细菌感染的实验诊断

第二章

细菌感染的实验诊断感染的诊断有赖于从标本中检出病原体或检出病原体的可溶性抗原,或病原体的DNA病人血清中检出病原体的抗体本章主要讨论检出病原体的问题第一节实验诊断的目的与要求进行病原学诊断进行药敏试验,指导合理用药用作流行病学调查,追踪传染源研究病原生物与感染的关系一.目的

鲍氏痢疾志贺菌13型暴发

时间：1992年9月发病：26名死亡：10名地点：某婴儿室传染源：慢性携带者产妇传播方式：通过污染操作台接触鼠伤寒暴发

时间：1991年11月地点：某婴儿室发病：55名死亡：23名56件物品（被褥，尿布，奶瓶）中26件检出鼠伤寒沙门菌二.诊断试验的选择有价值的快速简便的特异性和敏感性高的可用的方法:查病原体:直接涂片分离,对纯培养物进行鉴定查可溶性抗原:用已知抗体查DNA:分子生物学方法查抗体:用已知抗原IgMIgG:效价有4倍以上增高三.细菌鉴定流程

双歧检索:以某一试验分表解:用多种试验整体分析数字编码:将多种试验分别编码,数字化后查表革兰氏阴性杆菌葡萄糖发酵+-氧化酶+-弧菌肠杆菌非发酵菌ABCDE甲乙丙丁++--++++----++--+-++组别试验代码结果结果代码总值1A4-01B2-0C1+1

2D4+45E2-0F1+1

15…微量生化反应系统和自动化

各试验孔含不同试验的脱水底物

加入纯化的被检菌

孵育4-24h观察结果人工读取根据编码资料判定菌种或电脑读取第二节临床标本的采集与处理一.标本采集的原则早期,用抗菌药物前根据病原体存在的部位采集相应标本无菌技术,避免正常菌群污染,防止病原体播散采用合适的方法二.标本的处理尽快接种到合适的培养基上根据抵抗力选择保存和运输条件厌氧菌奈瑟菌病毒第三节细菌的形态学检查一.不染色标本用悬滴法或压片细菌是活的,可观察运动加入特异抗体可抑制其运动结合标本来源可作初步诊断,如霍乱,梅毒用相差或暗视野显微镜效果更好压片悬滴法二.染色标本革兰染色(Gramstain):紫色革兰阳性;红色革兰阴性.注意细菌的大小,形状,排列以及着色的均一性抗酸染色(acid-faststain):红色抗酸阳性,蓝色抗酸阴性荧光染色:更易观察特殊染色可用于观察荚膜,鞭毛等细菌的特殊结构第四节细菌的分离培养一.细菌生长的要求培养基:营养物质,pH7.4气体:需氧菌,厌氧菌,兼性厌氧菌,微需氧菌温度:一般37°C时间:一般18~24h二.培养基1.对培养基的基本要求足够的营养物质合适的pH无菌澄清2.培养基的种类按培养基成分分:基础培养基:满足一般细菌要求营养培养基:满足苛求细菌要求鉴别培养基:加有被利用物和指示剂选择培养基:加有抑制剂,能抑制非目的菌生长特殊培养基:满足特殊细菌要求按培养基物理性状分:液体:增菌固体:加2%琼脂,平板用于分离纯种,斜面用于传代或保存细菌半固体:加0.5%琼脂,用于观察动力,保存菌种三.主要的接种方法分区划线法:用于分离纯种,多次烧灼减少菌数,以获取单个菌落连续划线:不要求单个菌落,用于保存或繁殖细菌涂布:使细菌长成菌苔,可观察细菌被抑制情况或用于繁殖细菌倾注平板:少量细菌混于琼脂中倒板,计数,分离纯种四.细菌生长的表现固体基:菌落形成,注意其

