g第七章杂环类药物分析

TheAnalysisofHeterocycles

吡啶类药物的分析

Theanalysisofpyridines

吩噻嗪类药物的分析

TheanalysisofPhenothiazines

苯骈二氮杂卓类药物的分析

TheanalysisofBenzodiazepine

基本要求掌握三种药物中典型药物的结构特征，主要鉴别实验及主要含量测定方法。了解有关物质检查内容及方法熟悉其它含量测定方法

FundamentalrequirementMasteringthestructurecharacteristics,mainidentificationtestsandassays.Understandingthecontentandmethodsofrelevantsubstances.Familiarizingwithotherassays.Thestructuresoftypicaldrugs

ThemainchemicalpropertiesIdentificationtestsRelevantsubstancestests

Assays

Theanalysisofpyridines

—Section1

Thestructuresoftypicaldrugs

Nikethamide（尼可刹米）Isoniazid（异烟肼）Ftivazide（异烟腙）

Protionamide（丙硫异烟胺）

WeakbasicityDeoxidization

Thecharacteristicsofpyridinering

ThemainchemicalpropertiesWeakbasicity

药物母核吡啶环上的氮原子为碱性氮原子，吡啶环的pKb值为8﹒8(水中)。尼可刹米β位上被酰基取代，遇碱水解释放出具有碱性的二乙胺，可进行鉴别。

Thenitrogenonpyridineringshowsbasicity.Inwatersolution,thepKbofpyridineringis8.8.Nikethamideprocessesacylsubstituentandeasilybehydrolyzedtoformbasicdiethylamineunderbasicconditions.Thispropertycanbeusedforidentification.Deoxidization异烟肼吡啶环γ位上被酰肼取代，酰肼基具有较强的还原性，可与某些含羰基的试剂发生缩合反应。

Thepyridineringofisoniazidprocesseshydrazidesubstituent,whichhasstrongreducibility.Soisoniazidcanreactwithsomereagentswhichhavecarbonylgroup.Thecharacteristicsof

pyridinering吡啶环可发生开环反应，此为吡啶环的特性反应。Pyridineringcanbedestroyedtoformspecificcolours.Itisthecharacteristicsreactionofpyridinering.

Identification

Ringopeningreactionofpyridinering

(吡啶环的开环反应)Thereactionofhydrazideradical

(酰肼基团的反应)

PrecipitationreactionDecomposedproductreactionUltravioletabsorptionspectroscopiccharacteristics

(紫外吸收光谱特征)RingopeningreactionKonigreaction

(戊烯二醛反应)吡啶环

溴化氰

戊烯二醛

芳香第一胺

有色Schiff碱类（聚甲炔染料）

Pyridinering

Cyanogenbromide

Glutaconaldehyde

Aromaticprimaryamine

ColoredSchiffalkali（polymethindyes）

本反应适用于吡啶环α、α’为未取代，以及β或γ位为烷基或羧基的衍生物。中国药典用于尼可刹米的鉴别。

Identificationofnikethamide尼可刹米

溴化氰试液

戊烯二醛衍生物（黄色）

苯胺溶液

Nikethamide

CyanogenbromideThederivativeglutaconaldehyde（yellow）

AnilinsolutionIdentificationofisoniazid异烟肼

KMnO4或溴水

氧化

异烟酸

溴化氰

苯胺

联苯胺

戊烯二醛衍生物（黄至黄棕色）

戊烯二醛衍生物（淡红至红色）

Isoniazid

KMnO4orbrominereagent

OxidationIsonicotinicacidCyanogenbromideAnilineBenzidineThederivativeglutaconaldehyde（yellowtobrown）

Thederivativeglutaconaldehyde（pinktored）

Vongerichtenreaction（二硝基氯苯反应）

Undernon-aqueousconditions:吡啶及其衍生物

2，4-二硝基氯苯

加热或熔融

冷却

醇制KOH液

溶液（紫红色）

Pyridineanditsderivative2，4-dinitro-chlorobenzeneHeatingorfusing

CoolingPotassiumhydroxideSolution（mauve）

Alcohol

Theidentificationofftivazide

(Chp2000)异烟腙

2，4-二硝基氯苯

乙醇

水浴煮沸3min

NaOH溶液

静置

溶液（红色）

Ftivazide

2，4-dinitro-chlorobenzolEthanol

Boiling3min

SodiumhydroxidesolutionStandingSolution（red）

WaterbathIdentificationofisoniazid异烟肼乙醇液

硼砂

5%2，4-二硝基氯苯

蒸干

加热10min

甲醇溶液（紫红色）2，4-二硝基氯苯

加碱Isoniazidethanolsolution

Borax

5%2，4-dinitro-chlorobenzeneEvaporatetodrynessHeating10min

methanolSolution（mauve）2，4-dinitrochlorobenzolbaseThereactionofhydrazideradicalReductionreaction异烟肼加水溶解后，加氨置硝酸银试液，即有黑色浑浊出现，并生成氮和金属银，在管壁上产生银镜。

