迷迭香酸稳定性的影响因素研究

迷迭香酸稳定性的影响因素研究

氨基酸[r（e）]-[3-（3-羟基苯基）-1-氧代-2-羟基二苯基]-3，4-二羟基苯丙酸。1958年首次从迷迭香植物(Rosmarinusoffinalis)中分离得到,是一种水溶性的多酚类化合物。由于迷迭香酸具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗血栓和抗血小板聚集、抑制透明质酸酶等多种生物活性,因此越来越受到人们的关注,在国内外食品、化妆品、医药等方面已有着广泛的应用。为此迷迭香酸的添加及贮藏条件就显得尤为重要,但目前罕有关于迷迭香酸稳定性方面的报道。本文对各种处理条件下迷迭香酸的稳定性进行了比较全面的研究,找出影响稳定性的各种因素,为迷迭香酸的安全使用及进一步开发利用提供科学依据。1材料、试剂和设备1.1材料表面纯度80%以上的迷迭香酸天然提取物(本实验室制备),迷迭香酸标准品(Sigma)。1.2化钾、氯化钠、氯化钾、三各酸钠、白砂糖、山梨酸钠、三氮酸钠、三氮酸钠、三氮酸钠、三氮酸钠、三氮酸钠、三氮酸钠等食品级甲醇、乙睛(Merck)均为色谱纯;磷酸、氢氧化钠、盐酸、氯化钾、氯化钠、氯化镁、氯化锌、氯化钙、氯化锰、氯化铝、氯化铁、苯甲酸钠、抗坏血酸、过氧化氢、焦亚硫酸钠均为国产分析纯;蔗糖、食盐、山梨酸钾均为食品级;试验中所用的水均为三重蒸馏水。1.3wsz-33-65型热电升温水浴锅PC2001型高效液相色谱仪:天津市兰博实验仪器设备有限公司;WSZ-133-65型电热恒温水浴锅:上海精密仪器仪表有限公司;FA2004A型电子天平:上海精天电子仪器有限公司;sartoriusPB-10型酸度计:赛多利斯科学仪器有限公司。2方法2.1高效液相色谱法取迷迭香酸标准品10.000mg,用三重蒸馏水配成100mL水溶液,取此液10、8、6、4、2mL,分别置于干净具塞试管中,并加三重蒸馏水体积为0、2、4、6、8mL,充分混匀后,用高效液相色谱检测。以峰面积与标准溶液的质量百分比浓度C(μg/mL),求回归方程。色谱柱为VP-ODS(150×4mm),柱温为25℃,检测波长为280nm,流动相为水(含0.1%H3PO4)和乙腈(60∶40),流速为0.5mL/min。2.2样品溶液的制备精确称取迷迭香酸样品1.000g,用水充分溶解,定容100mL。2.3香酸的稳定性研究2.3.1样品溶液的ph值用氢氧化钠、盐酸配制pH值为3~9的溶液待用。取等量的样品溶液,分别用不同pH值的溶液稀释至相同体积,于室温避光条件下保存。定时取样用高效液相色谱法检测溶液中迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.2光对偶氮胺稳定性的影响取等量的样品溶液,分别置于具塞试管中,在室内避光、室内散射光和日光直射3种条件下进行试验,定时取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.3保存率的测定取等量的样品溶液,分别置于10mL比色管中,于20、40、60、80、100℃的恒温水浴中加热,定时取出冷却到室温后,测定溶液中迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.4保存率的测定取等量样品溶液,分别加入一定量含Na+、K+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Mn2+、Al3+、Fe3+相同浓度的水溶液,混匀后室温避光放置,设对照,定时取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.5保存率的测定取等量的样品溶液,分别加入一定量含食盐和蔗糖浓度为1%、2%、4%、6%、8%、10%的水溶液,混匀后室温避光放置,设对照,取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.6保存率的测定取等量的样品溶液,分别加入一定量含苯甲酸钠和山梨酸浓度为0.05%、0.08%、0.1%、0.2%的水溶液,混匀后室温避光放置,设对照,定时取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.7保存率测定取等量的样品溶液,分别加入一定量含抗坏血酸浓度为0.1%、0.2%、0.4%、1%的水溶液,混匀后室温避光放置,设对照,定时取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。