克氏原螯虾高ph胁迫试验

克氏原螯虾高ph胁迫试验

ph不仅是一个重要的水分和水环境监护因素，也是影响水产养殖生物生存的重要生态因素。研究表明，甲壳类动物均有其pH耐受和适宜范围，当水体pH偏离其适宜范围时，势必会导致其存活、摄食、生长代谢、离子平衡和外骨骼的矿化作用等受到一定程度的影响克氏原螯虾(1材料和方法1.1养成虾的培养试验虾取自江苏省淡水水产研究所扬中基地。选择规格基本一致、活力好、附肢健全、均体重为(21.11±0.83)g的养成虾用于试验。应激试验前将试验虾暂养在室外水泥池(2m×2m×0.8m,水深30cm)15d,每天早晚(8:00和18:00)各投喂商品料一次，投喂量为虾体重的2%～4%。水泥池采用微流水系统，试验用水为四级过滤后的长江水。1.2急性和慢性ph胁迫试验试验虾暂养15d后禁食24h,随后转入室内养殖箱(70cm×40cm×30cm,水深10cm)中进行高pH应激试验。设置对照(pH7.6)和试验(pH10.2)2个pH处理组，对克氏原螯虾进行急性(0h、3h、6h、12h、24h、5d)和慢性(10、15d)pH胁迫试验。试验组用NaOH调节水体pH,使试验水体pH始终保持在10.2左右,连续处理15d,每个处理3个重复，每个重复20尾虾。试验用水为曝气2d以上的自来水，水温23.5～24.5℃;试验期间正常投喂，并在投喂2h后清除残饵及粪便，同时观察虾的活力，并及时捞出死虾。尽量减少人为干扰，防止额外应激。1.3样品采集和处理参照文献1.4血浆及肝胰腺指标检测肝胰腺、鳃样品解冻后，加入9倍体积的生理盐水冰浴匀浆制成10%匀浆液，以10000r/min离心10min,取上清液待测。血浆指标：总蛋白(TP)、溶菌酶(LZM)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、葡萄糖(GLU)、皮质醇(CORTISOL);肝胰腺指标：超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物(GSH-Px)、丙二醛(MDA);鳃指标：乳酸脱氢酶(LDH)、Na1.5nsd的的值用EXCEL记录数据，以平均值±标准差(Mean±SD)表示。采用SPSS20.0对试验结果进行单因素方差分析(One-WayANOVA)及Duncan多重比较，显著性水平设定为2结果与分析2.1血浆tp、akp活性各时间点对照组血浆免疫指标无显著变化(图1)。高pH急性胁迫下，试验组TP含量随胁迫时间的延长呈上升趋势，胁迫24h时开始显著提高，且显著高于对照组。高pH慢性胁迫下，试验组血浆TP含量进一步提高；试验组与对照组间血浆LZM活性无显著差异。高pH急性胁迫下，6h与5d时试验组血浆AKP显著高于对照组，并于24h恢复至应激前水平。高pH慢性胁迫下，AKP活性显著升高，之后持续保持较高水平；高pH急性胁迫显著提高试验组ACP活性，高pH慢性胁迫下试验组血浆ACP活性先上升后下降，且于胁迫10d时酶活性达到峰值，胁迫后各时间点ACP活性均显著高于对照组。2.2高ph慢性胁迫对血浆皮质醇含量的影响由图2可知，各时间点对照组血糖与皮质醇含量无显著变化。高pH急性胁迫下初期试验组血糖变化不大，5d时血糖含量显著升高，且显著高于对照组。高pH慢性胁迫时，血糖含量呈下降趋势，并于10d时恢复至应激前的状态水平；高pH急性胁迫时试验组血浆皮质醇含量持续升高，于5d时达到峰值。高pH慢性胁迫下，试验组血浆皮质醇含量下降，10d时恢复至正常水平。2.3高ph慢性胁迫对sod及gsh-px活性的影响各时间点对照组克氏原螯虾肝胰腺SOD、GSH-Px、MDA水平无明显变化(见图3)。高pH急性胁迫下试验组SOD活性呈下降趋势，并于24h开始显著低于对照组，胁迫5d时，试验组SOD活性达到最低值。高pH慢性胁迫下，SOD活性显著上升，恢复至应激前水平；与应激前相比，高pH急性胁迫(3～24h)显著降低试验组GSH-Px活性。高pH慢性胁迫下GSH-Px活性先升高后降低，并于10d达到峰值，且显著高于对照组；高pH急性胁迫前期(24h内)试验组MDA含量无显著变化，5d时试验组MDA含量显著上升。高pH慢性胁迫下，试验组MDA含量于胁迫10d时达到峰值，且显著高于对照组。胁迫5～15d之间试验组MDA含量没有显著差异。2.4不同ph对大陆法安全性的影响图4结果显示，各时间点对照组鳃LDH、NKA活力没有显著差异。在高pH急性胁迫初期(12h内),试验组LDH活力呈下降趋势，且显著低于对照组。24h后试验组LDH活力恢复至应激前水平，与对照组相比无显著差异。高pH慢性胁迫下，LDH活力呈下降趋势，但均与对照组没有显著差异；高pH胁迫对试验组鳃NKA活力没有显著影响。随着胁迫时间的延长，试验组NKA活力呈波浪式变化，但均与对照组没有显著差异。3讨论3.1营养状态变化温度、环境氨氮水平和蜕皮周期等均会影响甲壳类血淋巴总蛋白含量，其水平变化反映了机体的营养状态溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性常用于评价机体免疫力。LZM可水解革兰氏阳性细菌细胞壁的乙酰基多糖，从而抑制微生物生长，增强机体免疫力3.2皮质醇对克氏原螯虾血糖的影响应激反应是机体受到紧张性刺激物(应激源)产生的保护性机制，应激状态下，虾通过升高皮质醇来降低合成代谢，加速分解代谢，以应对环境的变化，同时增强糖代谢途径来增强机体供能，导致血糖含量明显升高3.3活性氧自由基在正常生理状态下，动物体内活性氧自由基(ROS)保持着动态平衡状态，当受到应激胁迫时，过多的活性氧自由基会促使机体内脂质发生过氧化反应，生成可对机体细胞造成损伤的MDA3.4高ph刺激对原始头锚虾组织代谢酶活性的影响鳃在呼吸系统平衡、离子交换和渗透压调节方面发挥重要的作用，但极易受到外部因子(水环境)的干扰4机体氧化应激高pH急性胁迫对克氏原螯虾有明显的负面效应，会对血浆、肝胰腺和鳃的免疫防御机制造成损伤，导致机体氧化应激。但