中药制剂分析专业知识专家讲座

第二章中药制剂判别

药品分析教研室中药制剂分析专业知识专家讲座第1页第二章中药制剂判别

1、概念：

中药制剂判别是利用一定方法来确定中药制剂中原料药组成，从而判断该制剂真伪。

中药制剂判别主要内容包含性状判别、显微判别、理化判别等方面，有时在性状判别中还应作对应物理常数测定。本章重点叙述显微判别和理化判别。

中药制剂分析专业知识专家讲座第2页第一节性状判别中药制剂性状是指除去包装后性状。中药制剂性状判别包含大小、色泽、表面特征、质地、气味等方面。

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性状判别内容及描述方法:一、性状判别内容：颜色：从单一色到组合色不等，如红色、深褐色，黄棕色等。形态：如液体可分黏稠液体、液体、澄清液体、澄明液体等。形状：如栓剂可分为球形、鱼雷形、圆锥形、卵形、鸭嘴形等。气：可分为香、芳香、清香、腥、臭、特异、气微、芳香浓郁等。味：可分为甜、酸、苦、涩、辛、凉、咸、辣、麻等。其它：光泽感、滑腻感等。第一节性状判别中药制剂分析专业知识专家讲座第4页第一节性状判别二、各种剂型性状描述

在中药制剂不一样剂型，其性状描述不一定相同。但在描述制剂性状特征时，应以中医药理论为指导。比如：水丸六味地黄丸：本品为灰棕色至黄棕色水丸；气香，味微甜、苦。牛黄解毒片：本品为素片或包衣片，素片或除去包衣后片芯显棕黄色；有冰片香气，味微苦、辛。糖浆剂急支糖浆：本品为棕红色粘稠液体；气香，味甜、微苦、凉。

难点提醒：中药制剂性状判别描述应注意以传统中医药术语来描述。中药制剂分析专业知识专家讲座第5页三、物理常数测定一些中药制剂，还测定一些物理常数（如折光率、旋光度、比旋度、凝点、熔点、相对密度等）。测定这些物理常数能够作为定性判别一个伎俩。第一节性状判别中药制剂分析专业知识专家讲座第6页第二节显微判别

中药制剂显微判别:利用显微镜来观察中药制剂中原药材组织碎片、细胞或内含物等特征，从而判别制剂处方组成。凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末制剂，因为其在制作过程中原药材显微特征仍保留到制剂中去，所以均可用显微定性判别法进行判别。中药制剂分析专业知识专家讲座第7页第二节显微判别

特点及制片方法：特点：中药制剂普通多由二味以上中药材制备而成，制剂中各原药材和辅料显微特征会产生相互影响或干扰。因为制备工艺不一样，有些药材本身原有组织结构特征已不存在。在选择制剂显微判别指标时，要对处方中各药味逐一分析比较，考虑选取能相互区分，互不干扰，能表明该药味存在显微特征作为判别依据。如：“蛇胆川贝散”中，川贝母仅用淀粉粒作为指标。“牛黄解毒片”中大黄用草酸钙簇晶作为判别特征。黄芩、甘草、桔梗系经过水煎、过滤、浓缩至稠膏投料，因为它们显微特征已不存在，故药典没有要求它们显微特征作为该制剂判别特征。中药制剂分析专业知识专家讲座第8页制片方法：中药制剂与中药材粉末相比较在显微判别时，制片方法也不尽相同。为了便于显微观察，制剂必须按不一样剂型经过适当预处理，然后按药材粉末方法装片进行观察。散剂、胶囊剂：取粉末少许，选取适当试液处理后直接进行显微观察。片剂：切开，刮取少许样品，观察；粉末及粗则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。蜜丸：可取1丸从正中切开后，刮取少许样品进行观察第二节显微判别

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但因为蜂蜜粘结药材粉末细胞和组织，难于观察，故普通可采取下面几个方法使粘结组织解离后再进行观察：氢氧化钾法：取蜜丸切开后，取适量于试管中，加5％氢氧化钾溶液适量，加热至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，取出少许置载玻片上，用解剖针撕开，再加适当试液处理后观察。硝铬酸法：取适量样品于试管中，加硝铬酸试液适量，放置，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照1法装置。氯酸钾法：取适量样品于试管中，加硝酸溶液（1→2）及氯酸钾少许，缓缓加热，待产生气泡渐少时，再及时加氯酸钾少许，以维持气泡稳定地发生，至用玻璃棒挤压能离散为止，倾去酸液，加水洗涤后，照1法操作装置。水溶法：把蜜丸切碎后，加水搅拌、洗涤后，放置在离心管中离心分离沉淀，经过屡次重复处理把蜂蜜除尽后再装片观察。第二节显微判别