大小,形状表面,边缘质地,透明度溶血情况液体基:浑浊,菌膜,沉淀五.纯种的获得纯种是细菌学工作的基础获得方法:划线分离法(倾注平板法)获得大的单个菌落斜面纯培养物纯培养物的外观表现应是一致的六.培养细菌的目的确定有无细菌鉴定细菌药敏试验计数细菌利用细菌:制备菌苗,生产抗生素或基因工程产品第五节细菌代谢产物的检测一.细菌毒素的检测内毒素:致热作用:兔体温鲎试验外毒素:体内:毒素与抗毒素的中和试验体外:Elek平板法:沉淀反应ELISA毒素和抗毒素的中和试验外毒素?外毒素?+已知抗体小白鼠小白鼠结果发病发病有毒性,但不是相应的发病不发病是相应毒素不发病不发病无毒性抗毒素待测细菌沉淀线Elek试验二.生化反应欲检测细菌的生化反应,一般是在合适的培养基中加入被测物和检测其代谢产物的试剂,即在鉴别培养基中进行培养,或直接加试剂于培养物中,观察呈色等现象判定结果

(一)碳水化合物的代谢试验糖(醇)发酵试验:酸,气体氧化-发酵(O/F)试验:ß-半乳糖苷酶(ONPG)试验七叶苷水解试验甲基红试验V-P试验(二)蛋白质和氨基酸的代谢试验

明胶液化试验Indol试验Ura试验H2S试验苯丙氨酸脱氨酶试验氨基酸脱羧酶试验(三)碳源氮源利用枸橼酸盐利用试验丙二酸盐利用试验枸橼酸盐利用试验(四)酶氧化酶试验过氧化氢酶试验硝酸盐还原试验卵磷脂酶试验凝固酶试验CAMP试验胆汁溶菌试验(五)抑菌试验O/129试验杆菌肽试验Optochin试验第六节感染的血清学检测已知抗体检测细菌的抗原用于鉴定细菌已知抗原检测病人血清中的抗体用于诊断感染性疾病一.血清学鉴定了解微生物的抗原结构用已知抗体检测细菌的抗原组合特异性较高多在鉴定的最后进行可用多种血清学方法,细菌多用凝集反应,病毒多用中和试验二.血清学诊断查抗体:用已知抗原IgM:感染的指标IgG:效价有4倍以上增高或高于当地人群水平多用于病程较长的全身性感染第七节感染的分子生物学检测检出病原体DNA证明病原体存在一.核酸检测的用途细菌分类临床诊断,快速鉴定耐药性检测毒素检测流行病学调查二.核酸检测的方法

G+Cmol%PCR限制性内切酶片段长度核酸杂交限制性内切酶酶切分析

限制性内切酶是能够在一定部位切开DNA的酶同样的内切酶可将相同的DNA切成同样数目的，同样大小分子量的片段电泳后对所得图谱进行分析可判断DNA是否相同1989年国外某医院泌尿科3周内从病人血，尿中分出8株不动杆菌，具有相同的耐药性，经SmalI酶切后出现相同片段，但与环境中或其他科室分出的不动杆菌不同，表明泌尿科的病人是由同一克隆引起的爆发某医院ICU病房，从水池和病人标本中分出多株铜绿假单胞菌，将其染色体DNA用XBal酶切，发现彼此之间没有共同的酶切片段图谱，病人之间图谱的也不相同，说明这不是一次爆发第八节动物实验一.动物实验的用途分离细菌,获取纯种检测其致病性,观察发病或死亡,可同时加抗体进行中和试验或保护试验制备抗体诱导变异建立感染模型检测生物制品的安全性

