第07章 蛋白质的分离、纯化和表征_第1页
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南昌大学生命科学院李思光

生物化学网络教程蛋白质的分离、纯化和表征章节目录一、蛋白的酸碱性质二、蛋白质分子的大小与形状三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀四、蛋白质分离纯化的一般原则五、蛋白质的分离纯化方法蛋白质分子由氨基酸组成，在蛋白质分子中保留着游离的末端α-氨基和α-羧基以及侧链上的各种功能团。因此蛋白质的化学和物理化学性质有些是氨基酸相同的，例如，侧链上功能团的化学反应，分子的两性电解质等。蛋白质和游离氨基酸中相应基团的pKa值不完全相同天然球状蛋白质的可解离基团大多数可被滴定，某些天然蛋白质有一些可解离基团由于埋藏在分子内部或参与氢键形成而不能被滴定蛋白质的等离子点：在没有其他盐类干扰时，蛋白质质子供体基团解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH一、蛋白的酸碱性质蛋白质是一类两性电解质，能和酸或碱发生作用。蛋白质的等电点：蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等时的pH。蛋白质的滴定曲线形状和等电点，在有中性盐存在下可以发生明显变化（一）根据化学组成测定最低相对分子质量（二）渗透压法测定相对分子质量（三）蛋白质的扩散和扩散系数（四）沉降分析法测定相对分子质量（五）凝胶过滤法测定相对分子质量（六）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量RTMr=———lim—πcc→0Mr=————RTsD（1-vρ）-二、蛋白质分子的大小与形状（一）蛋白质的胶体性质蛋白质溶液是一种分散系统。蛋白质溶液由于具有水化层与双电层两方面的稳定因素，所以作为胶体系统是相当稳定的。蛋白质溶液也和一般的胶体系统一样具有丁达尔效应、布郎运动以及不能通过半透膜等性质。（二）蛋白质的沉淀盐析法使蛋白质脱去水化层有机溶剂沉淀法使蛋白质脱去水化层、降低介电常数重金属盐沉淀法pH大于pI时，蛋白质颗粒带负电荷，容易与重金属离子结合成不溶性盐而沉淀。生物碱试剂和某些酸类沉淀法pH小于pI时，蛋白质颗粒带正电荷，容易生物碱试剂和酸类的酸根负离子发生反应生成不溶性盐而沉淀。加热变性沉淀法三、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀

前处理

粗分级分离

细分级分离（一）分离纯化某一特定蛋白质的一般程序动物组织和细胞：电动捣碎机或匀浆器破碎、或超声波破碎植物组织和细胞：石英砂或玻璃粉研磨、或纤维素酶处理细菌：超声波震荡、与砂研磨、高压挤压或溶菌酶处理盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法有些蛋白质提取液体积较大，可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥进行浓缩凝胶过滤、离子交换层析、吸附层析、亲和层析必要时，还可选择电泳法，包括区带电泳、等电聚焦结晶四、蛋白质分离纯化的一般原则（一）根据分子大小不同的纯化方法（二）利用溶解度差别的纯化方法（三）根据电荷不同的纯化方法（四）利用选择性吸附的纯化方法（五）利用对配体的特异生物学亲和力的纯化方法（六）高效液相层析和快速蛋白质液相层析透析和超过滤、密度梯度离心、凝胶过滤等电点沉淀和pH控制、有机溶剂

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