免疫原和抗血清制备

免疫原和抗血清制备免疫原和抗血清制备第1页案例一常州狂犬疫苗造假事件

该企业生产4个批次人用狂犬疫苗效价低于国家标准，可能造成疫苗接种后免疫抗体水平低，无法充分发挥疫苗应有预防保护作用，属于不合格产品。免疫原和抗血清制备第2页什么是疫苗？抗原？抗体？作用？1234免疫原和抗血清制备第3页疫苗病原微生物及其代谢产物预防疾病用于人工主动免疫生物制剂人工减毒、灭活、利用基因工程等经过特殊处理抗原免疫原和抗血清制备第4页Avaccineisabiologicalpreparationthatimprovesimmunitytoaparticulardisease.Avaccinetypicallycontainsanagentthatresemblesadisease-causingmicroorganismandisoftenmadefromweakenedorkilledformsofthemicrobe,itstoxinsoroneofitssurfaceproteins.Theagentstimulatesthebody'simmunesystemtorecognizetheagentasforeign,destroyit,and"remember"it,sothattheimmunesystemcanmoreeasilyrecognizeanddestroyanyofthesemicroorganismsthatitlaterencounters.免疫原和抗血清制备第5页疫苗分类

传统

新型

传统

新型

传统

新型类毒素重组抗原疫苗重组载体疫苗DNA疫苗减毒活疫苗灭活疫苗亚单位疫苗合成肽疫苗基因工程疫苗免疫原性强病原微生物，如伤寒、霍乱等，理化方法灭活人工诱导变异或从自然界中筛选毒力高度减弱病原微生物用0.3%-0.4%甲醛处理，丧失毒性外毒素去除有害成份，保留免疫原性成份，脑膜炎球菌荚膜疫苗将含有免疫原性多肽抗原或氨基酸序列与适当载体或佐剂结合成疫苗采取DNA重组技术制备只含保护性抗原组分基因工程疫苗将编码病原体免疫原性基因插入减毒病毒或细菌，接种到人体将编码抗原基因转入真核表示载体后注入人体，它需要人体细胞来利用这段基因自己表示抗原免疫原和抗血清制备第6页疫苗大致能够分为六大类：灭活疫苗，是被彻底杀死病原，相当于把反动分子枪毙以后曝尸示众，因为是已经死掉阶级敌人，往往造成革命队伍警觉性不很高，常需要重复刺激；减毒活疫苗，其实就是能够改造好黑五类后代，经过教育改造，已经减弱或丧失了危害性，进入人体后现身说法介绍反革命分子长相，而且能够繁殖供长久围观，效果很好，但也存在突然又反叛危险，所以在筛选确认时花费时间极长；类毒素疫苗，是处理后细菌外毒素，相当于阶级敌人便便经过消毒后给革命群众作为识别特征；亚单位疫苗，是除去其它成份后提取病原体中有效免疫原所得，如多糖类疫苗等，相当于将谋逆贼子砍头后传首九边以供识别；免疫原和抗血清制备第7页上述种种，均直接起源于病原，真正像照片，其实是基因重组疫苗和DNA疫苗，它们都是对病原体摄影——找到编码免疫原基因——这段基因相当于底片，在基因重组疫苗中，该基因被插入表示系统——比如把乙肝HBS抗原基因植入酵母菌当中，酵母菌就是冲片机，表示出抗原相当于冲印好照片，经过纯化制成疫苗；DNA疫苗则是将编码抗原基因转入真核表示载体后注入人体，它需要人体细胞来利用这段基因自己表示抗原相当于上级只发放底片，得自己冲洗。免疫原和抗血清制备第8页免疫原疫苗抗原免疫原和抗血清制备第9页抗原诱导机体产生免疫应答（免疫原性）与免疫应答产物结合（抗原性）疫苗经过特殊处理诱导机体产生免疫应答免疫原诱导机体产生免疫应答抗原半抗原

仅含有抗原性免疫原和抗血清制备第10页疫苗都是免疫原？免疫原都是疫苗？免疫原都是抗原？抗原都是免疫原？免疫原和抗血清制备第11页疫苗免疫原抗原免疫原和抗血清制备第12页合格疫苗？安全性有效性专一性可取得性适合大批量生产易保留经济免疫原和抗血清制备第13页怎样制备？疫苗制造过程，大致上能够分成4个别：1.筛选种毒；2.扩繁病原；3.处理纯化；4.验证批签。免疫原和抗血清制备第14页怎样制备？颗粒性抗原制备（细胞、细菌、寄生虫等）灭活疫苗细胞抗原（绵羊红细胞）经生理盐水等溶液洗净，配制成一定浓度；细菌抗原纯菌增菌后处理制备菌体(O)抗原置于100℃水浴2-2.5h去除鞭毛(H)抗原；制备H抗原，菌液用0.3%-0.5%甲醛处理；制备细菌毒素抗原，杀菌后用0.5%-1%氯化钙处理。免疫原和抗血清制备第15页可溶性抗原亚单位疫苗包含：蛋白质、核酸、多糖、脂蛋白等起源：组织和细胞步骤：提取和纯化免疫原和抗血清制备第16页粗提组织、细胞破碎，取上清组织匀浆：必须为新鲜或低温保留高速组织捣碎机法；研磨法（脑、胰腺）2.细胞破碎：冻融法，迟缓融化，适合用于细胞超声破碎法，间歇进行，适合用于细胞酶法，不易破坏内含物成份，适合用于微生物表面活性剂处理法，多用于细菌提取核酸免疫原和抗血清制备第17页纯化（以蛋白为例）超速离心法差速离心法分离大小和密度差异较大颗粒

