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文档简介

、真菌的分离培养方法（―）平板划线分离法取适合指状青霉的琼脂培养基融化，冷至45°C，注入无菌平皿中，每皿15〜20ml,制成平板待用。如面包、水果、蔬菜等含碳水化合物多的食物上真菌的生长比较明显，可用接种针挑取孢子后直接作划线分离。取要分离的材料（如田土、混杂的或污染的真菌培养物、真菌）少许，投入盛无菌水的试管内，振摇，【或放在三角瓶中，放几颗玻璃珠，震荡摇晃20分钟】使分离菌悬浮于水中。将接种环经火焰灭菌并冷却后，蘸取上述菌悬浮液，进行平板划线（同细菌的划线法）。划线完毕，置温箱中培养2〜5d，待长出菌落后，钓取可疑单个菌落先作制片检查，若只有一种所需要的真菌生长，即可进行钓菌纯培养。如有杂菌可从单个菌落中钓少许菌制成悬液，再作划线分离培养，有时需反复多次，才得纯种。另外，也可在放大镜的观察下，用无菌镊子夹取一段待分离的真菌菌丝，直接放在平板上作分离培养，可获得该种真菌的纯培养。（二）稀释分离法取盛有无菌水的试管5支（每管9ml或10ml），分别标记1、2、3、4、5号。取样品（如田土等1g，水果真菌孢子），投入1号管内，振摇，使悬浮均匀。用1ml灭菌吸管，按无菌操作法，从1号管中吸取1ml悬浮液注入2号管中，并摇匀；同样由2号管取1ml至3号管，依此类推，直至5号管。注意每稀释一管应更换一支灭菌吸管。用2支无菌吸管分别由4号、5号试管中各取1ml悬液，并分别注入2个灭菌培养皿中，再加入融化后冷至45°C的琼脂培养基约15ml,轻轻在桌面上摇转，静置，使冷凝成平板。然后倒置温箱中培养，2〜5d后，从中挑选单个菌落，并移植于斜面上。二.指状青霉培养性状观察指状青霉\真菌界\无性型真菌门\半知菌纲(FungiImperficti)\壳霉目(Sphaeropsidales)\杯霉科(Discellaceae)'指状青霉属'指状青霉指状青霉在固体培养基上的生长表现：菌落：将不同霉菌在固体培养基上培养2〜5d，可见霉菌菌落呈绒毛状、絮状、蜘蛛网状等。菌落大小依种而异，有的能扩展到整个固体培养基，有的有一定的局限性(直径1〜2mm或更小)。很多霉菌的孢子能产生色素，致使菌落表面、背面甚至培养基呈现不同的颜色，如黄色、绿色、青色、黑色、橙色等。识别特征：菌落绒状，暗黄绿色,后变橄榄灰，有特殊的香味;侵害柑橘果实，引起绿霉病。生殖特征：分生孢子梗短，帚状枝大而不规则;产孢瓶体在不同的高度上形成；分生孢子卵形至圆柱形。三.指状青霉的形态观察（一）真菌水浸片的制备及观察常用美兰染色液制备真菌水浸片来观察真菌的菌体形态，并且活细胞能还原美蓝为无色，故可区别死细胞、活细胞。将美兰染色液一滴滴加在干净的载玻片中央，如不染色则加蒸馏水一滴，用解剖针挑取培养3~5天的少量菌丝体放在载玻片的液滴中，将玻片置于解剖镜下，细心地用解剖针将菌丝体分散成自然状态，并加盖干净盖玻片。为避免产生气泡，应先将其一边接触液滴，再慢慢放下盖片，然后置于显微镜载物台上进行观察。观察时注意它们的菌丝有无隔膜、孢子囊柄与分

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