骏枣叶片叶绿素提取方法比较

骏枣叶片叶绿素提取方法比较

植物中的绿叶含量是植物生理生化和生态指标的重要指标。它不仅能显示植物的生长发育情况，还能作为确定环境因素的重要指标。目前叶绿素含量的测定方法主要有2种,一种是分光光度法,另一种是SPAD叶绿素仪法1材料和方法1.1材料和试剂骏枣叶片:新疆阿克苏地区;体积分数95%乙醇:天津永晟精细化工有限公司;丙酮:西安化学试剂厂;试剂均为分析纯。1.2设备和设备UV1800紫外可见分光光度计:上海菁华科技仪器有限公司;H2100R高速冷冻离心机:湖南湘仪实验室仪器开发有限公司。1.3国内样品测定九月下旬取样,取骏枣相同二次枝上同一节枣吊中部叶片装入采集箱立即带回实验室擦净、去除叶脉剪碎(不超过2mm)混匀,一部分现用,另一部分放入-20℃冰箱待用,每个指标做3次重复。1.3.1乙醇、丙酮及乙醇-丙酮11混合液比色法取3支25mL试管分别放入0.2g剪碎的骏枣叶片,再向3支试管中分别加入体积分数95%乙醇、体积分数80%丙酮、乙醇-丙酮1∶1混合液各10mL,黑暗处室温(25℃)浸提24h,其间不停摇匀,24h后叶片变白,于663nm和646nm波长下比色。1.3.2研液制备及离心比色分别称取0.2g剪碎的叶片于3个研钵,加入2.5mL研磨液(3个研钵研液分别为体积分数95%乙醇、体积分数80%丙酮、乙醇-丙酮混合液)于室温条件下研磨5min至叶片颜色变白后倒入离心管,洗涤研钵3次,每次2.5mL,共10mL研液,重复3次后立即离心比色,离心前搅拌均匀。1.3.3同时，研磨和钻孔如1.3.2方法黑暗处室温放置2h,其间不停搅拌,叶片变白后离心比色。1.3.4乙醇、丙酮11液的比色法取3支25mL试管分别放入0.2g剪碎的骏枣叶片,再分别加入体积分数95%乙醇、体积分数80%丙酮、乙醇-丙酮1∶1混合液各10mL,在50℃条件下浸提5h,其间不停摇匀,避光,叶片变白后离心比色。1.3.5实验测定采用UV1800型紫外/可见光分光光度计进行比色,本试验中3种浸提液的吸收光谱基本相似2结果与分析2.1两种提取方法的比较2.1.1研磨+温室静置提取法以乙醇为提取液的4种提取方法测得的骏枣叶片中叶绿素a、叶绿素b和叶绿素总含量差异见图1。由图1可以看出,室温静置24h提取的各种叶绿素含量与研磨+室温静置浸提法无显著差异,但显著高于室温研磨提取法和温热静置提取法,其中,叶绿素a提取量分别提高61.18%和90.28%,叶绿素b提取量分别提高76.19%和68.18%,总叶绿素提取量分别提高64.15%和85.11%;研磨+室温静置提取法的叶绿素a和总叶绿素均显著高于室温研磨提取和温热静置提取,其中,叶绿素a提取量分别高出80%和113%,总叶绿素提取量分别高出72.64%和94.68%,而叶绿素b提取量无显著差异;室温研磨提取和温热静置提取在各叶绿素之间均无显著差异;同样是研磨法中的研磨+静置室温提取和室温研磨提取之间差异性显著,原因是后者的提取时间不够充分导致提取叶绿素的量不足。2.1.2叶绿素b的提取由图2可以看出,以体积分数80%丙酮为提取液进行提取:提取叶绿素a时,4种提取方法之间均存在显著差异,表现为室温静置提取>研磨+室温静置提取>温热静置提取>研磨室温提取;对叶绿素b的提取中,室温静置提取法显著高于其他3种提取方法,研磨+室温静置提取显著高于室温研磨提取和温热静置提取,室温研磨提取与温热静置提取之间无显著差异;提取总叶绿素时,4种提取方法之间也均存在显著差异,总叶绿素以室温静置的提取效果较好,达到1.58mg/g,显著高于其他3种提取方法,室温研磨提取的提取效果较差,只有0.36mg/g,显著低于其余3种提取方法,较少的提取量是由于研磨过程中提取的时间太短,叶绿素还未充分提出且叶绿素在研磨过程中分解较快导致的,与徐芬芬等2.1.3两种提取方法对于叶绿素b的提取效果影响由图3可以看出,混合提取液对叶绿素a的提取量变化趋势与2.1.1中的单一乙醇提取液提取量变化趋势相同,室温静置提取与研磨+室温静置提取效果之间差异不显著,室温研磨提取与温热静置提取效果之间差异不显著,前两种提取方法提取效果显著高于后两者提取方法;混合提取液对叶绿素b的提取效果与其对叶绿素a的提取效果变化趋势相同;混合提取液中研磨+室温静置提取总叶绿素的提取效果显著高于其他3种提取方法的提取效果,达到了1.78mg/g,室温静置提取效果其次,室温研磨提取和冷冻材料温热静置提取效果处于同一水平,分别为0.82mg/g和0.86mg/g,提取总叶绿素的效果较差。2.24提取方法提取量总体较高,但与其他方法提取量及背景单同种处理方法下不同浸提液的提取效果比较,对4种提取方法提取的叶绿素做显著性差异分析,结果见表1。由表1可以看出,室温静置法对叶绿素a和叶绿素b的提取量总体高于其他各提取方法的提取量,且与室温研磨提取和温热静置提取存在显著性差异;众多提取方法中,95%vol乙醇室温静置提取(1.74mg/g)、95%vol乙醇研磨+室温静置提取(1.83mg/g)和乙醇-丙酮1∶1混合液研磨+室温静置提取(1.78mg/g)提取效果较好,显著高于其他各处理;80%vol丙酮室温研磨提取效果较其他各处理差,可能由于时间太短,叶绿素提取不够充分,也可能是丙酮极易挥发,提取液量迅速减少而影响