差速离心法原理示意图免疫原和抗血清制备第18页纯化密度梯度离心法将样品放在惰性介质（梯度液）中进行离心沉淀蔗糖、甘油、氯化铯等免疫原和抗血清制备第19页纯化特点适合用于少数大分子抗原及一些比重较小抗原免疫原和抗血清制备第20页纯化选择性沉淀法盐析法纯度不高，适合初步纯化，常见33%-35%饱和度硫酸铵有机溶剂沉淀法必须在0℃下进行，常见乙醇和丙酮聚合物沉淀法PEG，分子量越大，PEG浓度越低核酸沉淀剂法硫酸鱼精蛋白、核酸酶等去除核酸免疫原和抗血清制备第21页免疫原和抗血清制备第22页纯化层析法1.凝胶层析法分子量不一样2.离子交换柱层析法蛋白质等电点不一样3.亲和层析法生物分子结合特异性和可逆性免疫原和抗血清制备第23页纯化-凝胶层析法免疫原和抗血清制备第24页纯化-凝胶层析法免疫原和抗血清制备第25页纯化-离子交换层析1、树脂类：分离氨基酸，孔径小；2、纤维素类：分离蛋白质，孔径大免疫原和抗血清制备第26页纯化-亲和层析免疫原和抗血清制备第27页纯化电泳法分子量电荷数量免疫原和抗血清制备第28页纯化粗分级普通采取盐析、有机溶剂分级等方法；细分级普通采取层析法，包含凝胶层析、离子交换层析、亲和层析等方法。必要时，还可采取电泳法，包含等电聚焦等作为蛋白质提纯步骤。免疫原和抗血清制备第29页细胞破碎固液分离粗分级细分级GoingUp免疫原和抗血清制备第30页纯化抗原判定含量双缩脲法、比浊法、酚试剂法、直接紫外吸收法等分子量SDS纯度SDS、HPLC免疫活性双向免疫扩散、ELISA等免疫原和抗血清制备第31页琼脂糖凝胶电泳免疫原和抗血清制备第32页琼脂糖凝胶电泳-模式图免疫原和抗血清制备第33页SDS是一个阴离子表面活性剂，能使蛋白质氢键和疏水键打开，并结合到蛋白质分子上，使各种蛋白质—SDS复合物都带上相同密度负电荷，其数量远远超出了蛋白质分子原有电荷量蛋白质分子电泳迁移率主要取决于它分子量大小免疫原和抗血清制备第34页人工抗原人工结合抗原（半抗原）人工合成抗原基因工程抗原免疫原和抗血清制备第35页人工结合抗原半抗原（>=20）载体(1)蛋白质牛血清蛋白多肽类聚合物多聚赖氨酸大分子聚合物羧甲基纤维素完全抗原物理化学羧甲基纤维素聚乙烯吡咯烷酮一些功效基团判定吸收光谱分析法放射性核素标识法免疫原和抗血清制备第36页人工合成抗原……化学方法……化学方法合成肽疫苗免疫原和抗血清制备第37页基因工程抗原——基因工程疫苗提取、纯化、判定免疫原和抗血清制备第38页毒性试验（安全性试验）通常包含杀菌剂残留，防腐剂含量，热源含量，有没有微生物污染，培养基残留等，比如因为可能有些人对鸡蛋过敏，所以全部鸡胚培养疫苗必须严格监控卵清蛋白残留；而怀疑牛血清中可能有对人体不利物质，凡添加了牛血清培养细胞，必须监控牛血清白蛋白残留量；对于灭活疫苗，还要检测其灭活程度，通常是把成品或处理后原液接种到细胞或试验动物，动物或细胞没有感染迹象才算过关，对于弱毒疫苗，还要用动物做毒力测定，以确保疫苗没有复壮成致病株。免疫原和抗血清制备第39页效力试验（免疫保护试验）有效性检测，最基础，是用抗血清检验疫苗中确实含有目标抗原，然后做效力测定，给试验动物注射疫苗，检验有没有产生促发特异免疫应答产生特定抗体，或者，比较倒霉试验动物会被接种致病菌观察疫苗保护效应。免疫原和抗血清制备第40页我疑问抗原到疫苗，到底要怎么处理？免疫原和抗血