＋AgNO3＋H2O

＋H2N－NH2＋HNO3

NH2－NH2＋4AgNO3

4Ag＋N2＋4HNO3

异烟肼与亚硒酸作用，生成红色硒的沉淀。

＋SeO2

＋N2＋Se＋H2O

Condensationreaction异烟肼的酰肼基，可与芳醛缩合形成腙，析出结晶，测熔点(228-231)。

＋－H2O

Precipitationreaction尼可刹米与硫酸铜及硫氰铁铵作用生成草绿色配位化合物沉淀。

异烟肼、尼可刹米与氯化汞形成白色沉淀。＋CuSO4＋2NH4SCN

2＋(NH4)2SO4

吡啶环可与重金属盐类及苦味酸等试剂形成沉淀。＋HgCl2

(green)(white)Decomposedproductreaction

尼可刹米

NaOH试液

加热

二乙胺臭味逸出（湿润的红色石蕊试纸变蓝）

Nikethamide

SodiumhydroxideHeating

Diethylamineodour（makingtheredlitmuspaperblue）

丙硫异烟胺盐酸加热

硫化氢气体逸出（湿润的醋酸铅试纸变黑）

Prothionamide

HydrochloricacidHeating

Sulfuretedhydrogenodour（makingleadacetateblack）

UltravioletspectroscopiccharacteristicsDrugsSolventλmax（nm）λmin(nm)E1%1cmA

IsoniazidHCl(0﹒01mol/L)265—约420—NikethamideH2SO4(0﹒05mol/L)263—273—NaOH(0﹒01mol/L)255—840—260—860—ProthionamideEthanol（20ug/ml）291——0.78

Water266234378—

Relevantsubstancestests

Thetestsoffreehydrazineinisoniazid

异烟肼是一种不稳定的药物，其中的游离肼在制备时原料引入，或在贮存过程中降解而产生。肼是一种诱变剂和致癌物质，故国内外药典多数规定异烟肼原料及其制剂中游离肼的检查。常采用薄层色谱法、比浊法和差示分光光度法。

Isoniazidisunstable.Freehydrazinecouldbeintroducedbybothsyntheticandstorageprocedures.Hydrazineisamutagenandcancerinducingsubstance.TLC,turbidimetryanddifferencespectrophotometryareusuallyusedfortheexaminationofisoniazidanditspreparations.Thin-layerchromatography

中国药典对异烟肼原料和注射用异烟肼，游离肼的检查，均采用薄层色谱法。异烟肼斑点呈棕橙色的清晰斑点，Rf值约为0.21。游离肼斑点呈鲜黄色，Rf值约为0.3。检出限量约为0.02%。本法检出肼的灵敏度为0.1μg。BP(1993)亦采用本法检查“游离肼及有关物质”

BP与中国药典的检查方法有什么不同？

检查方法取本品，加水制成每1ml中含有50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含有0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照液。吸取供试品溶液10μl与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇-丙酮（3:2）为展开剂，展开后，凉干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。CarryoutthemethodforTLC,usingsilicagelGF254asthecoatingsubstanceandamixtureof50volumesofethylacetate,20volumesofacetone,20volumesofmethanoland10volumesofwaterasthemobilephase。Applyseparatelytothechromatoplate5ulofeachofthefollowingsolutions。Afterremovaloftheplate,allowittodryinairandexamineunderultra-violetlight(254nm)。Anysecondaryspotinthechromatogramobtainedwithsolution(1)isnotmoreintensethanthespotinthechromatogramobtainedwithsolution(2).——Chp——BP（1993）Forsolution(1)dissolve1.0gofthesubstancebeingexaminedinamixtureofequalvolumesofacetoneandwateranddiluteto10mlwiththesamesolvent。Forsolution(2)dissolve50mgofhydrazinesulphatein50mlofwateranddiluteto100mlwithacetone;to10mlthissolutionadd0.2mlofsolution(1)anddiluteto100mlwithamixtureofequalvolumesofacetoneandwater.TurbidimetryJP（13）采用样品中加水杨醛的乙醇溶液观察混浊的方法来控制游离肼的限量。本法操作简便，专属性差，放置时间过长，异烟肼的反应产物也会产生浑浊。游离肼可与水杨醛反应生成不溶于水的水杨醛腙，呈现混浊。

