茯苓多糖的制备

茯苓多糖的制备

椰子是多孔菌科的一种杏仁菌。从那里提取的椰子糖具有肿瘤、改善人体免疫功能等作用。11.1化合物15-3-甲基苯基-1,3,4-三酮3.4-甲基甲基5,5,5-四甲基-5-羟基甲基5-羟基甲基5-羟基甲基5-1,5,5,5,5,5-三酮3-甲基5,5,5-氢-1,5-三酮3-甲基5,5,5,5-四甲基-5-羟基甲基5-,5-甲基-5-,5-甲基-5,5,5,5-甲基-5-羟基苯基5,5,5,5,5,5,5-甲基-5--5-羟基苯基5-甲基-5,5-甲基-5-羟基苯基5-甲基-5-羟基甲基5-羟基甲基5-甲基-5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5,5-四甲基-5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5--5---5---5---5---5---5---5---5---5---5---5----5-----5-------------------------------------------------------------------------------------------------------------茯苓,NaOH溶液(0.5mol/L),乙醇溶液(95%),醋酸溶液(10%),丙酮(A.R),乙醚(A.R),二甲基亚砜(DMSO)(A.R),正丁醇:无水乙醇:水(3.5:3:3),茚三酮试剂,氨制硝酸银试剂,α-萘酚,浓H1.2微量移液器2-0l托盘天平,分析天平,吸滤瓶,布氏漏斗,真空减压机,磁力搅拌器,干燥箱,四氟乙烯转子,微型高速粉碎机,冰箱,可调式微量移液器(0-1000μl)。22.1茯苓多糖的提取将茯苓用粉碎机粉碎至能通过60目筛。取茯苓粉末共15g,溶于3℃的0.5mol/LNaOH溶液3000ml中。加入四氟乙烯转子在磁力搅拌器中搅拌,至粉末全部溶解,此时溶液呈粘稠状态。置于冰箱中4℃冷藏、过夜。次日抽滤,弃去残渣保留液体。滤液用10%的醋酸溶液中和,直至用广泛pH试纸测其pH6-7之间。再加入等量95%乙醇,于3℃放置过夜。次日抽滤,获取沉淀。接着用流水透析2d后,依次用900ml蒸馏水洗涤,300ml无水乙醇、300ml丙酮、200ml乙醚洗涤。之后,放入干燥器中,减压抽干。置干燥箱中58℃干燥30min,即得茯苓多糖粗品。呈淡黄色细颗粒状结晶,重10.7g。2.2茯苓精制品的制备称取以上茯苓多糖粗品5g,溶于500ml二甲基亚砜(DMSO)中,在室温下用磁力搅拌器搅拌15h后,加入500ml蒸馏水,继续搅拌20min,之后,放置2h,抽滤。沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤,置干燥箱中60℃以下,干燥30min,即可得茯苓精制品,称量质量为4.44g。计算得率:10.7/15×4.44/5×100%=63.344%2.3制备样品液配制样品液:精称多糖精制品80.2mg,溶于100ml的蒸馏水,制成样品液Ⅰ。精称多糖粗品80.2mg,溶于100ml的蒸馏水,充分溶解制成样品液Ⅱ。2.4多酚识别2.4.1样品溶液b1ml于一干燥洁净试管中,加入α-萘酚试液数滴,振摇混匀,沿试管壁加入浓硫酸。2种溶液的交界面显紫红色。2.4.2蛋白或肽类分布的检测用毛细管吸取样品液Ⅰ点于2张层析纸上;同样用毛细管吸取样品液Ⅱ点于2张层析纸上,作好标记。用正丁醇:无水乙醇:水(3.5:3:3)展开剂,展开约2h后取出。点样品Ⅰ的1份以氨制硝酸银试剂喷雾,于105℃烘烤5-10min,显示褐色斑示多糖位置。另1份以茚三酮试剂喷雾,于110℃烘烤5min,显紫色斑应是蛋白(或肽类)位置,但并没有出现。点样品液Ⅱ的2张层析纸同样处理。结果1份显示黄色斑,另1份显示紫色斑。3去除蛋白质等杂质经定性检查结果表明,本法能有效的除去蛋白质等杂质,所以样品液Ⅰ不显示紫色斑。4dmso-碱提取多糖茯苓多糖有多种提取方法,有以水为溶媒的冷浸、热浸、水煮等方法,还有以碱液为溶媒的浓碱提取法及稀碱提取法。这些方法提取的多糖收率低,并含有水溶性的杂蛋白等物质。用浓碱(2mol/LNaOH)浸提,虽然收率比水提法高,但因其溶液稠度较大,难以过滤,