蜂胶灸剂中球松素的测定

蜂胶灸剂中球松素的测定

它具有抗菌、抗癌、肿瘤、阻力、抗炎、镇痛等作用。它是由六种药物（饮酒、胶囊、血栓形成、胶囊、口服等）引起的。蜂胶搽剂(富净搽剂)是以蜂胶为原料开发的治疗皮肤病新药,主要用于治疗病毒性疱疹和细菌性皮炎。蜂胶的主要功效成分是黄酮类,球松素是蜂胶中具有活性的黄酮类成分。用高效液相色谱法测定了10批蜂胶搽剂中球松素含量,为制订该搽剂的质量标准提供了科学方法。1材料和方法1.1色谱进样系统色谱仪:Agilent1100型高效液相色谱仪,包括G1310AisoPump单元泵,G1314AVWD紫外检测器,惠普色谱工作站及20μl手动进样系统(美国惠普公司)。95%乙醇(分析纯,上海振兴化工一厂),甲醇(HPLC纯,江苏汉邦科技有限公司),冰醋酸(分析纯,中国医药集团上海化学试剂公司),三蒸水(实验室自制),球松素对照品(纯度≥99%,FlukaChemicGmbh,80614),富净搽剂(上海新亚药业公司)。1.2方法1.2.1超声波过滤膜制备流动相:含甲醇-1.6%醋酸水溶液(4∶1),均以0.45μm滤膜过滤,并超声波脱气后使用。流速:1.0ml/min。检测波长:289nm。柱温:30℃。1.2.2急性实验将富净搽剂样品用强酸、强碱、强氧化剂进行破坏后,过滤,进样分析。1.2.3试验的最低极限是实验从贮备液中取溶液,用甲醇配置成0.1,0.2,0.4mg/L的溶液,分别取10μl进样,测定最低检测限。1.2.4对照品溶液的制备配制浓度为1,5,10,20,50,100mg/L的球松素对照品溶液,各取10μl进样,按上述色谱条件进行分析。将峰面积A与浓度C进行回归计算。1.2.5加样回收率实验取已测得浓度(15.09mg/L)的样品适量,通过添加球松素对照品(10,15.5,20mg/L),使成3个浓度的溶液,进行加样回收率实验,每个浓度测定5次,每次进样10mg/L。1.2.6精密度与准确度精密称取对照品适量,分别配成5,20,100mg/L的溶液,按上述色谱条件进行分析,1d内测定3次,得日内精密度;上述溶液连续测定3d,得日间精密度。1.2.7重复使用同一样品配制5份依次进样,记录峰面积,计算RSD。1.2.8对照品溶液稳定性测定球松素对照品溶液(20mg/L)置于4℃冰箱内,分别在0,26,28,56,80h测定5次,每次进样10μl,考察对照品溶液的稳定性。样品按测定方法配置成溶液,置于4℃冰箱内,在149h测定5次,每次进样10μl,考察样品溶液的稳定性。1.2.9样品的质量分析精密称取富净搽剂供试品约0.25g,加甲醇溶解并定容至50ml,取此溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图。见图1。2结果2.1理论板数进样分析配制浓度为10g/L的球松素溶液,取10μl进样分析,理论板数按球松素峰计算为2030。对样品溶液进样分析发现,球松素的色谱峰与前后峰的分离度均>1.5。2.2色谱峰的筛选富净搽剂样品用强酸、强碱、强氧化剂进行破坏后进样分析,发现球松素色谱峰和样品中其它黄酮或杂质及破坏产物的色谱峰均分离良好,说明本法专属性强,适用于富净搽剂中球松素的分离测定。2.3线性关系试验线性回归方程:A=38.93C-37.10,r=0.9998(n=6)。表明球松素在1～100mg/L的范围内线性关系良好。经测定本实验方法对球松素的最低检测限为2ng(S/N=3)。2.4rsd率测得高、中、低3个浓度加样回收率依次为96.98%,102.4%,97.66%;RSD分别为2.30%,2.09%,2.05%。测得对照溶液的加样回收率见表1。2.5日密度和精密度测得高、中、低3个浓度的日内精密度分别为1.57%,2.64%,2.92%;日间精密度分别为2.18%,1.97%,2.36%。重复性RSD为0.85%。2.6溶液稳定性2.6.1进样药物峰面积测定mg/L的球松素对照品溶液(置于4℃冰箱内)每隔0,26,28,56,80h进样1次,结果药物峰面积80h内未有明显变化,RSD为1.89%。2.6.2根据测定法制备的样品溶液在样品分析后配置为4℃冰箱内,结果球松素峰面积149h内未有明显变化,RSD为1.08%。2.7色谱图的制备精密称取富净搽剂供试品约0.25g,加乙醇溶解并定容至50ml,滤过,取此溶液10μl注入液相色谱仪,记录色谱图。测得10批富净搽剂中球松素的含量。见表2。3高效液相色谱法用分光光度法测定富净搽剂中总黄酮含量、高效液相色谱法测定其中球松素含量,两种方法结合测定本品所含活性成分的含量,从而更好地控制制剂的质量。球松素于UV200～500nm扫描,发现在289nm处有最大吸收,且在此处没有干扰,所以选择289nm为测定波长;此高效液相色谱法操作简单,特异性、重现性好,灵敏度和准确度均较高,适用于富净搽剂中球松素的含量测定,为搽剂的质量控制提