药物的杂质检查

基本要求一、掌握普通杂质检验原理、方法和计算。二、熟悉特殊杂质检验方法和原理。药物的杂质检查第1页一、药品纯度概念与要求第一节概述1.药品纯度概念：药品纯度是指药品纯净程度。对药品纯度认识是在防治疾病实践中积累起来如：ASA中除了SA外，还存在乙酰水杨酸酐、乙酰水杨酰水杨酸等SA衍生物，含有致敏作用。2.对药品纯度要求伴随临床应用实践和分析测试技术发展，在不停改进，使之愈加完善如：度冷丁（Ⅰ）1948年收入BP，1970年经GC分离判定出两种无效异构体（Ⅱ）和（Ⅲ），有时高达20%～30%。药物的杂质检查第2页例：纯度要求盐酸哌替啶(杜冷丁)无效异构体I无效异构体II药物的杂质检查第3页3.杂质：药品中存在无治疗作用、影响药品稳定性和疗效、甚至对人体健康有害物质。4.药品纯度评价：应把药品性状、理化常数、杂质检验、含量测定等作为一个有联络整体来评价药品纯度。药物的杂质检查第4页5.与试剂纯度不一样，不能用化学试剂规格代替药品标准，更不能将化学试剂看成药品直接用于临床如：试剂规格BaSO4,允许存在可溶性钡盐药品中不允许：可造成医疗事故药物的杂质检查第5页1．杂质起源：生产过程中引入贮藏过程中产生二、杂质起源与种类酸度：水解试剂带入乙醇中不溶物：水解中间体(糊精)SO32-：产品用H2SO3漂白可溶性淀粉：水解不完全药物的杂质检查第6页1．杂质起源：生产过程中引入

贮藏过程中产生二、杂质起源与种类外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、微生物等引发药品产生比如：麻醉乙醚醛及有毒过氧化物药物的杂质检查第7页2．杂质分类依杂质起源分类：普通杂质：含义，品种特殊杂质：含义依杂质毒性分类：信号杂质有害杂质依杂质理化性质分类：有机杂质无机杂质残留溶剂二、杂质起源与种类药物的杂质检查第8页普通杂质:在自然界分布比较广泛,在各种药品生产或贮存过程中轻易引入杂质。如：pH值、溶液澄清度、氯化物、硫酸盐、重金属等特殊杂质：在相关药品生产和贮存过程中，因其生产工艺或药品本身性质可能引入杂质。药物的杂质检查第9页A+B→C→D+E①原料中间产物副产物产品③试剂溶剂催化剂⑤金属容器、管道、装置②制剂时辅料④异构体多晶型药物的杂质检查第10页三、杂质限量检验在不对人体有害、不影响疗效情况下，允许药品中存在一定量杂质1.杂质限量：药品中所含杂质最大允许量表示方法：％或ｐｐｍ（百万分率）2.限量检验：药品中杂质检验，普通不要求测定其含量，而只是检验杂质量是否超出限量。药物的杂质检查第11页惯用方法：对照法

供试液供试液＜对照液相同条件现象现象下反应比较供试液＞对照液对照液现象现象取一定量(C·V)与被检杂质相同纯品或对照品配成对照品溶液，与一定量(S)药品供试溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超出要求。合格不合格药物的杂质检查第12页NaCl对照液葡萄糖

稀硝酸10ml

硝酸银1ml

稀硝酸10ml

硝酸银1ml对照液浊度>供试液浊度药物的杂质检查第13页杂质限量计算：式中：

L杂质程度（%）

C对照液浓度（

g/ml）

V对照液加入体积（ml)

S供试品量(g)注意:单位统一药物的杂质检查第14页例1：对乙酰氨基酚中氯化物检验：取试样2.0g溶于100ml水中，取25ml检验Cl-，与标准NaCl溶液(10μg/ml)5ml对照液相比，不得更深。

C=10μg/mlV=5.0mlS=25

2.0

100=0.5g药物的杂质检查第15页一．氯化物检验法：1.原理：供试液：Ag＋+Cl－→AgCl↓（白色混浊）对照液：标准氯化钠溶液……………2.方法：比浊第二节普通杂质检验方法药物的杂质检查第16页3.讨论黑色背景下，从上至下观察（纳氏比色管“成对”）氯化物适宜浓度：50~80μg/50ml（浊度梯度显著）

硝酸酸性：作用（介质条件）避光（AgCl见光分解）供试液若不澄清（事先过滤）供试液若有色（干扰消除）平行操作标准药物的杂质检查第17页供试品有色：

可采取内消色法，按中国药典附录要求方法处理。供试品+AgNO3放置10min过滤澄清溶液+标准NaCl+水对照溶液供试品+AgNO3+水供试品溶液暗处放置5min后比较+AgNO3+水药物的杂质检查第18页二、硫酸盐检验法1.原理：供试液：SO４2－＋Ba2＋→BaSO４↓（白色混浊）对照液：标准硫酸钾溶液………比浊2.方法药物的杂质检查第19页3.讨论

