龙须藤干燥藤茎的化学成分及质量评价

龙须藤干燥藤茎的化学成分及质量评价

龙须藤是蔷薇科水生百合类羊蹄科植物。龙须藤是一种干燥的藤本植物，用于治疗增生、关节炎和其他疾病，并在中国福建、湖南、广东和广东均有分布。1植物龙须藤茎干解氨酸酯类LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司);PhenomenexLunaC龙须藤购自广东清平药材市场,经广东药学院中药学院李书渊教授鉴定为豆科苏木亚科羊蹄甲属植物龙须藤Bauhiniachaampionii(Benth.)Benth.的干燥藤茎。PMF1、PMF2、PMF3、PMF4(自制,含有量均大于98%);PMF5(批号111765-200601,含有量98%,中国食品药品检定研究院)。乙腈、甲醇为色谱纯(美国BCR公司);甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醇为分析纯(天津市致远化学试剂有限公司);水为蒸馏水(广州市屈臣氏食品饮料有限公司)。2方法和结果2.1条件1PhenomenexLunaC2.2对照品溶液制备精密称取PMF1、PMF2、PMF3、PMF4、PMF5对照品适量,甲醇制成质量浓度分别为13.888、23.856、10.200、5.982、19.680μg/mL的混合对照品溶液,0.22μm微孔滤膜过滤。2.3乙醇-乙酸乙酯萃取法取龙须藤4.88kg,10倍量70%乙醇提取3次,每次2h,提取液回收乙醇至无醇味,乙酸乙酯以1∶1比例萃取4次,合并乙酸乙酯部位,并回收溶剂,得浸膏A,拌样硅胶(1∶7.8),以平均体积流量为27.5mL/min的洗脱剂CH2.4专业试验2.5下进样2.精密吸取“2.2”项下对照品溶液,在“2.1”项色谱条件下进样5、10、15、20、25、30μL。以对照品质量为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y)进行回归,得回归方程分别为PMF1Y=3837.7X-11687(R2.6仪器精密度试验精密吸取“2.2”项下对照品溶液15μL,在“2.1”项色谱条件下进样6次,测得PMF1、PMF2、PMF3、PMF4、PMF5峰面积RSD分别为0.33%、0.14%、0.37%、0.36%、0.22%,表明仪器精密度良好。2.7重复性试验结果取同一样品,按“2.3”项下方法平行制备供试品溶液6份,分别精密吸取15μL,在“2.1”项色谱条件下测定,测得PMF1、PMF2、PMF3、PMF4、PMF5峰面积RSD分别为0.67%、0.49%、0.49%、1.09%、0.59%,表明该方法重复性良好。2.8溶液稳定性试验按“2.3”项下方法制备供试品溶液,精密吸取15μL,于0、2、4、8、16、24h进样,测得PMF1、PMF2、PMF3、PMF4、PMF5峰面积RSD分别为0.39%、0.41%、0.28%、0.57%、0.47%,表明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.9对照品溶液制备精密称取含有量已知的龙须藤总黄酮9份,每份约10mg,加适量甲醇超声溶解并定容至25mL,精密移取1.26mL,置于10mL量瓶中,分别含龙须藤总黄酮为0.5136mg(低剂量组)、0.5020mg(低剂量组)、0.4980mg(低剂量组)、0.4985mg(中剂量组)、0.4939mg(中剂量组)、0.4939mg(中剂量组)、0.5141mg(高剂量组)、0.5141mg(高剂量组)、0.5141mg(高剂量组),低剂量组加入“2.2”项下对照品溶液2.5mL、中剂量组加入5mL、高剂量组加入7.5mL,甲醇定容,摇匀,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”项色谱条件下测定。结果见表1。2.10样品的包含量测量精密称取3批样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,在“2.1”项色谱条件下测定。结果见表2。3色谱条件的选择本实验首次利用DAD-HPLC法同时测定龙须藤总黄酮中5种多甲氧基黄酮含有量,该方法快速简便,灵敏度高,可用于龙须藤总黄酮的质量控制。选择了二极管阵列检测器(DAD),可同时检测透过样品的所有波长紫外光;若检测器安装钨灯,也可同时进行全波长检查(190~900nm),能得到任意波长色谱图,但由于5种成分均有紫外吸收,故DAD进行同步检测非常方便。在考察乙腈-水不同比例流动相与洗脱方式对含有量测定的影响时发现,相应比例流动相等度洗脱与梯度洗脱均可使各成分分离度良好、基线稳定、峰形与灵敏度符合要求,但考虑到等度洗脱操作更方便、基线更平稳、保留时间适宜,故最终选择35%乙腈-65%水等度洗脱。为使该方法均在定量限(S/N≥10)以上进行检测,经多次试验,最终确定15μL作为进样量。另外,各成分含有量依次为PMF2>P