经口急性毒性实验

经口急性毒性实验经口急性毒性实验第1页急性毒性试验试验动物选择（物种和品系，年纪和体重，性别，分组，预检，禁食）(who?)受试物（what?)染毒方法(how?)剂量选择（how?)毒性作用观察(ending)经口急性毒性实验第2页

一、试验目标1.学习急性毒性试验试验设计标准2.掌握灌胃技术，随机分组方法3.掌握LD50计算方法4.观察和描述受试物中毒特征5.掌握急性毒性分级标准经口急性毒性实验第3页急性毒性作用：指机体一次接触或二十四小时内屡次接触化学物后在短期（最长到14天）内所发生毒性效应，包含普通行为、外观改变、大致形态改变以及死亡效应。经口急性毒性实验第4页

LD50：半数致死剂量

指导起一组受试试验动物半数死亡剂量。常见以表示急性毒性大小。其值越小，表示外源化学物毒性越强；反之，毒性越低。

LD50是经过统计学计算得到毒性参数，是一个统计量，受试验动物个体易感性差异影响较小，所以是最主要急性毒性参数。经口急性毒性实验第5页二、试验原理

选择健康试验动物，依据体重按随机分组方法，依据LD50计算设计标准将动物分成数个染毒组。给予受试物后，了解动物所产生急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡特征以及可能死亡原因，观察受试物毒性反应与剂量关系，求出半数致死剂量（LD50），并依据LD50值将受试物进行急性毒性分级。此次试验采取改进寇氏法。改进寇氏法：利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计方法。要求以下：

每个染毒剂量组动物数相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率<20％，最高剂量组死亡率>80%。经口急性毒性实验第6页三、材料和试剂

1.试验动物：健康成年小鼠，昆明种，普通级，雌雄各60只2.器材：灌胃针，注射器，吸管，容量瓶，滴管，动物体重秤等3.试剂：受试物为1.3g/ml敌敌畏油溶液（湖北荆州），植物油，苦味酸（染色标识）。经口急性毒性实验第7页四、操作步骤1.试验动物选择：昆明种小鼠，雌雄各60（早晨）2.试验动物随机分组和标识（早晨）3.剂量设计及受试物配制（早晨）4.经口染毒（下午）5.中毒体征和动物死亡情况观察统计（下午）6.LD50计算（次日下午）7.结果评价、完成实习汇报（次日下午）经口急性毒性实验第8页

雌雄分开分组，每种性别分6组，每组10只1.动物称重：按体重分在不一样笼中待分组

<16g,16g~,18g~,20g~,22g~,>24g2.随机分组方法每种性别随机分为6组：A、B、C、D、E，F,每轮分别从笼中取一只动物按以下次序到各组，直到动物取完。(雌雄分别分组）第一轮：A、B、C、D、E、F

第二轮：B、C、D、E、F、A

第三轮：C、D、E、F、A、B

第四轮：D、E、F、A、B、C

第五轮：E、F、A、B、C、D

第六轮：F、A、B、C、D、E......

雌雄各5组为剂量组，各剩一组作为溶剂对照（只灌植物油）和备用。分完组后在笼子上做好标识，动物暂不标识，下午灌胃前再标识。

试验动物随机分组

经口急性毒性实验第9页

剂量设计预试验得出LD100、LD0

，各设置五个剂量组，n=5i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)，k=10i雌性：LD100=240mg/kgLD0=90mg/kg雄性：LD100=250mg/kgLD0=100mg/kg经口急性毒性实验第10页改进寇氏法1、剂量设置：雌雄，等比数级，灌胃容量：0.1ml/10g雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28

雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26

㈠雌性5个剂量组

各组浓度㈡雄性5个剂量组

各组浓度

240mg/Kg24mg/ml250mg/kg25mg/ml

187.5mg/Kg18.8mg/ml198.4mg/kg19.8mg/ml

146.5mg/Kg14.7mg/ml157.4mg/kg15.7mg/ml

114.4mg/Kg11.4mg/ml125.0mg/kg12.55mg/ml

90mg/Kg9mg/ml100mg/kg10mg/ml各组浓度＝各组剂量/灌胃容量例雌性最高剂量组浓度＝最高剂量/灌胃容量＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml2、每组实际需要量V＝最终体积＋损耗量＝动物数×平均体重×灌胃容量＋损耗量＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml＝5ml3、雌性最高剂量组溶液(即母液)：雄性最高剂量组溶液（母液）：

24mg/ml配置22.9ml25mg/ml配制24.2ml雌A＝V*K/(K-1)雄A=V*K/(K-1)＝5*1.28/(1.28－1)=5*1.26/(1.26-1)＝22.9ml=24.2ml4、下一组溶液配置：等比稀释法A*（1/K）雌性=A×（1/k）=22.9×(1/1.28)=17.9ml雄性=A×（1/k）=24.2×(1/1.26)=19.2ml从最高剂量组溶液Aml中取出5ml,作为高剂量组。剩下(A-5)ml,加油5ml，混匀后，再从中取出5ml作为下一个剂量组，依次类推，完成时，最低剂量组体积为A，其余各组体积均为5ml.经口急性毒性实验第11页经口染毒1.称重并标识:(每组10只）头，背，尾，右前，右中，右后，左后，左中，左前，全白2.灌胃：0.1ml/10g3.中毒体征和动物死亡情况观察（中毒表现参考教材《毒理学基础》P123）

经口急性毒性实验第12页

中毒体征和动物死亡情况观察1、中毒过程：潜伏期、中毒期、恢复期或死亡时间（只需统计中毒出现时间＆死亡时间）2、中毒症状：参考《毒理学基础》P123，表6-13、死亡判断：呼吸、心跳停顿，瞳孔扩散4、尸体解剖：目标判断发生毒作用靶器官，排除动物意外死亡经口急性毒性实验第13页经口急性毒性实验第14页

★急性毒性试验原始统计（14天）

受试物名称：敌敌畏

受试物性状：乳油

受试物起源：毒理试验室

动物种属品系：小鼠，昆明种

动物起源：同济医学院试验动物中心

染毒路径：经口灌胃室温：日期：

剂量组别动物性别体重染毒量染毒体征及死亡（mg/kg）编号（g）(ml)时间出现时间时间试验操作者：试验统计者：经口急性毒性实验第15页★

LD50计算小鼠经口染毒死亡情况（14天）经口急性毒性实验第16页

结果计算与分析

计算公式：m=lgLD50＝Xk－i（∑p－0.5）

Sm=

式中

Xk：最大剂量对数值

q：存活率

∑p：各剂量组死亡率总和

n：各组动物数

Sm：标准差

i:相邻两剂量组之对数剂量差值

lgLD50及95%可信区间=m±1.96*Sm

反对数求出LD50及95%可信区间

LD50：注明动物种属，品系，性别，路径，受试物纯度经口急性毒性实验第17页经口急性毒性实验第18页等级剧毒高毒中等毒低毒微毒大鼠经口LD50(mg/kg)≤55~50~500~>5000

急性毒性评价我国农药急性经口毒性分级

/Article_Show.asp?ArticleID=659经口急性毒性实验第19页LD50意义标准化化学物毒作用强度，评价其对机体毒性大小，比较不一样化学物毒性大小；为其它毒理试验设计提供参考；比较不一样路径LD50值，取得生物利用度信息；推测人类致死剂量以及中毒后体征，为临床中毒治疗提供参考。经口急性毒性实验第20页实习汇报要求一、目标意义二、试验原理三、试验材料（试验动物，受试物）及仪器四、试验步骤(随机分组，试剂配制）五、试验结果（包含两个表、计算结果）六、结果评价经口急性毒性实验第21页1、说明受试物基础情况（名称、纯度、状态等）和配制方法；2、试验动物种属、等级。试验前动物禁食情况和健康情况；3、染毒剂量（两人小组）和动物分组，体重范围；4、染毒时间，染毒连续时间，