黑色背景下，从上至下观察硫酸盐适宜比浊浓度：100~500μg/50ml盐酸酸性（介质）供试液如浑浊需滤过供试液若有色（干扰消除）平行操作标准药物的杂质检查第20页三．铁盐检验法

（一）硫氰酸盐法1.原理：供试液：Fe3＋＋6SCN－→[Fe(SCN)6]3－（红色）

对照液：标准铁溶液（硫酸铁铵溶液）……比色2.方法药物的杂质检查第21页3.讨论

白色背景下，从侧面观察盐酸酸性（预防三价铁水解）过硫酸铵作用（氧化二价铁为三价铁）Fe3＋适宜比色范围：10-50μg/50ml色调不一致时或所呈硫氰酸铁颜色较浅不便比较时：可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。平行操作标准药物的杂质检查第22页(二）巯基醋酸法（BP）1.原理巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe2

+

作用生成红色配位离子。2Fe3++2HSCH2COOH2Fe2++SCH2COOH+2H+

SCH2COOHFe2++2HSCH2COOHFe(SCH2COOH)2+2H+Fe(SCH2COOH)2

[Fe(SCH2COOH)2]2-+2H2O

2OH-药物的杂质检查第23页四、重金属检验法

重金属是指在试验条件下与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，因为药品生产过程中碰到铅机会比较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检验时以铅作为代表。

药物的杂质检查第24页

ChP(年版)

第一法(硫代乙酰胺法)

用于溶于水、稀酸和乙醇药品，最惯用

1.原理：

供试液：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2＋→PbS↓+2H＋（黄～棕黑）对照液：标准铅溶液（加硝酸预防Pb2+水解）……2.方法：比浊药物的杂质检查第25页3.讨论白色背景下，从上至下观察

pH3.5醋酸盐缓冲液

Pb2＋适宜比色范围：10~20μg/27ml供试液有色时：供试品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出S产生混浊影响比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+还原成Fe2+再检验。药物的杂质检查第26页第二法（炽灼后硫代乙酰胺法）：用于在水、稀酸、乙醇中难溶，或含芳环、杂环（能与重金属离子形成配位化合物）有机药品

1.原理：炽灼破坏后→Pb2＋→第一法检验

2.方法：500～600℃炽灼第三法（硫化钠法）：用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶液药品（磺胺类、巴比妥类）供试液：Pb2＋＋Na2S→PbS↓＋２Na＋（灰黑色）对照液：标准铅溶液………………介质条件：NaOH碱性条件比浊药物的杂质检查第27页五．砷盐检验法古蔡法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC）（一）古蔡法：※※※

1.原理：金属锌与酸作用产生新生态氢，氢与药品中微量砷盐反应，生成具挥发性砷化氢气体，遇溴化汞试纸产生黄至棕色砷斑，与一定量标准砷溶液在一样条件下生成砷斑比较，颜色不得更深。

药物的杂质检查第28页

As3++3Zn+3H+→3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+

→3Zn2++3H2O+AsH3AsO43-+4Zn+11H+

→4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr2

→3HBr+As(HgBr)3(黄色)2As(HgBr)3+AsH3

→3AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3+AsH3

→3HBr+As2Hg3(棕黑色)2.仪器装置

3.方法：

醋酸铅棉花作用

KI和酸性SnCl2作用标准砷斑用2ml标准砷溶液制成药物的杂质检查第29页供试品、HCl、Zn、KI、SnCl2Pb(Ac)2棉HgBr2试纸返回药物的杂质检查第30页KI和酸性SnCl2作用：

AsO43-+2I-+2H+→

AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+

→AsO33-+Sn4++H2O②I2+Sn2+

→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-AsO43-AsO33-AsH3慢快KISnCl2①将五价砷还原为三价砷，加紧反应速度＋5＋3③抑制锑化氢生成促进AsH3生成④形成Zn-Sn齐，去极化返回药物的杂质检查第31页

Pb(AC)2棉作用：

消除锌粒和供试品中可能含有少许硫化物影响。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(Ac)2PbS+2HAc

返回药物的杂质检查第32页4.供试品处理（1）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等:因在酸中生成H2S,SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检验。用硝酸氧化成硫酸盐可消除。（2）供试品为Fe3+

，能消耗KI，SnCl2

，可先加足量SnCl2。（3）环状结构有机药品，先有机破坏（4）含锑药品，改用白田道夫（Betterdorff）法2As3++3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H+胶态、棕褐色药物的杂质检查第33页（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法

（silverdiethyldithiocarbamate)（Ag-DDC法）

1.原理：供试液：AsH3+6Ag（DDC）→６Ag＋…

（红色胶态）对照液：标准砷溶液………2.仪器装置：

比色或测定A药物的杂质检查第34页Ag(DDC)吡啶溶液(USP)三乙胺-氯仿溶液(ChP)3.方法：白色背景下，从上至下观察；或在510nm处，测定吸收度药物的杂质检查第35页小结其它要求：原理试液作用对照方法砷盐检验法仪器装置药物的杂质检查第36页六、溶液颜色检验法