二.实验动物的选择多用易感的小动物,如小白鼠,豚鼠按需要选择纯系,突变系,杂种无菌动物(GF),悉生动物(GB),无特殊病原体动物(SPF),最低限度疾病动物(MDA),普通动物可选用多种途径注射,如腹腔,静脉,皮下,颅内等可供细菌鉴定的方法形态:个体,菌落,液体基生长情况生长需要:氧,温度,营养物生化反应:观察其酶活性抗原性:用已知抗体致病性:动物实验核酸:PCR,酶切片段长度,杂交界_门_纲_目_科_属_种种是具有相同生物学特性的生物聚合群型：生化型，血清型，噬菌体型株：不同来源双命名：金黄色葡萄球菌

staphylococcusaureous

staphylococcussp(spp)疾病病原体的确立分离培养出病原体患者血清病原体抗体有四倍以上增高能复制出动物模型第一节活塞式空压机的工作原理第二节活塞式空压机的结构和自动控制第三节活塞式空压机的管理复习思考题单击此处输入你的副标题，文字是您思想的提炼，为了最终演示发布的良好效果，请尽量言简意赅的阐述观点。第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor压缩空气在船舶上的应用：

1.主机的启动、换向；

2.辅机的启动；

3.为气动装置提供气源；

4.为气动工具提供气源；

5.吹洗零部件和滤器。

排气量:单位时间内所排送的相当第一级吸气状态的空气体积。单位：m3/s、m3/min、m3/h第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor空压机分类：按排气压力分：低压0.2～1.0MPa；中压1～10MPa；高压10～100MPa。按排气量分：微型<1m3/min；小型1～10m3/min；中型10～100m3/min；大型>100m3/min。第六章活塞式空气压缩机

piston-aircompressor第一节活塞式空压机的工作原理容积式压缩机按结构分为两大类：往复式与旋转式两级活塞式压缩机单级活塞压缩机活塞式压缩机膜片式压缩机旋转叶片式压缩机最长的使用寿命-

----低转速（1460RPM），动件少（轴承与滑片），润滑油在机件间形成保护膜，防止磨损及泄漏，使空压机能够安静有效运作；平时有按规定做例行保养的JAGUAR滑片式空压机，至今使用十万小时以上，依然完好如初，按十万小时相当于每日以十小时运作计算，可长达33年之久。因此，将滑片式空压机比喻为一部终身机器实不为过。滑(叶)片式空压机可以365天连续运转并保证60000小时以上安全运转的空气压缩机1.进气2.开始压缩3.压缩中4.排气1.转子及机壳间成为压缩空间，当转子开始转动时，空气由机体进气端进入。2.转子转动使被吸入的空气转至机壳与转子间气密范围，同时停止进气。3.转子不断转动，气密范围变小，空气被压缩。4.被压缩的空气压力升高达到额定的压力后由排气端排出进入油气分离器内。4.被压缩的空气压力升高达到额定的压力后由排气端排出进入油气分离器内。1.进气2.开始压缩3.压缩中4.排气1.凸凹转子及机壳间成为压缩空间，当转子开始转动时，空气由机体进气端进入。2.转子转动使被吸入的空气转至机壳与转子间气密范围，同时停止进气。3.转子不断转动，气密范围变小，空气被压缩。螺杆式气体压缩机是世界上最先进、紧凑型、坚实、运行平稳，噪音低，是值得信赖的气体压缩机。螺杆式压缩机气路系统：

A

进气过滤器

B

空气进气阀

C

压缩机主机

D

单向阀

E

空气/油分离器

F

最小压力阀

G

后冷却器

H

带自动疏水器的水分离器油路系统：

J

油箱

K

恒温旁通阀

L

油冷却器

M

油过滤器

N

回油阀

O

断油阀冷冻系统：

P

冷冻压缩机

Q

冷凝器

R

热交换器

S

旁通系统

T

空气出口过滤器螺杆式压缩机涡旋式压缩机

涡旋式压缩机是20世纪90年代末期开发并问世的高科技压缩机，由于结构简单、零件少、效率高、可靠性好，尤其是其低噪声、长寿命等诸方面大大优于其它型式的压缩机，已经得到压缩机行业的关注和公认。被誉为“环保型压缩机”。由于涡旋式压缩机的独特设计，使其成为当今世界最节能压缩机。涡旋式压缩机主要运动件涡卷付，只有磨合没有磨损，因而寿命更长，被誉为免维修压缩机。