Differencespectrophotometry

利用游离肼于对-二甲氨基苯甲醛可形成黄色缩合产物，在456nm波长处有最大吸收；而异烟肼与上述试剂形成的缩合产物在此波长处无吸收，运用差示分光光度法检测游离肼。

对-二甲氨基苯甲醛连氮(3.125umol/L，虚线）与异烟肼的对-二甲氨基苄叉衍生物（3.65mmol/L,实线)的可见光区吸收光谱图Differencespectrophotometry差示分光光度法：同时制备等摩尔浓度的供试品溶液与参比溶液，二者经不同试剂处理后，使干扰组分的吸收度差值ΔA为零，待测组分的ΔA作为定量信息的方法。

Indifferencespectroscopy,acomponentinamixtureisanalyzedbycarryingoutareactionwhichisselectivefortheanalyte.ThiscouldbesimplybringingaboutashiftinwavelengththroughadjustmentofthepHofthesolutioninwhichtheanalyteisdissolvedorachemicalreactionsuchasoxidationorreduction.Relevantsubstancestestsinnikethamide

尼可刹米在生产和贮存过程中易引入有关物质，结构不清，药典采用薄层色谱法中的高低浓度对照法进行检查。

Whenpreparingandreservingnikethamide,relevantsubstancesareeasilyproduced。Becauseoftheunclearstructures,aTLClimittestbasedonthecomparisonbetweenaconcentratedsolutionofananalyteandadilutesolutionofanimpurityisadopted.AssaysAssaysofIsoniazid

——Potassiumbromatetitration——Bromometrictitration——Iodometrictitration——Non-aqueoustitration

Theassaysofisoniazoneandnikethamide

——Non-aqueoustitration——Ultravioletspectrophotometry

Theassaysofprothionamide

——Non-aqueoustitration——ArgentimetictitrationPotassiumbromatetitration强酸性溶液中用溴酸钾滴定液直接滴定法，用指示剂甲基橙指示终点。每1ml的溴酸钾滴定液（0﹒01667mol/L）相当于3﹒492mg的C6H7N3O。本法用于异烟肼片和注射剂的含量测定。

+2

KBrO3HCl3+3N2

+3H2O+2KBrBromometrictitration中国药典（1963年版）采用此法测定异烟肼的含量。溴在稀盐酸介质中氧化能力强，可使反应快速而定量的进行。剩余溴用碘量法进行测定。每1ml的溴液（0﹒1mol/L）相当于3﹒429mg的C6H7N3O。

KBrO3

+5KBr+6HCl3Br2

+6KCl+3H2O+2Br2

+H2OHCl+N2+4HBrIodometrictitration异烟肼在弱碱性溶液中被过量碘液氧化，反应完成后，酸化，剩余的碘液用硫代硫酸钠液回滴定。每1ml的碘液（0.1mol/L）相当于3﹒492mg的C6H7N3O。

+5I2

+5NaHCO3+

N2+4NaI+5CO2+4H2ONon-aqueoustitration

Non-aqueousalkalimetrictitration

异烟肼分子中吡啶环具有碱性，可用非水碱量法进行含量测定。在冰醋酸中用高氯酸滴定液滴定，以结晶紫为指示剂；或以高氯酸的二氧六环液滴定，以甲红为指示剂

。

Non-aqueousacidometrictitration异烟肼可采用酸量法测定其含量。以二甲基甲酰胺为溶剂，O-硝基苯胺为指示剂，用甲醇纳的苯-甲醇溶液滴定至鲜红色即为终点。

Non-aqueoustitration

我国与国外大多数药典，对异烟腙及其片剂和尼可刹米原料药的含量测定，均采用非水溶液滴定法。

Methodofisoniazonedetermination以玻璃-甘汞电极指示终点，结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸盐滴定液（0.1mol/L）相当于98.93mg的C14H13N3O3H2O。此法也用于异烟腙片的含量测定。

