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气相色谱法测定羟基自由基

氨基自由基是氧化能力强的自由基，氧化速度快，反应快。这是生物组织中重要的活性氧。通过氧化，你可以将身体组织的脂质分解为重要的活性氧。因此,对羟基自由基的研究在生命科学及环境科学等领域中引起了人们的广泛兴趣,而测定及筛选抗羟基自由基物质是其中的重要内容之一。目前,测定羟基自由基的方法主要有电子自旋共振法1试验部分1.1nh溶液分析Agilent6890N气相色谱仪。2,4-DNPH溶液:称取2,4-DNPH0.1g溶于24mL浓盐酸中,加水定容至100mL,浓度为5mmol·L试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。1.2煤气表的颜色配置HP-5色谱柱(30m×0.25mm,0.25μm);初始温度200℃,保持时间1min,以18℃·min1.3测试方法1.3.1甲醛-dnph法Fenton反应产生羟基自由基氧化二甲亚砜生成的甲醛,以2,4-DNPH衍生,经四氯化碳萃取,产物甲醛-DNPH在4.195min处出峰。其化学反应如下DNPH经反应,生成反应产物甲醛-DNPH的结构式如下:理论上峰面积与反应生成的甲醛-DNPH的量成正比,因而与参加反应的羟基自由基的量成正比,因此,通过测定甲醛-DNPH峰面积的变化可以间接地定量羟基自由基的产生量。1.3.2产生的氨基酸自由基在10mL比色管中,加入0.067mol·L1.3.3衍生法衍生法在上述混合液中加入2,4-DNPH溶液0.3mL于60℃水浴衍生20min,取出后流水冷却,再加入四氯化碳溶液2mL,振荡5min,静置分层,取下层液1μL进样。2结果与讨论2.1色谱特征分析在试验条件下,甲醛与甲醛-DNPH在6.0min内可达到基线分离,气相色谱图见图1。2.2选择抗甲醛试验条件2.2.1ph值pH在1.8~7.4之间,峰面积逐渐增大,当pH为5.9时峰面积达到最大,再增加pH值,峰面积降低。试验选择pH为5.9。2.2.22、4-dph浓度当参加反应的甲醛标准溶液的浓度为7μmol·L2.2.3dph产生时间和温度试验了衍生反应温度为40℃2.2.4四氯化碳的用量加入四氯化碳溶液0.5~3mL,当四氯化碳溶液用量为2mL时,峰面积达到最大。试验选择四氯化碳的用量为2mL。2.3工作曲线按试验方法对甲醛系列标准溶液进行测定,试验结果表明:甲醛-DNPH的峰面积与甲醛浓度在1~160μmol·L2.4二甲基亚获得羟基自由基试验条件的选择2.4.1二甲基亚浓度当二甲亚砜浓度大于0.4mmol·L2.4.2二甲基苯乙烯的分解时间试验发现当二甲亚砜降解时间为10~25min时,峰面积达到最大且稳定。试验选择降解时间为15min。2.4.3方法的准确性和一致性当没有清除剂存在时,按试验方法对0.5mmol·L2.5电泳法与极谱法的比较清除剂清除羟基自由基IC式中:A胶束电动毛细管电泳测定条件为30mmol·LIC与极谱法相比,

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