中药制剂分析专业知识专家讲座第10页第二节显微判别

难点提醒：在本法判别中，只有药材原有组织结构特征能保留到制剂中，才有意义。故普通全部由溶剂提取制剂，不用此法进行判别。不一样剂型其制片方法不一样。应选择在该制剂中没有干扰又能表明该味药存在显微特征作为判别依据。中药制剂分析专业知识专家讲座第11页第三节理化判别

概念：中药制剂理化判别：利用物理、化学或物理化学方法对制剂中所含化学成份进行定性判别，从而判断制剂真伪。中药制剂理化定性判别方法：有普通化学反应法、升华法、光谱法和色谱法等。其中以薄层色谱法最惯用。中药制剂分析专业知识专家讲座第12页一、化学反应法：样品提取：1、以50%-70%乙醇回流提取：提取出多数化学成份；2、以酸性乙醇回流提取：检验酚类、有机酸、生物碱等；3、以水提取：①室温浸泡：检验氨基酸、蛋白质。②60℃热水提取：检验单糖、多糖、皂苷、鞣质及其化苷类。4、以乙醚提取：①滤液检验酯、内酯、苷元；②药渣挥去乙醚，甲醇回流提取：检验各种苷类。5、以升化法提取：升华成份，如游离蒽醌苷元等。6、以水蒸气蒸馏法提取：挥了性成份。第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第13页

为了提升普通化学反应法用于中药制剂判别可靠性，改进其专属性，应该注意以下几点：①应慎重使用专属性不好化学反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等，因为中药材中蛋白质、含酚羟基等类似成份存在较为普遍。②在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰判别反应物质，借以改进判别方法专属性。详细分离精制方法要与被判别成份性质、干扰成份性质和理化反应对反应条件要求相适应等。③采取阴性对照和阳性对照方式，对确定判别方法进行重复验证，预防出现假阳性。第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第14页二、升华法

利用升华法来进行判别中药制剂中一些含有升华性质化学成份。这些成份，在一定温度下能升华与其它成份分离，取升华物显微镜下观察有一定形状，在可见光下观察有一定颜色，在紫外光下观察显出不一样颜色荧光，或者加一定试剂处理后显出不一样颜色或荧光。

第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第15页

操作方法：取金属片，安放在圆孔（直径约2cm）石棉板上，在金属片上放一小金属圈（内径约1.5cm，高约0.8cm），对准石棉板上圆孔，圈内放入预先研细成粉末中药制剂一薄层，圈上放一载玻片。在石棉板下圆孔处用酒精灯小心慢慢加热，火焰距离石棉板约4cm，加热至粉开开始变焦，即去火冷却，可见有升华物附着于载玻片上，将载玻片取下反转，在显微镜下观察其结晶形状或者加适当试剂观察其颜色反应。除另外，尚可用其它装置进行判别。第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第16页三、光谱法

利用光谱法对中药制剂进行定性判别，主要有荧光判别法，可见—紫外分光光度法、红外分光光度法，而其它判别法较少应用。

（一）荧光法（二）可见—紫外分光光度法（三）红外光光度法定性判别

第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第17页荧光法

1、适用范围：组成中药制剂中药材中含有能产生荧光化学成份。

2、操作方法：取制剂提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下（365nm或254nm）观察，或加一定试剂后再进行观察。第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第18页第三节理化判别可见—紫外分光光度法中药材中有些化学成份在可见紫外光区有选择性吸收，显示特征吸收光谱曲线，不一样药材所含成份不一样，在一定条件下利用这些吸收光谱特征，以判别制剂中一些成份。中药制剂分析专业知识专家讲座第19页常见判别方法有：