本品约0.15g

精密称定

+冰醋酸10ml+醋酐10ml

微热溶解放冷滴定Methodofnikethamidedetermination：

溶液显绿色，结果用空白试验校正。每1ml的高氯酸盐滴定液（0.1mol/L）相当于17.82mg的C10H14N2O。

本品约1.5g精密称定

+冰醋酸10ml+结晶紫指示剂1滴

滴定

Ultravioletspectrophotometry

尼可刹米注射液，国内外药典多采用紫外分光光度法测定其含量。

测定方法：用内容量移液管精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，用0.5％硫酸溶液分次洗涤移液管内壁，洗液并入量瓶中，加0.5％硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取适量，加0.5％硫酸溶液稀释成每1ml中约含尼可刹米20μg的溶液，在263nm的波长处测定吸收度，按C10H14N2O的吸收系数为292计算，即得。Theassaysofprothionamide

Non-aqueoustitration

丙硫异烟胺的原料药的含量测定采用本法。每1ml的高氯酸盐滴定液（0.1mol/L）相当于18.03mg的丙硫异烟胺。

Argentimetictitration

丙硫异烟胺片的含量测定用此法。每1ml的硝酸银滴定液（0.1mol/L）相当于9.014mg的丙硫异烟胺。

TheAnalysisofPhenothiazines

Thestructuresoftypicaldrugs

ThemainchemicalpropertiesIdentification

testsRelevantsubstancestests

Assays—Section2

Thestructuresoftypicaldrugs

Generalstructure

CommonlyusedPhenothiazines

Drugs

R

R′

HXPerphenazine－Cl

Fluphenazinehydrochloride－CF3HClPromethazinehydrochloride－HHClChlorpromazinehydrochloride

－ClHClUltravioletandinfraredabsorptioncharacteristics

具有紫外和红外吸收光谱特征Easilyoxidation

易氧化呈色Complexationwithmetalions

与金属离子络合呈色ThemainchemicalpropertiesIdentificationtests紫外特征吸收和红外吸收光谱

UVandIR显色反应

Colorreaction分解产物的反应

Decomposedproductreaction

UltravioletcharacteristicabsorptionNamesSolventconcentrationλmaxAE1%

1cm

Perphenazinenon-aqueousethanol72580.65－（ug/ml）

(nm)

Fluphenazineethanol10260－－decanoateFluphenazineHCl(9→1000)10255－553～593HydrochlorideTrifluoperazineHCl(1→20)10256－630hydrochloridePromethazineHCl(0.01mol/L)6249－883～937

hydrochlorideChlorpromazineHCl(9→1000)52540.46915Hydrochloride306－－Colorreaction

氧化剂氧化显色Namessulfuricacidnitricacidhydrogenperoxide

奋乃静－－显深红色；放置后红色渐退去

盐酸异丙嗪

显樱红色，放置后生成红色沉淀，加热即溶解，－颜色渐变深溶液有红色转变为橙红色

盐酸氟奋乃静显淡红色，温热－－后变成红褐色

盐酸氯丙嗪－显红色，渐变淡黄色－

盐酸三氟拉嗪－生成微带红色的白色沉淀；－放置后，红色变深，加热后变为黄色

吩噻嗪类药物分子结构中的未被氧化的二价S能与金属钯离子络合形成有色络合物。

与钯离子络合显色+

PdCl2+22(Fluphenazinedecanoate)(red)Decomposedproductreaction

癸氟奋乃静

碳酸钠及碳酸钾

600℃炽灼

氟化物

酸性茜素锆试液

[ZrF6]2-配位离子（溶液由红色→黄色）

Fluphenazinedecanoate

Sodiumcarbonateandpotassiumcarbonate600℃igniting

Fluoride

酸性茜素锆试液

[ZrF6]2-coordinatingion（solutionfromredtoyellow）

Relevantsubstancestests常用的吩噻嗪类药物，除盐酸奋乃静未列此项检查外，其余六种原料药与其余部分制剂中都规定了该项检查。癸氟奋乃静及其注射液采用薄层色谱法，以盐酸奋乃静为对照品，其它均采用薄层色谱法高低浓度对比法检查。

AlimittestmightbeconductedforrelevantsubstancesinrawmaterialsofcommonlyusedPhenothiazinesanditspartialpreparationsexceptforfluphenazinehydrochloride.ATLClimittest,basedoncomparisonbetweenaconcentratedsolutionofananalyteandadilutesolutionofanimpurity,isusedformostphennothiazinedrugs.Thesyntheticprocedureandsourceofimpurityofpromethazinehydrochloride