由于涡旋式压缩机运行平稳、振动小、工作环境安静，又被誉为“超静压缩机”。

涡旋式压缩机零部件少，只有四个运动部件,压缩机工作腔由相运动涡卷付形成多个相互封闭的镰形工作腔，当动涡卷作平动运动时，使镰形工作腔由大变小而达到压缩和排出压缩空气的目的。活塞式空气压缩机的外形第一节活塞式空压机的工作原理一、理论工作循环（单级压缩）工作循环：4—1—2—34—1吸气过程

1—2压缩过程

2—3排气过程第一节活塞式空压机的工作原理一、理论工作循环（单级压缩）

压缩分类：绝热压缩：1—2耗功最大等温压缩：1—2''耗功最小多变压缩：1—2'耗功居中功＝P×V（PV图上的面积）加强对气缸的冷却，省功、对气缸润滑有益。二、实际工作循环（单级压缩）1.不存在假设条件2.与理论循环不同的原因：1）余隙容积Vc的影响Vc不利的影响—残存的气体在活塞回行时，发生膨胀，使实际吸气行程（容积）减小。Vc有利的好处—

（1）形成气垫，利于活塞回行；（2）避免“液击”（空气结露）；（3）避免活塞、连杆热膨胀，松动发生相撞。第一节活塞式空压机的工作原理表征Vc的参数—相对容积C、容积系数λv合适的C：低压0.07-0.12

中压0.09-0.14

高压0.11-0.16

λv＝0.65—0.901）余隙容积Vc的影响C越大或压力比越高，则λv越小。保证Vc正常的措施：余隙高度见表6-1压铅法—保证要求的气缸垫厚度2.与理论循环不同的原因：二、实际工作循环（单级压缩）第一节活塞式空压机的工作原理2）进排气阀及流道阻力的影响吸气过程压力损失使排气量减少程度，用压力系数λp表示：保证措施：合适的气阀升程及弹簧弹力、管路圆滑畅通、滤器干净。λp

（0.90-0.98）2.与理论循环不同的原因：二、实际工作循环（单级压缩）第一节活塞式空压机的工作原理3）吸气预热的影响由于压缩过程中机件吸热，所以在吸气过程中，机件放热使吸入的气体温度升高，使吸气的比容减小，造成吸气量下降。预热损失用温度系数λt来衡量（0.90-0.95）。保证措施：加强对气缸、气缸盖的冷却，防止水垢和油污的形成。2.与理论循环不同的原因：二、实际工作循环（单级压缩）第一节活塞式空压机的工作原理4）漏泄的影响内漏：排气阀（回漏）；外漏：吸气阀、活塞环、气缸垫。漏泄损失用气密系数λl来衡量（0.90-0.98）。保证措施：气阀的严密闭合，气缸与活塞、气缸与缸盖等部件的严密配合。5）气体流动惯性的影响当吸气管中的气流惯性方向与活塞吸气行程相反时，造成气缸压力较低，气体比容增大，吸气量下降。保证措施：合理的设计进气管长度，不得随意增减进气管的长度，保证滤器的清洁。2.与理论循环不同的原因：二、实际工作循环（单级压缩）第一节活塞式空压机的工作原理上述五条原因使实际与理论循环不同。4）漏泄的影响5）气体流动惯性的影响1）余隙容积Vc的影响2）进排气阀及流道阻力的影响3）吸气预热的影响2.与理论循环不同的原因：二、实际工作循环（单级压缩）第一节活塞式空压机的工作原理3.排气量和输气系数理论排气量Vt----单位时间内活塞所扫过的气缸容积。实际排气量Q：Q=Vt

λ输气系数λ

：λ＝λtλv

λ

pλl漏泄的影响余隙容积Vc