控制药品中有色杂质含量1.目视比色法5种色调10种色号标准比色液标准贮备液比色原液K2Cr2O7CoCl2CuSO42.分光光度法有色杂质对光有吸收，经过测定吸收度可控制其限量3.色差计法经过比较供试品、标准比色液与水之间色差值黄绿、黄橙黄,橙红棕红药物的杂质检查第37页七、易炭化物检验法检验药品中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色微量有机杂质。这类杂质多数结构未知，常采取加硫酸呈色后与对照液比较方法进行检验。对照液为：标准比色液

由CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4

配制

KMnO4液药物的杂质检查第38页八、溶液澄清度检验法药物的杂质检查第39页八、溶液澄清度检验法澄清：系指供试品溶液澄清度相当于所用溶剂或未超出0.5号浊度标准液药物的杂质检查第40页九、炽灼残渣检验法炽灼残渣：有机药品经炭化或挥发性无机药品加热分解后，高温炽灼，所产生非挥发性无机杂质硫酸盐加硫酸炽灼法：700～800℃;如炽灼残渣需留作重金属检验，则炽灼温度应控制在500～600℃恒重：供试品连续两次炽灼或干燥后重量差异在0.3mg以下限量标准：0.1%-0.2%药物的杂质检查第41页十、干燥失重测定法干燥失重：药品在要求条件下，经干燥后所减失量，以百分率表示检验：药品中水分和挥发性物质1.常压恒温干燥法适合用于受热较稳定药品

温度：105℃2.减压干燥法适合用于熔点低、受热分解药品3.干燥剂干燥法适合用于受热易分解或升华药品干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷药物的杂质检查第42页十一、有机溶剂残留量测定法

主要检验药品在生产过程中引入有害有机溶剂

常采取气相色谱法进行检验①直接进样法②顶空进样法（适合用于挥发性大样品测定）

药物的杂质检查第43页第三节特殊杂质检验特殊杂质：在该药品生产和贮存过程中，依据药品性质、生产方法和工艺条件，有可能引入杂质方法：利用药品和杂质在物理和化学性质上差异进行物理：外观性状、分配或吸附、对光吸收差异化学：对某一化学反应差异杂质与试剂反应药品无反应药物的杂质检查第44页一、色谱分析法（一）TLC1.杂质对照品法判断结果：供试品溶液如显与对照品对应杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深特点：分离效能高，分离同时进行测定，应用广泛需要对照品药物的杂质检查第45页供试品A对照品BA？B前沿原点l0l药物的杂质检查第46页药物的杂质检查第47页2.高低浓度对比法

当杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，采取此法要求：杂质斑点颜色与主成份斑点颜色相同或相近供试液稀释对照液点样、展开、干燥、显色结果判断：供试液所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深（高）（低）药物的杂质检查第48页药物的杂质检查第49页

分类柱填充剂流动相正相色谱硅胶极性小有机溶剂极性化学键合硅胶正己烷,氯仿,二氧六环等反相色谱十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)甲醇/水乙腈/水四氢呋喃/水离子对色谱RP流动相中加离子对试剂离子交换色谱离子交换填料电解质水溶液排阻色谱

凝胶渗透有机凝胶有机溶剂

凝胶过滤玻璃微孔球水溶液

（二）高效液相色谱法(HPLC)药物的杂质检查第50页1.内标法（加校正因子测定法）药物的杂质检查第51页1.内标法（例）药物的杂质检查第52页2.外标法测定需要杂质对照品，进样量能够准确控制药物的杂质检查第53页3.加校正因子主成份本身对照法建立方法时，需要杂质对照品杂质检验时，不需杂质对照品药物的杂质检查第54页4.不加校正因子主成份对照法用于没有杂质对照品时杂质检验对照液：供试品稀释液，进样测得A主

供试液：进样测得杂质∑Ai，杂质∑Ai＜A主即为合格.

药物的杂质检查第55页4.不加校正因子主成份对照法（例）药物的杂质检查第56页5.峰面积归一化法适合用于粗略测量杂质含量L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%比如：利巴韦林中相关杂质检验：药物的杂质检查第57页5.峰面积归一化法（例）药物的杂质检查第58页（三）气相色谱法(GC)

主要用于药品中挥发性杂质检验，其检验方法与HPLC法相同。药物的杂质检查第59页利用药品和杂质对光选择性吸收性质差异（一）紫外分光光度法

在药品无吸收而杂质有吸收波长测定吸收度，要求测得吸收度不得超出某一限值二、光谱分析法药物的杂质检查第60页220260300nm肾上腺酮及肾上腺素紫外吸收曲线λmax310nm药物的杂质检查第61页二、光谱分析法（二）红外分光光度法用于药品中无效或低效晶型测定晶型结构不一样，化学键键长、键角等发生不一样程度改变，造成红外吸收光谱中一些特征峰频率、峰形、强度等出现显著差异。药物的杂质检查第62页药物的杂质检查第63页（三）原子吸收分光光度法

用于金属元素测定试样→预处理→原子化器→待检元素原子蒸气