1、要求吸收波长法：（最惯用）样品经适当处理后，测定其吸收光谱，在一定波优点有最大吸收；2、对照品对比法：取对照品或对照药材及供试品经处理后，制成对照品溶及供试品溶液，分别测定吸收光谱，比较二者吸收光谱一致性；3、要求吸收波长和吸收度法：取样品经处理后，测定吸收光谱，在吸收光谱要求波长下应有若干个吸收峰，并有对应吸收度值；4、要求吸收波长和吸收度比值法：样品在一定波长下应产生对应吸收峰，而且吸收度与对照峰吸收度比值应在一定范围之内，此法条件是要有对照品或参考物；5、多溶剂光谱法：选取不一样极性溶剂按一定次序提取样品，将样品为分若干个溶剂组，然后测定各组吸收光谱，依据所得到特征吸收光谱或导数光谱进行判别。可见—紫外分光光度法中药制剂分析专业知识专家讲座第20页（三）红外光光度法定性判别1、在4000-400cm-1范围间测定中药制剂样品红外吸收光谱。2、制样方法：取样品直接制样，或经溶剂提取后制样。3、该法含有取样少、快速、简便、准确等特点，但当前用于中药制剂判别报道不多。中药制剂分析专业知识专家讲座第21页四、色谱法

㈠纸色谱法㈡薄层色谱法㈢薄层扫描法㈣气相色谱法㈤高效液相色谱法第三节理化判别中药制剂分析专业知识专家讲座第22页（一）纸色谱法

纸色谱法系以纸为载体，以纸上所含水或其它物质为固定相，用展开剂进行展开分配色谱。用比移值（Rf）表示各组成成份位置，但因为影响比移值原因较多，因而普通采取在相同试验条件下与对照物质对比以确定其异同。

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（二）薄层色谱法

薄层色谱法，系将适宜吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，与适宜对照物按同法在同板上所得色谱图对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用以进行中药制剂品判别方法。在中药制剂判别，薄层色谱法为最惯用方法。为了提升试验主要性及分离度，所以薄层色谱有必要进行规范化操作。中药制剂分析专业知识专家讲座第24页

样品供试液制备薄层色谱法使用材料操作方法薄层色谱图统计与保留影响薄层色谱分析主要原因对照品选择

（二）薄层色谱法中药制剂分析专业知识专家讲座第25页1．样品供试液制备1)样品供试液制备：提取方法见第一章。2)净化方法：单一溶剂萃取法分段萃取法液—液萃取法固—液萃取法（二）薄层色谱法中药制剂分析专业知识专家讲座第26页（二）薄层色谱法2．薄层色谱法使用材料薄层板涂布器：点样器材：展开箱（层析缸）显色与检测仪器中药制剂分析专业知识专家讲座第27页①规格：用10cm×10cm，10cm×15cm，20cm×10cm或20cm×20cm规格，要求光滑平整，洗净后不附水珠，晾干。可用手工自制板可预制板，最好使用厚度为1～2mm优质平板玻璃，普通窗玻璃普通不宜用于制作薄层板。薄层板中药制剂分析专业知识专家讲座第28页②吸附剂或载体：惯用有硅胶G、硅胶GF254，硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G，氧化铝，氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小普通要求直径为10～40μm。薄层板中药制剂分析专业知识专家讲座第29页③最惯用吸附剂：加有石膏作粘合剂商品硅胶G，加有荧光剂硅胶GF254，有另加其它粘合剂如羧甲基纤维素钠以加固薄层板面；有品种要求使用加有酸（如硼酸），碱（如氢氧化钠）或缓冲溶液等薄层板。薄层板中药制剂分析专业知识专家讲座第30页涂布器：

应能使吸附剂在玻璃板上涂成一层符合厚度要求均匀薄层。商品有手工、半自动薄层板涂布器，涂布厚度有固定厚度（如25μm）或能够调整两种。中药制剂分析专业知识专家讲座第31页点样器材：最惯用也最方便是定量点样毛细管（微升毛细管），规格有0.5μl、1.0μl、2.0μl、3.0μl、4.0μl、5.0μl及l0μl等。要求是标示容量准确，管端平整光滑，管壁洁净，液流通畅，无堵塞，无污染。微量注射器中药制剂分析专业知识专家讲座第32页展开箱（层析缸）应该用薄层色谱专用展开箱，有平底展开箱和双槽展开箱，还有一个水平或展开箱。中药制剂分析专业知识专家讲座第33页显色与检测仪器喷雾法：喷雾瓶应能在一定压力下使试剂喷成均匀细雾状。浸渍法用浸渍槽为特制浸渍槽，将展开后薄层板平稳放入有显色剂浸渍槽中数十秒至1分钟后取出（揩净薄层板背后残余试剂）显色。中药制剂分析专业知识专家讲座第34页

操作方法:

薄层板制备点样展开检测中药制剂分析专业知识专家讲座第35页薄层板制备除另有要求外，普通制备方法为：将1份吸附剂（如硅胶G）加3份左右水在研钵中用研杵沿一个方向充分研磨，调成均匀糊状物，倒入已准备好涂布器中，在玻璃板上平稳地以直线方向移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布。薄层厚度普通为0.2～0.3mm，涂布好薄层板于室温下在水平台上晾干，再在105～110℃活化约30分钟，置干燥器中备用。中药制剂分析专业知识专家讲座第36页点样

除另有要求外，点样用定量微升毛细管，按要求吸收溶液后，以垂直方向小心接触板面使成圆点状，点样基线与底边距离，点样距离底边以1cm为宜，点间距离视情况为1、1.5或2cm，原点直径应小于3mm；如样品容量较大，或为了改进分离度，也可点宽约2～3mm不一样长度条带。点样时须注意尽可能不要损害薄层表面。中药制剂分析专业知识专家讲座第37页展开

点样后薄层板置入加有展开剂薄层展开箱中，密闭，普通采取上行展开，薄层板浸入展开剂浓度普通要求溶剂最初前沿距原点约5mm，展开至要求开距后马上将薄层板取出，晾干，以备检测。多数品种展距7～9cm已够，需平衡者可在双槽展开箱，如需到达饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿润滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。展开剂要求新鲜配制。中药制剂分析专业知识专家讲座第38页检测色谱斑点本身有颜色者可直接在日光下观察色谱中色斑；本身在紫外光激发下可发射荧光者可直接置紫外光灯下观察荧光色谱；需加试剂后方能显色或发射荧光者，则可将试剂用喷雾器均匀喷洒于薄层板面（或用浸渍法），再按要求直接观察或加热后观察。

中药制剂分析专业知识专家讲座第39页薄层色谱图统计与保留

摄影、数码摄影、复印、扫描或描画。

中药制剂分析专业知识专家讲座第40页影响薄层色谱分析主要原因

常规薄层色谱因为是一个“敞开系统”色谱技术，与柱色谱区分之一是除材料及器材以外，外界环境条件对被分离物质层析行为影响很大，分离机制也很复杂；操作技巧也显著影响色谱质量；

中药制剂分析专业知识专家讲座第41页样品预处理及供试液制备

中药成份复杂，未知成份多，供试液中溶出物质较多，其中有欲测成份也有其它“杂质”，经常因为相互干扰或背景污染而难以得到满意分离效果，故需对样品进行适当提取净化处理。中药制剂分析专业知识专家讲座第42页薄层色谱点样技术

普通在常规薄层板上原点直径小于3mm，高效薄层板要求原点直径小于2mm；点样量不宜过大，最好控制在10μl以下；如在一个位置重复屡次点样时，须注意尽可能不要将原点点成一个空心圈；选取溶剂沸点不宜太高（如正丁醇）或太低（如乙醚）。中药制剂分析专业知识专家讲座第43页吸附剂活性与相对湿度影响

薄层板从干燥器中取出，自开始点样到展开前，薄层板普通是暴露在试验室大气中，其活性取决于试验室环境相对湿度；控制展开时相对湿度：采取一定浓度硫酸溶液或其它调整相对湿度无机盐水溶液控制湿度。中药制剂分析专业知识专家讲座第44页溶剂蒸气在薄层色谱中作用溶剂蒸气相在展开箱中也参加色谱展开而形成三维层析过程，从而对薄色谱层析过程和结果有很大影响；可采取预平衡等方法进行控制。中药制剂分析专业知识专家讲座第45页

温度影响

最直观影响是被分离物质Rf值和物质相互分离度以及斑点扩散等，故试验时应注意温度控制。中药制剂分析专业知识专家讲座第46页中药制剂分析专业知识专家讲座第47页中药制剂分析专业知识专家讲座第48页中药制剂分析专业知识专家讲座第49页中药制剂分析专业知识专家讲座第50页对照品选择

标准品对照：用已知中药制剂某一药材某一有效成份标准品制成对照液，与样品在同一条件下层析，比较在相同位置上有没有同一颜色（或荧光）斑点，以此来控制制剂中这种有效成份。阴阳对照：因为中药制剂中许多化学成份和有效成份不明确，有些已明确但又无标准品，能够采取阴阳对照法处理。采取对照药材和化学标准品同时对照。为了能够准确检验出制剂投料真实性，有时只投化学标准品无法判别出来，假如增加原药材阳性对照液对照就能够克服这一不足之处。

中药制剂分析专业知识专家讲座第51页

阳性对照液制备：把制剂中要判别某对照