2.3.8保存率的测定取等量的样品溶液,分别加入一定量含过氧化氢和焦亚硫酸钠浓度为0.05%、0.1%、0.2%的水溶液,混匀后室温避光放置,设对照,定时取样测定迷迭香酸含量,计算保存率。3结果与分析3.1绘制标准曲线采用高效液相色谱法,以迷迭香酸的标准品在其最大吸收波长280nm处绘制标准曲线,如图1所示。求得迷迭香酸的回归方程为:Y=8424.8X+16953,R2=0.9994,浓度在20.000mg/L~100.000mg/L范围内呈线性关系。3.2迷迭香酸含量从图2可以看出,在pH3~6的条件下迷迭香酸的含量变化较小;在pH7~9条件下迷迭香酸的含量略有下降,到第5天时测定,迷迭香酸含量变化趋于平缓,保存率均在83%以上,稳定性较好。可以认为,pH对迷迭香酸的稳定性没有较大影响,但其稳定性在pH3~6条件下要强于在pH7~9条件下,因此,迷迭香酸更易于在偏酸性的条件下使用。3.3迷迭香酸保存率和稳定性如图3所示,迷迭香酸对光照较为敏感。在日光直射条件下,迷迭香酸的含量明显下降,在第3周测定时其保存率已下降到45.82%,稳定性极差;在避光条件下迷迭香酸含量变化小,在第5周测定时其保存率为94.66%,且趋势已趋于平缓,稳定性极好;在室内散射光条件下,经过5周时间,迷迭香酸的保存率维持在76%以上,稳定性一般。因此,迷迭香酸在使用及保存时应尽量避光处理。3.4加热时间对迷迭香酸含量的影响由图4可以看出,迷迭香酸对温度的稳定性良好,随着温度的升高稳定性略有下降。在20、40、60℃条件下迷迭香酸的含量变化小,经过7h加热,迷迭香酸的保存率一直在95%以上,稳定性极好;在80℃和100℃条件下,迷迭香酸的含量有所降低,受热7h其保存率仍在86%以上,且变化趋势趋于平缓,稳定性较好。因此可以认为,温度对迷迭香酸的稳定性影响较小,低温更利于迷迭香酸的保存及使用。3.5ca2+保存率如图5所示,Mg2+、Ca2+对迷迭香酸的稳定性影响较大,随着时间的延长,含量明显下降,到第5天测定时,含Mg2+的保存率由84.62%降到了60.29%,含Ca2+的保存率由89.58%降到了71.79%,且二者的保存率仍有明显的下降趋势,稳定性差;Zn2+、Na+、K+、Al3+、Mn2+、Fe3+对迷迭香酸影响较小,到第5天测定时,迷迭香酸的保存率分别在87%、89%、89%、83%、80%、80%以上,且变化趋势均已趋于平缓,稳定性较好。因此,迷迭香酸在保存和使用过程中应尽量避免与Mg2+、Ca2+并存。3.6蔗糖浓度对迷迭香酸稳定性的影响由图6a所示,食盐浓度的增加对迷迭香酸的含量没有影响,其保存率一直保持在96%以上,稳定性极好;从图6b可以看出,蔗糖浓度的增加对迷迭香酸的含量没有影响,其保存率一直在97%以上,稳定性极好。因此,食盐和蔗糖可以跟迷迭香酸很好的共存。3.7山梨酸钾对迷迭香酸稳定性的影响由图7a所示,0.05%的苯甲酸钠对迷迭香酸的含量几乎没有影响,保存率极高;当苯甲酸钠的浓度增大到0.08%时,迷迭香酸的含量明显下降,保存率降到了60%,且随着苯甲酸钠浓度的增加迷迭香酸的保存率逐渐降低。由图7b可以看出,山梨酸钾对迷迭香酸的稳定性有影响,当山梨酸钾的浓度为0.05%时,迷迭香酸的含量减少较小,保存率维持在80%,稳定性一般,随着山梨酸钾浓度的增大,迷迭香酸的含量急剧下降,稳定性变差。因此,迷迭香酸可与浓度低于0.05%的苯甲酸钠和山梨酸钾共同使用。3.8抗坏血酸浓度对迷迭香酸保存率的影响由图8可以看出,抗坏血酸的存在对迷迭香酸的稳定性有一定的影响。当抗坏血酸的浓度为0.1%时,迷迭香酸的保存率变化较小;当抗坏血酸的浓度增大到0.2%时,迷迭香酸的保存率明显下降,在第5天时测定,其保存率降到了72.53%,且仍有继续降低的趋势。随着抗坏血酸浓度的增加,迷迭香酸的保存率有明显的下降趋势。因此,迷迭香酸可与浓度为0.1%的抗坏血酸共存,抗坏血酸的添加浓度控制在0.1%以下,迷迭香酸稳定效果最佳,在使用过程中应该注意。3.9焦亚硫酸钠的浓度如图9a所示,浓度为0.05%的过氧化氢对迷迭香酸的影响较小,在第72h时测定,其保存率为84.39%,且变化趋势趋于平缓,保存率较好;当过氧化氢浓度增大到0.1%、0.2%时,在第4h时测定,其保存率已经分别降低到了56.74%和51.27%,稳定性差。由图9b可见,焦亚硫酸钠的存在对迷迭香酸的含量影响较小,当焦亚硫酸钠的浓度为0.2%时,在第72h时测定,迷迭香酸的保存率为81.73%,且变化趋势趋于平缓,保存率较好。因此,迷迭香酸可以和还原剂焦亚硫酸钠和低浓度的氧化剂过氧化氢共存。4其他保护因素对迷迭香酸稳定性的研究结果表明:迷迭香酸的稳定性较好。食盐和蔗糖对迷迭香酸稳定性的没有影响;pH和温度对迷迭香酸的稳定性影响较小,结果表明迷迭香酸更适宜在酸性以及低温的条