he-ne激光诱变红曲霉m9x菌株的选育

he-ne激光诱变红曲霉m9x菌株的选育

原生质体是指微生物通过一定的酶反应去除必要的中央委员会结构。由于原生质体失去细胞壁的保护作用而成球形,只能在高渗透压培养基中存活,并在合适的培养基中恢复细胞壁而再生。对环境、诱变剂等更为敏感,因此用原生质体作为诱变材料,诱变效果较传统方法更为理想MonacolinK(洛伐他汀)为人体胆固醇合成中的关键酶羟戊二酰辅酶A(HMG-COA)还原酶的抑制剂,因其疗效好,副作用低,是世界上最畅销的降血脂药物之一1材料和方法1.1病毒1.2主要培养基1.2.1表面活性剂麦芽汁12～14°BX、琼脂1.8%～2.0%、pH5.0。1.2.2蘑菇生长培养基1.2.3再生培养基麦芽汁12～14°BX、上层琼脂0.8%、下层琼脂2%、均用0.6mol/L的MgSO1.2.4液体种子培养部位%葡萄糖7、蛋白胨7.5、豆粉0.5、MgSO1.2.5液体发酵培养基%甘油7、葡萄糖3、牛肉膏3、蛋白胨0.8、NaNO1.3牛酶、纤维素酶及用铜纳米薄膜MonacolinK对照品美国Sigma公司;蜗牛酶北京鼎国生物制品有限公司;纤维素酶陕西科学院酶制剂研究所;薄层层析硅胶GF254青岛海洋化工有限公司;丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺北京鼎国生物制品有限公司。1.4仪器、设备和试药He-Ne激光发生器西北大学光电厂;DYY-Ⅲ5型电泳仪北京市六一仪器厂;ZFQ81-1型旋转蒸发器上海医械专机厂;高速冷冻离心机日本HitachiR22G;ZX-1型旋片式真空泵沈阳市真空泵厂。1.5方法1.5.1原生质系统的准备和再生以豆芽汁培养液为菌丝培养基,采用60h菌龄的菌丝体,以0.6mol/LMgSO1.5.2激光辐射时间对原生质体相对再生率的影响用制备的原生质体稀释成约101.5.3原生质体培养选取激光最佳照射剂量,经诱变后,将原生质体悬液梯度稀释涂布麦芽汁再生平板,培养后,挑出形态、大小、颜色等发生变化的单菌落,斜面保藏备用。1.5.4由he-ne激光诱导的引导变量组成的高产诱导变量布局对激光诱变后的菌株摇瓶发酵后,进行TLC法初筛和HPLC法复筛1.5.5原始提取m将红曲霉M1.5.6原始提取m取二者点接于麦芽汁平板中央,30℃培养90h,比较二者形态特征,并用相机拍下其菌落形态。1.5.7诱导变量m将诱变株M2结果与分析2.1红曲霉原生质体m以豆芽汁培养液为菌丝培养基,采用60h菌龄的菌丝体,以0.6mol/LMgSO2.2原生质体相对再生率的变化激光照射时间对诱变株M由图1中可见,随着激光照射时间的延长,原生质体的相对再生率逐步下降,在17min时,已有92.5%的原生质体致死。为了获得较大的突变率,故选用17min作为诱变时间。2.3红曲霉美果酒多菌株菌株的筛选经He-Ne激光照射原生质体,稀释后倒双层平板,挑取菌落形态发生变化再生菌落,斜面保存,摇瓶发酵后,测其MonacolinK产量,经反复筛选后,得到一株MonacolinK产量最高的红曲霉M2.4诱导变量m由图3、图4可以看出,经激光诱变处理红曲霉菌株M2.5诱导变量m由图5可知,红曲霉M2.6案例明并确定动力学固pa,方法诱变株M由表1可知:斜面连续传代8次,MonacolinK产量平均值为102.36μg/ml,标准偏差为1.06,