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文档简介
课题3血红蛋白的提取与分离教学目标教学重点教学难点理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理了解缓冲液的组成及其作用血红蛋白的分离--样品处理凝胶色谱法的原理电泳法分离大分子的原理分离生物大分子的基本思路:
选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。凝胶色谱法(分配色谱法)凝胶:是由多糖类化合物分子(如葡聚糖或琼脂糖)在一定的条件下互相交联在一起构成的多孔小球体(凝胶粒),内部有许多贯穿的通道。凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
凝胶色谱法(分配色谱法)凝胶色谱法的原理①当相对分子量不同的蛋白质通过凝胶时,相对分子量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢;②而相对分子量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。③依据的特性是:蛋白质分子量的大小。凝胶色谱法分离蛋白质过程的动画演示
凝胶色谱法分离蛋白质的原理凝胶色谱柱洗脱:从色谱柱上端不断注入缓冲液,促使蛋白质分子的差速流动。凝胶电泳法电泳带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。类型:琼脂糖凝胶电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳。血液血浆水分其他物质:血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞(最多)血红蛋白(90%)两个α-肽链两个β一肽链四个亚铁红素基团2.血液有哪些成分?1.用鸡的红细胞提取DNA,用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?
鸡的红细胞具有细胞核,含有DNA,便于进行DNA的提取;人的红细胞无细胞核,结构简单,血红蛋白含量丰富,便于提取血红蛋白。
二、实验操作样品处理→粗分离→纯化→纯度鉴定1.样品处理:(一)蛋白质提取和分离步骤(二)操作过程
本课题可选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液来分离血红蛋白。(1)红细胞的洗涤:①洗涤目的:
去除杂蛋白,以利于后续血红蛋白的分离纯化。②洗涤操作:
1、采集血样。注意要加入柠檬酸钠防止血液凝固。2、低速短时间离心(速度越高和时间越长,会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀,达不到分离的效果)3、吸取血浆:上层透明的黄色血浆。4、盐水洗涤:用五倍体积的质量分数
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