瑞替普酶对大鼠脑梗死模型的溶栓作用

瑞替普酶对大鼠脑梗死模型的溶栓作用

中风去世的治疗关键是尽快溶解血肿，消除血管阻塞，恢复血管。以链激酶、尿激酶为代表第一代溶栓药物,终因疗效欠佳及不良反应较多而未得到国际上的普遍认可。重组人组织型纤溶酶原激活剂(recombinanthumantissuetypeplasminogenactivator,rt-PA)作为第2代溶栓药物的代表,在脑梗死发病3h以内,用rt-PA经静脉内溶栓已得到国际上的普遍认可;但其缺点是溶栓治疗的时间窗太短、半衰期短及对于一些难以溶解的血栓疗效欠佳。以瑞替普酶(reteplase,rPA)、替奈普酶(tenecteplase,TNK)等为代表的第3代溶栓药物,多为组织型纤溶酶原激活剂(tPA)的缺失变异体,与第2代溶栓药物相比,具有半衰期更长、溶栓效果更好、应用方便等特点。目前,许多学者已将第3代溶栓药物用于心肌梗死的临床溶栓实验,国外有个别学者已将其用于脑梗死的溶栓实验。1材料和方法1.1材料表面1.1.1动物成年健康Sprague-Dawley大鼠45只,雌雄不拘,体重450~580g由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。1.1.2替普酶、ro红四氮唑由美国AlfaAesar公司提供。瑞替普酶由爱得药业北京有限公司提供。低速自动平衡离心机购自河北省安新县白洋离心机厂。电热恒温水箱购自北京医疗设备厂。手术显微镜购自云南光学仪器厂。1.2方法1.2.1各组大剂量组0.5min空白对照组(12只),小剂量组(12只,0.1MU/kg),中剂量组(12只,0.2MU/kg),大剂量组(12只,0.4MU/kg)。剂量参照厉保秋等1.2.2脑梗死模型的建立参照张新江等1.2.3分级耐对侧转圈分级0级,无缺陷;1级,不能伸展对侧前肢;2级,对侧前肢屈曲;级,轻度向对侧转圈;4级,严重向对侧转圈;5级,向对侧跌倒。注入栓子后评分3级以下的大鼠排除于实验之外。溶栓清醒后、溶栓后24h采用Longa等的分级法进行评分。1.2.5连续冠状切片染色治疗24h神经功能评分后,断头取脑后,从前囟前2.0mm到前囟后4.0mm做连续冠状切片,厚1mm,放入2%的TTC液中,置37℃温水浴30min染色(见图1)。用杨世方等1.2.6组织病理学检查每组取3只脑梗死体积计算后的大鼠的脑组织切片多聚甲醛灌注固定24hr后,脱水,石蜡包埋,切片作HE染色,光镜观察。1.2.7统计处理采用SPSS11.5统计软件对数据进行处理,所有计量资料数据用2结果2.1溶栓活性评分24h内共有7只大鼠死亡,各组栓塞后的Longa评分差异无统计学意义(P>0.05),溶栓清醒后Longa评分(见表1)对照组与各治疗组织间的差异均有统计学意义(P<0.01);小剂量组与中剂量组、大剂量组之间的差异有统计学意义(P<0.01),中剂量组与大剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。2.2异均有统计学意义24h后梗死体积%(见表1)对照组与各治疗组织间的差异均有统计学意义(P<0.01);小剂量组与中剂量组、大剂量组之间的差异有统计学意义(P>0.05),中剂量组与大剂量组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。2.3进神经组织形态未梗死区(见图2-a)脑组织灰质、白质基本正常;梗死区(见图2-b)脑组织水肿明显,呈筛网状结构,神经元肿胀、坏死,可见噬神经细胞现象。对照组2只大鼠死于大面积脑梗死,1只死于窒息;小剂量组1只死于大面积脑梗死,1只死于窒息;对照组1只死于窒息;大剂量组死亡的2只大鼠中有1只脑组织切片可见有点片状出血灶,另1只死于窒息。3对大鼠脑梗死的影响作为第3代溶栓药物的代表,rPA是去糖基化tPA的变异体,含有tPA的527个氨基酸中的355个(氨基酸1~3和176~527),删除了其中的KringleI、Finger、EGF3个结构区,保留了绞链区II(KringleII)及tPA的酶结合点,这两个区具有较好的溶栓作用,上述结构区的缺失未影响这2个区的溶栓作用研究发现,rPA溶栓后与对照组相比梗死体积百分比及行为学表现显著改善。中剂量组的用量与临床心肌梗死溶栓的用量0.287MU/kg体重相当。与对照组相比,小剂量组、中剂量组、大剂量组梗死体积分别减少43.98%、62.77%、65.54%,与Overgaard等结论,rPA溶栓治疗大鼠急性脑梗死可显著减小梗死体积、改善神经功能缺失症状、降低死亡率,且应用方便。如同在心肌梗死的临床溶栓治疗方面一样,在脑梗死的临床溶栓应用可能同样有效,不久的将来或许可成为一种可供选择的疗效更佳的溶栓药物。颈