第3次修改南京医科07级七年制

鸡肉瘤病毒同源2域转化蛋白1对肝癌细胞增殖迁移能力影响的研究研究生：戴

敏导

师：蔡

兵专

业：肝胆外科南京医科大学07级七年制毕业论文答辩目录1研究背景与现状2研究方法3研究结果4结论5不足与展望研究背景N

Engl

J

Med

2011;

365:1118-1127研究背景中国肿瘤,2014,23(1):1-10.研究现状针对衰老、氧化应激、神经系统等方面1鸡肉瘤病毒同源2域转化蛋白1(Shc1)前几年近几年针对于肿瘤方面[1]

Paneni

F,

et

al.Curr

Vasc

Pharmacol.

2012

Nov;10(6):697-9.目录1研究背景与现状2研究方法3研究结果4结论5不足与展望研究方法(1/2)33例肝癌及癌旁组织RT-PCR

Western

blotShc1肝胆外科2013.1—2013.6分析与临床特征间的联系（性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目、TNM分期、HBVAg、有无肝硬化、Child-Pugh分级、AFP、病理Edmondson分级、血管脉管主干的侵犯等）SPSS卡方检验研究方法(2/2)Shc1MTT法细胞增殖活力细胞划痕试验迁移能力MHCC-97LMHCC-LM3SMMC-7721PLC/PRF/5Hep-G2肝癌细胞系肝癌SMMC-7721细胞siRNA

转染Western

blot筛选目录1研究背景与现状2研究方法3研究结果4结论5不足与展望1.1

SHC1在肝癌细胞中的表达实时半定量PCR检测33例肝癌组织中Shc1的相对表达（0.109±0.027）高于癌旁组织（0.053±0.007）（P＜0.05)研究结果HCCNon-HCC0.40.30.20.10.00.5Real-time

PCRRaletive

expression

of

Shc1524638kDaShc1GAPDH66Western

blotT

N

T

NT

N

T

N注：Shc1编码着3个分子：p52ShcA、p46ShcA和p66ShcA，而p66shcA在人肝脏组织中未见表达。1.2

利用AlphaViewSA软件计算各标本中目的蛋白的密度值并进行如下定义：定义内容例数阳性（+）癌组织/癌旁组织≥122阴性（-）癌组织/癌旁组织＜111*P＜0.05

（以上卡方检验采用Fisher精确计算）项目人数

shc1（+）shc1（-）阳性率（%）Pearson卡方性别

男女2671937473.1

2.2742.9年龄（岁）

≤551310376.9

1.02＞552012860.0肿瘤大小（cm）

＜5cm148657.1

0.99≥5cm1914573.7肿瘤数目

单发2115671.4

0.59多发127558.3TNM分期

Ⅰ、Ⅱ2314960.9

1.15Ⅲ、Ⅳ108280.0HBVAg

阳性2819967.9

0.12阴性53260.0肝硬化

无990100.0

6.19

*有24131154.2Child-Pugh分

A2922775.99.10

*级

B、C4040.0AFP

阴性93633.3

6.19

*阳性2419579.2Edmondson分

Ⅰ、Ⅱ146842.96.20

*级

Ⅲ、Ⅳ1916384.2侵犯血管、胆

无2819967.90.12管主干

有53260.02.1

SHC1基因在肝癌细胞系中的表达肝癌SMMC-7721、Hep-G2、MHCC-97L细胞中Shc1的表达明显高于正常人肝HL-7702细胞（P＜0.05）。Western

blotSMMC-7721细胞

光镜

X102.2

Shc1_siRNA的转染组名转染siRNA空白组--对照组

Control_siRNA干扰组Shc1_siRNA内容不进行转染的细胞转染阴性对照序列且不对目的基因和细胞生长产生影响转染干扰目的基因的特异性siRNA结果显示，SMMC-7721细胞中，空白转染、对照转染以及转染Shc1-homo-710、Shc1-homo-1250和Shc1-homo-1889的相对表达量分别为（1.00±0.091）、（1.18±0.95）、(0.836±0.082)、(0.506±0.060)、(0.708±0.067)Real-time

PCR利用Shc1-homo-1250_siRNA干扰SMMC-7721细胞，发现干扰组中Shc1的表达低于对照组，差异有统计学意

义（P＜0.05）。转染后24小时后Western

Blot干扰有效干扰Shc1的表达后，随着时间的增长，与对照组相比，

7721细胞的生长明显受到抑制（P<0.05）。且空白组与对照组7721细胞生长差异无统计学意义（P＞0.05）。MTT法测细胞生长曲线细胞划痕愈合实验在0h，12h，24h观察，干扰Shc1的表达后SMMC-7721细胞的迁移距离比对照组、空白组减少，差异有统计学意义（P＜0.05）。目录1研究背景与现状2研究方法3研究结果4结论5不足与展望结论与癌旁组织相比，Shc1基因在肝癌组织中高表达；Shc1蛋白的阳性率与术前AFP、病理Edmondson分级呈正相关，与肝硬化、Child-Pugh分级呈负相关。本次实验组的肝癌细胞株中均可见Shc1表达，在SMMC-7721细胞中Shc1表达高于正常肝细胞和其他肝癌细胞；干扰Shc1的表达可抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移能力。目录1研究背景与现状2研究方法3研究结果4结论5不足与展望不足与后续研究本研究对于Shc1基因的研究主要在人肝癌组织的检测以及肝癌细胞学实验上，应进一步行动物学实验，研究Shc1基因对于实验动物肝癌成瘤实验的影响。展望本研究从组织学检验、细胞学实验上验证了干扰Shc1基因能抑制肝癌细胞增殖、迁移能力。望对Shc1在肝癌促生长机制方向上研究的深入能为肝癌的分子靶向治疗提供一定的帮助。在校期间发表论文戴敏，朱海燕，蔡兵.HBV感染与结直肠癌肝转移关系的Meta分析.中华消化外科杂志,2013,12(4):294-297.戴敏，赵鹏，贝明龙，张国强.自身免疫性肝炎合并干燥综合征、桥本甲状腺炎伴白细胞减少1例.世界华人消化杂志,2012,20(17):1585-1587戴敏，李亚兰，朱海燕.自身免疫性肝炎患者血红蛋白及红细胞相关参数检测结果分析.国际检验医学杂志,2012,33(14):1742-1743朱海燕，刘春桂，戴敏[通讯作者]，蔡兵.肝内胆管囊腺癌临床误诊1例.诊断病理学,2014,21(2),126.Tao

HC1,

Wang

HX,

Dai

M,

Gu

CY,

Wang

Q,

Han

ZG,

Cai

B.Targeting

SHCBP1inhibits

cell

proliferation

in

human

hepatocellular

carcinoma

cells.Asian

Pac