免疫细胞的分类与分离

免疫细胞的分类与分离免疫细胞的分类与分离第1页

第一节免疫细胞分类与分离一、免疫细胞种类与特征二、免疫细胞分离技术三、细胞冻存与复苏免疫细胞的分类与分离第2页免疫细胞特征1、免疫细胞形态学特征理化性状生物学特征2、免疫细胞膜分子特征

CD分子免疫细胞的分类与分离第3页

免疫细胞起源与分化

红细胞血小板肥大细胞中性粒细胞巨噬细胞树突状细胞浆细胞T细胞NK细胞免疫细胞的分类与分离第4页免疫细胞分离技术1、密度梯度离心法2、黏附分离法3、荧光激活分离法4、磁性分离法5、其它分离法免疫细胞的分类与分离第5页密度梯度离心法离心前离心后稀释抗凝血淋巴细胞分离液血浆单个核细胞粒细胞红细胞免疫细胞的分类与分离第6页沉降速度=2r2（Q—Q0）9

xgQ=颗粒比重Q0=溶质比重r=颗粒半径

=形状因子=颗粒摩擦系数/同体积球型颗粒摩擦系数

=粘稠度g=相对离心力免疫细胞的分类与分离第7页人类血液有形成份平均密度与直径

密度直径（

）血小板1.04—1.06淋巴细胞1.06—1.088—10粒细胞1.08—1.0913红细胞1.09—1.107.5免疫细胞的分类与分离第8页黏附分离法尼龙毛法贴壁法亲和板法吸附柱法免疫细胞的分类与分离第9页荧光激活分离法（FACS）荧光检测器滤光片透镜接物镜激光束偏转板喷嘴细胞搜集管流体护套样品免疫细胞的分类与分离第10页流式细胞仪免疫细胞的分类与分离第11页磁性分离法磁铁吸引法磁式细胞分类术法免疫细胞的分类与分离第12页MACS(阳性选择法）NS免疫细胞的分类与分离第13页MACS(阴性选择法）NS免疫细胞的分类与分离第14页免疫细胞的分类与分离第15页其它分离法花环沉降法细胞活化克隆法MHC分子四聚体法免疫细胞的分类与分离第16页抗原肽-MHC分子四聚体技术T免疫细胞的分类与分离第17页细胞冻存与复苏细胞冻存原理与方法细胞复苏原理与方法免疫细胞的分类与分离第18页细胞冻存罐免疫细胞的分类与分离第19页

第二节免疫细胞膜分子检测一、免疫细胞膜分子检测原理与类型二、免疫细胞膜分子检测方法免疫细胞的分类与分离第20页免疫细胞膜分子检测原理与类型1、以抗体识别抗原2、以配体识别受体免疫细胞的分类与分离第21页免疫细胞膜分子主要检测方法1、免疫标识检测方法荧光抗体法酶免疫检测法免疫金银染色法2、补体依赖细胞毒试验（CDC）3、花环形成试验免疫细胞的分类与分离第22页SmIg荧光抗体检测法免疫细胞的分类与分离第23页SmIg酶免疫检测法免疫细胞的分类与分离第24页补体依赖细胞毒试验（CDC）染料补体免疫细胞的分类与分离第25页E-花环T细胞B细胞花环形成细胞绵羊红细胞免疫细胞的分类与分离第26页免疫细胞的分类与分离第27页EA-花环免疫细胞的分类与分离第28页EAC-花环免疫细胞的分类与分离第29页

第三节免疫细胞功效测定一、转化、增殖试验二、细胞毒试验三、抗体形成试验四、细胞吞噬与杀伤试验免疫细胞的分类与分离第30页1、淋巴细胞转化试验2、混合淋巴细胞培养转化、增殖试验免疫细胞的分类与分离第31页免疫细胞的分类与分离第32页放射性测定3H-TdR丝裂原（抗原）刺激淋巴细胞转化试验原理示意免疫细胞的分类与分离第33页1、T细胞介导细胞毒试验2、NK活性测定3、ADCC作用测定细胞毒检测试验免疫细胞的分类与分离第34页放射性测定细胞毒试验原理示意靶细胞效应细胞分离上清免疫细胞的分类与分离第35页1、直接溶血空斑试验2、间接溶血空斑试验3、SPA-SRBC溶血空斑试验抗体形成试验免疫细胞的分类与分离第36页直接溶血空斑试验免疫细胞的分类与分离第37页间接溶血空斑试验免疫细胞的分类与分离第38页SPA-SRBC溶血空斑试验免疫细胞的分类与分离第39页1、细胞吞噬功效试验2、细胞杀菌功效试验细胞吞噬与杀伤功效试验免疫细胞的分类与分离第40页免疫细胞的分类与分离第41页吞噬百分率=吞有颗粒吞噬细胞数计数吞噬细胞数吞噬指数=吞噬细胞吞噬总颗粒数计数吞噬细胞数免疫细胞的分类与分离第42页NBT还原试验原理：N-N-C+H+N=N-R-N-NH2CN=NH四氮唑基（淡黄色）甲月簪基（紫黑色）免疫细胞的分类与分离第43页NBT还原试验方法：1、抗凝血+硝基蓝四氮唑（NBT），37。C孵育25min。2、推片染色、镜检。正常值：NBT阳性细胞7.5-15%免疫细胞的分类与分离第44页

第四节免疫细胞凋亡测定一、细胞凋亡概念与原理二、细胞凋亡检测方法免疫细胞的分类与分离第45页

细胞凋亡概念与原理1、细胞凋亡概念2、细胞凋亡原理3、细胞凋亡特点免疫细胞的分类与分离第46页

细胞凋亡（apoptosis）

细胞在内源性基因调控下发生主动死亡过程，也称程序性死亡。免疫细胞的分类与分离第47页

细胞凋亡过程凋亡信号——凋亡受体——信号传导——凋亡基因开启——编码程序性死亡蛋白——细胞结构解体——细胞凋亡免疫细胞的分类与分离第48页

细胞凋亡机制免疫细胞的分类与分离第49页

细胞凋亡特点1、细胞皱缩2、染色质边集3、凋亡小体出现免疫细胞的分类与分离第50页

细胞凋亡免疫细胞的分类与分离第51页

细胞凋亡检测方法1、形态观察法2、生化检测法3、流式细胞仪检测法免疫细胞的分类与分离第52页形态观察法普通光镜检测——HE染色甲基绿-派诺宁染色荧光显微镜检测——溴化丙锭染色透射电镜检测——经典形态改变免疫细胞的分类与分离第53页生化检测法凝胶电泳法原位末端标识法二苯胺分光光度法免疫细胞的分类与分离第54页凝胶电泳法原理：断裂DNA在凝胶中呈梯形排列（DNAladder）方法：提取总DNADNA凝胶电泳观察DNAladder现象免疫细胞的分类与分离第55页原位末端标识法（TUNEL）原理：利用标识dUTP，在TdT作用下结合DNA断片3’末端羟基，显示断链DNA，提醒凋亡方法：制备组织切片标识物结合标识物显色镜检免疫细胞的分类与分离第56页二苯胺分光光度法原理：细胞凋亡可产生低分子量DNA，经过超速离心可与细胞核高分子量DNA分离，分别测定两种DNA，即可得出凋亡百分率。方法：裂解细胞

13000g超速离心分别提取DNA

使DNA显色，测定免疫细胞的分类与分离第57页凋亡百分率=上清液OD值上清液OD值+沉淀OD值免疫细胞的分类与分离第58页流式细胞仪法原理：PI标识凋亡细胞，经过FACS可显示凋亡细胞特征性亚二倍体峰