维生素a、c、e对克氏原螯虾幼虾生长和生长的影响

维生素a、c、e对克氏原螯虾幼虾生长和生长的影响

克氏原始繁殖虾（procalanude权益）也被称为小型水生隆虾，属于甲壳类、足食、海关科和元海虾。它是中国重要的淡水经济虾。由于克氏原螯虾肉味鲜美,营养丰富1材料和方法1.1研究基地养殖虾实验用克氏原螯虾幼虾为在华中师范大学克氏原螯虾研究基地饲养孵化出来的虾。随机选取2月龄大的克氏原螯虾,平均体质量(0.518±0.009)g,体形相近,肢体健全,健康活泼。1.2实验方法1.2.1实验虾及饲料将三个因子(维生素A、C、E添加量)各设3个水平,维生素A(V将各因子按照各水平分别添加到基础饲料中,安排了18种饲料配方,具体配方见表2,糊精用来补平差额部分。饲料混合均匀后,用压面机压制成长条,再切成2mm左右长的颗粒,于烘箱内60℃烘干8h,然后密封贮存在4℃冰箱内备用。饲料在实验用水中3h内不散。将实验虾分为18组,每组25只。实验时每日喂食两次,分别为8:00—9:00,17:00—18:00,喂食量以第二次喂食时略有剩余为准。每日吸去水族箱内残饵与排泄物,并换水。充氧泵持续充氧,水温19℃左右。50d后测定生长指标(成活率、增重率)、免疫相关指标及免疫相关基因的表达量。其中,各组相同的饲料成分为:小麦粉,15%;玉米粉,15%;鱼粉,20%;黄豆粉,40%;鱼油,2%;矿物质,1.5%。矿物质的组成(质量百分比)如下:KCl,2.8%;NaH1.2.2幼虾存活率的计算实验结束时,用电子天平测量克氏原螯虾幼虾的体质量(精确到0.001g)。克氏原螯虾幼虾的成活率、增重率按公式计算:存活率(%)=100×(实验结束时幼虾的数量/实验开始前幼虾的数量);增重率(%)=100×(实验结束时幼虾体质量-实验开始前幼虾体质量)/实验开始前幼虾体质量。1.2.3抗氧化酶活性的测定实验结束后,取虾肝胰腺和鳃放入400μL的双蒸水中,冰上匀浆,4℃8,000g离心15min,取上清,放入-80℃冰箱中备用。蛋白浓度的测定参照南京建成试剂盒说明书,先测定各样品的蛋白浓度、然后根据其浓度加水稀释,使不同样品的浓度大致一致,且浓度在试剂盒说明书中规定的范围,最后再测各样品的蛋白浓度。丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定参照南京建成试剂盒说明书。酚氧化酶(PO)活性测定方法见参考文献1.2.4与免疫相关的基因发现的测定RNA提取和基因表达分析参考本研究组前期的方法2结果2.1维生素a、c、e的添加量对克氏原螯虾幼虾成活率和增重率的影响不同维生素添加量组合下,克氏原螯虾幼虾的成活率不同。根据表4的极差分析可以发现,在实验所设计的三个因子中,C因子(维生素E的添加量)的极差值(12.7)最大,说明其对克氏原螯虾幼虾的成活率的影响最大,其次是B因子(维生素C添加量),而A因子(维生素A添加量)的极差值(4)最小,且小于空列的极差值(5.4),说明其对克氏原螯虾幼虾的成活率没有实质性的影响。由表4分析可以发现,因子水平组合为A克氏原螯虾幼虾增重率的极差分析结果见表4。由表4可知,C因子(维生素E的添加量)的极差最大,说明其对克氏原螯虾幼虾的增重率的影响最大,其次是A因子,而B因子的极差值(5.6)小于空列的极差值(11.8),说明其对克氏原螯虾幼虾增重率的影响没有重要影响。由表4分析可以发现,因子水平组合为A2.2维生素a、c、e的添加量对克氏原螯虾mda和sod活性的影响丙二醛(MDA)是脂质过氧化反应的最主要的产物之一,其在体内过多积累会对细胞产生毒害,因此其在体内含量越低,说明机体免疫力越高,清除这些毒害物质的能力越强。由表5可知,三个因子都对克氏原螯虾幼虾肝胰腺中MDA含量有实质性影响,其中B因子影响最大,A因子影响最小。由表5分析可以发现,因子水平组合为A超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内重要的抗氧化酶,能够清除体内自由基,对抗与阻断氧自由基对细胞造成的损害。现有研究发现,在虾、蟹等甲壳动物中,饲料中添加适当的维生素提高了机体的抗氧化能力,使得机体内过氧化产物较少,而较低水平的过氧化产物(如MDA)不能刺激SOD活性,所以免疫力增高时会出现MDA含量和SOD活性都比较低的现象酚氧化酶(PO)是在氧分子存在下,能把酚类氧化成醌的酶,进而形成黑色素,在机体免疫过程中起重要作用。已有研究表明,克氏原螯虾肝胰腺中PO活性较低,而鳃组织中PO活性较强2.3sod基因相对表达量的影响SOD基因编码超氧化物歧化酶,如前所述这是清除自由基的主要酶,负责抵抗氧化胁迫。由表6可知,三个因子都对克氏原螯虾幼虾肝胰腺中SOD基因相对表达量有实质性影响,其中B因子影响最大,A因子影响最小。如上所述,甲壳动物的免疫力提高时,会出现MDA含量和SOD活性都很低的现象GPx基因编码谷胱甘肽过氧化物酶(GPx),这是包括甲壳动物在内的许多生物抗氧化系统中的一个关键酶。本课题组前期的工作表明,GPx在克氏原螯虾的免疫过程中起重要作用3维生素c添加量对克氏原螯虾幼虾生长和免疫的影响研究中发现,在所设计的三个因子中,维生素E添加量对克氏原螯虾幼虾的成活、生长和免疫的影响最大。在成活率和增重率这两个指标中,维生素E是最重要的影响因子。维生素E对MDA含量、PO活性以及SOD和GPx基因表达水平也有实质性的影响。这与其他水生经济动物的研究结果一致我们的研究还表明,维生素C在克氏原螯虾幼虾的成活和免疫中发挥了重要作用。特别说明的是,在该研究中使用的所有免疫相关指标中,除PO活性外,都与维生素C的添加量有实质性的关联,这进一步说明,维生素C在动物免疫过程中起重要作用。对罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)来说,与未添加维生素C的饲料组相比,投喂添加了维生素C的饲料组的虾增重率显著升高在实验设计的三个因子中,维生素A添加量对克氏原螯虾幼虾的存活、生长和免疫的影响相对较小,但对增重率、MDA含量、以及SOD和GPx基因的表达水平有实质性的影响。当饲料中维生素A添加量为水平3(0.006%)时,增重率最大,GPx基因的表达水平最低,而饲料中维生素A添加量为水平2(0.0054%)时,MDA含量和SOD基因表达水平最低。这些结果表明,饲料中添加一定量的维生素A可以促进生长,降低MDA含量和SOD、GPx基因的表达水平,增强免疫力。需要注意的是,不同发育阶段的生物对维生素A的需求量不同,幼体阶段可能比成体阶段需要更多的维生素A,