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腈水解酶基因bxnrd127的突变分析

草和作物之间的水、料和光的竞争，影响植物的产量和质量。利用化学方法来控制杂草已成为现代农业不可缺少的一部分,除草剂的年产量已居诸农药之首,据估计美国每年用在除草剂上的费用大约是50亿美元。溴苯腈(3,5-二溴-4-羟基-1-氰基苯)以及它的钠盐、钾盐是一种在国外被广泛使用的非选择性芽后茎叶处理触杀型除草剂。主要由叶片吸收,通过抑制光合系统11.1酶和主试剂之间的关系限制性内切酶、1.2粒、标签和蘑菇质粒1.3引用产品由上海博亚公司合成。共13条,具体序列如下:1.4基因bxn-rd127的完全回复突变和一系列突变体的构建对质粒对完成第二处回复突变的650反应程序:先94℃变性31.5包含声明的结构4个bxn基因突变体酵母表达载体的构建:完全回复突变基因植物表达载体构建:采用1.6bxn突变基因母细胞培养将Bg1.7通过母系转移瘤的产物活性测试各类转基因酵母经甲醇诱导培养481.8农业消毒和草转化应用液氮冻融法将1.9转草试验包括22.1基因bxn-调解127的结果和分析通过上海博亚公司测序,获得了质粒2.2bxn-代丁酸,vgp,双价酵母基质粒bxn-代丁酸,双价酵母基质粒bxn-代丁酸,土壤氨基酸残基,总压高为了确定4处突变中,那一处是导致基因功能丧失的关键变异,本组首先对bxn-RD127基因进行完全回复突变,并与vgb基因一起构建出双价酵母表达载体以质粒bxn-RD127的第4处变异引起一个包含18个氨基酸残基的移码突变,其中包含348位的2.3系列+2.4系列bxn基因的表达产物为含349个氨基酸残基的蛋白,分子量约为37.812.5关于旋转母性的产物活性的测定溴苯腈溶液为乳浊液,腈水解酶可以将其苯环上的-结果表明:正对照的发酵液上清可使溴苯腈溶液变清亮,2.6植物起源和形态的测定+2.7转草率采用农杆菌介导法转化烟草2.8杂草抗原剂的抗剂溴苯腈除草剂的田间喷施浓度为450～10002.9草腈水解酶活性检测将溴苯腈原液加入烟草叶片蛋白粗提液中至终浓度为0.5%,37℃温育303基因产物的耐药为了确定将完全回复突变的bxn基因转化烟草后,获得的31株转基因烟草植株均具有抗溴苯腈除草剂的特性,均能在溴苯腈正常施用浓度下生长,同时,转基因烟草叶片蛋白粗提液可使溴苯腈溶液变清亮,证明经过完全回复突变的bxn基因可在转基因烟草植株中表达出活性腈水解酶,解除除草剂溴苯腈的毒性;另外,加大溴苯腈施用浓度后有5株转基因烟草植株出现受害症状,其余26株表现正常,说明不同的转基因植株间存在通过对bxn-RP6a:5′-CCAAGCTTAGGAATGTCCCCAATAAC-3′。其中FP1和RP1为基因650bp片段首尾引物,FP2和RP2是针对第一处突变点设计的回复突变引物(下划线部分为引入的正确序列,下同);FP3和RP3是针对第二处突变点设计的回复突变引物;FP4和RP4是针对第三处突变点设计的回复突变引物;FP

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