甘青乌头化学成分的分离与鉴定

甘青乌头化学成分的分离与鉴定

甘青乌拉（maxim.）是甘青乌拉科的一种干燥的草本植物。它生长在海拔31500米的高山草地和碎石带。主要分布在青海东部、西藏南部、甘肃南部、四川西部和云南西北部。陕西的秦岭也分布在西藏常用的药物名单之一。BrukerAdvance600核磁共振谱仪,内标为TMS;Agilent6250Accurate-MassQ-TOFLC/MS质谱仪;Agilent6130SQ-MSD质谱仪;Nicolet5700FT-IR光谱仪(美国ThermoNicolet公司);T6新世纪紫外-可见分光光度仪(北京普析通用有限责任公司);Agilent7890A气相色谱仪,FID检测器为Agilent6130SQ-MSD;RUDOLPHAutopolVplus旋光仪(美国鲁道夫公司);X-4显微熔点仪(编号830710080158,上海精密科学仪器有限公司);Waters1515型高效液相色谱仪;LC3000型高压制备液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司生产)。柱色谱硅胶200~300目(青岛海洋化工厂);SephadexLH-20(GE公司,瑞典);ODS(50μm,YMCCo.,日本);高效薄层板GF254(Merck公司,德国);AB-8大孔吸附树脂(净品级,南开大学化工厂,天津);IntersilC常规提取分离用甲醇、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、乙醇、无水乙醇、甲酸等均为北京化工厂分析纯产品。高效液相用色谱甲醇和乙腈为Fisher公司产品。水为娃哈哈纯净水。甘青乌头于2010年8月购于青海三江宝商贸有限公司,经中国中医科学院中药研究所冯学峰研究员鉴定为毛茛科乌头属植物甘青乌头A.tanguticum的干燥全草。2%乙醇法干燥的甘青乌头全草(10kg),粉碎,用95%乙醇热回流提取3次,每次2h,乙醇加入量分别为8,6,6倍药材量,过滤,合并滤液,减压回收溶剂至无醇味;混悬液加水稀释至一定体积,依次用石油醚,乙酸乙酯萃取,分别合并各部分萃取液,回收溶剂得石油醚浸膏(256.04g)和乙酸乙酯浸膏(130.39g);剩余水溶液上AB-8大孔吸附树脂柱,依次用水,30%,60%,95%乙醇洗脱,分别合并各部分洗脱液,减压回收溶剂至干,得水部分(605.00g),30%乙醇部分(407.97g),60%乙醇部分(107.0g)和95%乙醇部分(5.23g)。30%乙醇洗脱部分,经硅胶柱色谱分离,氯仿-甲醇-水(8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1,5∶5∶1)梯度洗脱,共得到13个部分(Fr.1~Fr.13)。Fr.1有沉淀析出,过滤,经甲醇重结晶,得化合物17(150mg)。Fr.2经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.05,8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脱,分为5部分(Fr.2-1~Fr.2-5)。其中Fr.2-3部分出现沉淀,过滤,沉淀经乙醇重结晶,得化合物16(10mg)。Fr.3依次经正相、反相硅胶柱色谱,SephadexLH-20得到Fr.3-1。Fr.3-1经制备HPLC,乙腈-0.1%甲酸水(8∶92)洗脱,得化合物1(t60%乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇(9∶1,8∶2,7∶3,6∶4,5∶5)梯度洗脱,TLC检测,相同组分合并,分为12份(Fr.1~Fr.12)。Fr.7经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇-水(8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脱,得化合物11(40mg)。Fr.8经硅胶柱色谱,氯仿-甲醇-水(9∶1∶0.05,8∶2∶0.125,7∶3∶0.5,6∶4∶1)梯度洗脱,得化合物10(40mg)。3结构评价1材料表面化合物1白色无定型粉末;ESI-MSm/z395[M+Na]2化合物2白色粉末;ESI-MSm/z329[M-H]3-化合物3白色粉末;HR-ESI-MSm/z379.10214[M+Na]4-化合物4白色粉末;ESI-MSm/z379[M+Na]5化合物白色粉末;ESI-MSm/z409[M+Na]化合物6白色粉末;UV(MeOH)λ化合物7黄色无定型粉末。mp201~202℃;ESI-MSm/z901[M-H]化合物8黄色无定型粉末;mp204~205℃;ESI-MSm/z885[M-H]化合物9黄色无定形粉末,mp198.0℃。ESI-MSm/z755[M-H]化合物10淡黄色无定形粉末,mp220.0℃。ESI-MSm/z1071[M+Na]化合物11黄色无定形粉末,mp196.8℃。ESI-MSm/z1063[M-H]化合物12白色针晶;ESI-MSm/z323[M+Na]化合物13白色无定形粉末;ESI-MSm/z339[M+Na]化合物14白色无定形粉末;ESI-MSm/z339[M-H-glc]化合物15白色无定形