Syntheticprocedure

Sourcesofimpurities

Method

Attentions

Syntheticprocedure++HCl,HCl·Sourcesofimpurities中间体（Ⅱ）在强碱条件下，能形成中间体季铵离子，由于亲核性进攻，转位成2-二甲氨基碳正离子，水解为2-二甲基-1-丙醇。再与吩噻嗪母体结合时，主要生成异丙嗪，也有少量N，N，β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺异构体。其结构为：+H2OMethod

薄层色谱法高低浓度对比法检查，该法的灵敏度为0.5μg。Attentions

异丙嗪遇光不稳定，上述检查应在避光条件下操作；溶液应临用时配制，否则，杂质斑点增多。

AssaysNon-aqueoustitration

（非水溶液滴定法）Ultravioletspectroscopy（紫外分光光度法）Ceriumetrictitration

（铈量法）Colorimetricmethods（比色法）Non-aqueoustitration

（吩噻嗪类原料药物国内外药典多采用此法）Themainconditionsofnon-aqueousalkalimetrictitration

NamesAmountof

AmountofglacialAmountofmercuric

Colorof

sampling（g）aceticacid（ml）acetate（ml）ending-pointPerphenazine

FluphenazinehydrochloridePromethazinehydrochlorideChlorpromazinehydrochloride0.150.30.30.2202010aceticanhydride10

－545crystalvioletcrystalvioletcrystalvioletorangeⅣ

cyancyanbluerosebengal

Indicator当某些吩噻嗪类药物在冰醋酸和醋酸汞介质中用高氯酸标准液滴定时，往往会产生红色的氧化物，干扰结晶紫指示剂终点颜色变化的观察。可加入抗坏血酸消除干扰。用电位法指示终点时，加抗坏血酸可使滴定终点的电位突跃更为敏锐。

PrecautionsUltravioletspectroscopy吩噻嗪类药物基于母核三环π系统产生紫外特征吸收光谱，在其最大吸收波长处测定吸收度，利用百分吸收系数计算；或与对照品溶液同时测定，计算含量。

直接分光光度法：盐酸异丙嗪片的测定方法、盐酸异丙嗪注射液的含量测定萃取后分光光度法：盐酸氯丙嗪注射液的测定二阶导数分光光度法：盐酸氯丙嗪注射液的测定

盐酸氯丙嗪与抗氧剂的二阶导数光谱为盐酸氯丙嗪··············为抗氧剂Ceriumetrictitration

基于吩噻嗪类药物在酸性介质中，可被硫酸铈定量氧化进行容量测定。滴定开始时，吩噻嗪先失去一个电子形成一种红色的自由基，到达终点时，溶液中的被测吩噻嗪均失去两个电子，而红色消退，借以指示终点。此法也可采用电位法或永停法指示终点。

Colorimetricmethods

钯离子比色法

Palladiumioncolorimetry本法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪药物的测定。因为Pb2+只与未被氧化的硫共价，当硫原子已被氧化为亚砜或砜时，则不与Pb2+络合。因此，可利用空白对照的方法，消除本类药物中氧化物的干扰。

三氯化铁比色法

Hydrochloricacidcolorimetry

利用吩噻嗪类药物与三氯化铁试液呈色，可进行比色测定。方法系以供试品溶液与0.2％三氯化铁的盐酸（0.1mol/L)溶液，等体积混合后，在一定时间内进行测定。TheanalysisofBenzodiazepine

Thestructuresoftypicaldrugs

ThemainchemicalpropertiesIdentificationtestsSpecificimpuritytests

Assays—Section3Thestructureoftypicaldrugs

(diazepam)(chlordiazepoxide)

Chemicalproperties

两个药物二氮杂卓环上的氮原子具有碱性，故可以和某些有机碱沉淀试剂反应，还可以用非水滴定法测定含量。本类药物具较长的共轭体系，具紫外吸收，溶于硫酸在365nm紫外光下可显不同颜色。

IdentificationtestsPrecipitationreactionDiazotisationreactionafterhydrolyzing

(水解后重氮化-偶合反应)Sulfuricacid-fluorescencereaction

(硫酸-荧光反应)

DecomposedproductreactionTheabsorptionspectrumofUVandIRTLC

Precipitationreaction碘化铋钾试液氯氮卓阿普唑仑盐酸溶液（9→1000）橙红色沉淀盐酸氟西泮水溶液BismuthpotassiumiodidesolutionChlordiazeposideAlprazolamHydrochloricacid（9→1000）SalmonprecipitateFlurazepamhydrochlorideaqueoussolution

氯硝西泮的稀盐酸溶液

碘化铋钾试液

橙红色沉淀

放置

沉淀颜色变深Dilutehydrochloricacidsolutionofclonazepam

Bismuthpotassiumiodidesolution

SalmonprecipitateStanding

ThecolorofprecipitateisdarkerThisreactionisusedfordistinguish.

