国家近版药典，采用TLC法或HPLC法检查甾体激素类药物中的“其它甾体”。因为该法具有简便、快速、灵敏、分离效果好等优点，而广泛用于甾体激素药物的鉴别、检查结构相似的杂质等质量控制的方法。

采用高低浓度对比法进行，即供试液与对照液均为同一物，但仅浓度有所不同。详见P251~252。结果判断：中国药典正文中对供试品规定了杂质斑点数目和每个杂质斑点不得超过的限量。28二、硒的检查

本类中一些药物在后工序用二氧化硒脱氢，故应检查硒。三、残留溶剂检查（甲醇和丙酮的检查）此为地塞米松磷酸钠残留溶剂检查，中国药典采用GC法检查。四、游离磷酸盐的检查本法系利用在酸性溶液中磷酸盐中磷酸盐与钼酸铵作用生成磷钼酸铵，再经过还原形成磷钼酸蓝（钼蓝）在740nm处有最大吸收。29第四节含量测定常用方法有容量法、比色法、紫外分光光度法、荧光法、气相色谱法、高效液相色谱等。其中紫外分光光度法、四氮唑盐比色法、异烟肼法、铁-酚试剂比色法及HPLC法在药典中均有收载。3