阿普唑仑的盐酸溶液（9→1000）

硅钨酸试液

白色沉淀

Thehydrochloricacidsolutionofalprazolam（9→1000）

Silicotungsticacidsolution

whiteprecipitate

Thisreactionisusedforidentificationinpharmacopoeia.Diazotisationreactionafter

hydrolyzing氯氮卓

艾司唑仑

奥沙西泮

盐酸溶液（1→2）

加热煮沸

放冷

加亚硝酸钠

加碱性β-萘酚

橙红色

沉淀（奥沙西泮放置后颜色变暗）Chlordiazeposide

Estazolam

Oxazepam

Heatingtoboil

Cooling

Addingsodiumnitrite

Addingβ-naphthol

Salmonprecipitate（afterstandingthecolorofoxazepamisdarker）Hydrochloricacid（1→2）Sulfuricacid-fluorescencereaction

苯骈二氮杂卓类药物溶于硫酸后，在紫外灯（365nm）下，呈现不同颜色的荧光。地西泮为黄绿色；氯氮卓为黄色；艾司唑仑呈现亮绿色；硝西泮显淡蓝色。若在稀硫酸中，则地西泮为黄色；氯氮卓为紫色；硝西泮为蓝绿色；艾司唑仑为天蓝色；奥沙西泮为淡黄绿色。

Decomposedproductreaction

本类药物均为有机氯化合物，经氧瓶燃烧法破坏，生成氯化氢，以5％NaOH液吸收，加硝酸酸化，显氯化物反应。中国药典用于地西泮和三唑仑药物的鉴别。

Organochloriccompound

DestroyedbyoxygenflaskcombustionHydrogenchloride

Absorbingby5%sodiumhydroxidesolutionAcidifyingbynitricacidReactionaschlorideItisusedfortheidentificationofdiazepamandtriazolaminChp.

Specificimpuritytests

RelevantsubstancestestsRelevantsubstancesindiazepamRelevantsubstancesinchlordiazepoxideReverse-phaseHPLCofrelevantsubstancesinchlordiazepoxideDegradationproducttests地西泮中有关物质的检查

杂质来源：

合成过程中因副反应较多，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓和化学结构不清的有关物质。检查方法：薄层色谱法的高低浓度对照法

Relevantsubstancesindiazepam

Thesourcesofimpurities：Becauseofmanysidereactions,N-nor-methyl-phenymethyl-diazepineandrelevantsubstanceswhichstructuresareunclearmightbeconductedwhensynthesizingdiazepam.Methodofexamination:Alimittestbasedoncomparisonbetweenaconcentratedsolutionofananalyteandadilutesolutionofanimpurityisused.RelevantsubstancesinchlordiazepoxideUSP(23)用薄层色谱法检查氯氮卓中的有关物质；BP（1993）以高低浓度对照控制有关物质；中国药典仅以“溶液的澄清度”检查中间体2-氯甲基-4-苯基-6-喹唑啉-3-氧化物等水不溶性杂质。

Reversed-phaseHPLCofrelevant

substancesinchlordiazepoxideConditionsofchromatographyColumn:Nuclcosil10C18(250nm×2.6mm);Thenumberoftheoreticalplates:3000;Mobilephase:methanol-phosphateacidsolution(0.05mol/L)(60:40);Flowrate:1ml/min;Detector:UVdetector;Wavelength:254nm;氯氮卓供试品的HPLC色谱图Ⅰ氯氮卓Ⅱ氨基物Ⅲ氧化物Ⅳ~Ⅵ未知物Degradationproducttests注射剂主要检查2-甲氨基-5-氯二苯酮等分解产物。注射剂采用高效液相色谱法测定含量，采用主成分自身对照法检查分解产物。

色谱条件与系统适用性试验：用十八硅烷键和硅胶为填充剂；甲醇-