盐附子遗传毒性研究

盐附子遗传毒性研究

采用治疗疾病的方法，具有益气、降压、镇痛、抗炎等多种药理活性。本药具有很强的毒性。常用的生川乌、生草乌和生附子属于国家特殊处理的毒性中药。目前乌头类中药在文献中广泛报道的主要有心脏毒性和中枢神经毒性附子Aconitumcarmichaeli为毛莨科植物乌头子根的加工品,因其附生乌头而得名.附子的毒性成分为乌头碱,可溶于水与乙醇,毒性极大,人口服0.2mg即可产生中毒症状,其结晶2～4mg即可致死.盐附子是泥附子经丹巴盐浸、晾晒炮制加工而成,是临床上常用附子的炮制品本文选用目前新药遗传毒性评价中推荐使用的3种试验(小鼠骨髓微核试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、体外CHL细胞染色体畸变试验)研究盐附子的遗传毒性。1材料和方法1.1材料表面1.1.1试验药物1.1.2动物合格SPF级NIH小鼠50只,体重25～30g,雌雄各半。购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司,动物合格证号:SCXK(沪)2004-0005。小鼠饲养于国家成都中药安全性评价中心SPF动物房,饲养条件符合国标GB14922.2-2001。1.1.3rs国际及生长网络选用TA97、TA98、TA100、TA1535、TA102菌株进行试验,菌株购自DiscoveryPartnersInternational,IncUSA。按照试验要求,对试验拟用的鼠伤寒沙门氏组氨酸缺陷型菌株进行了组氨酸需求试验、结晶紫敏感试验、抗氨苄青霉素试验、抗四环素试验、紫外线敏感试验、自发回变试验、阳性对照试验,结果显示:各菌株的特性正常,自发回复突变菌落数均在正常范围内,阳性对照的回复突变菌落数高于相应菌株自发回复突变菌落数两倍以上。1.1.4细胞生物学研究中国仓鼠肺成纤维细胞(ChineseHamsterLungfibroblast,CHL)购自中国科学院上海细胞生物学研究所。1.2实验方法1.2.1受试药物组采用5d灌胃将检疫合格的SPF级NIH小鼠随机分为5组,每组10只,雌雄各半。包括:盐附子3个剂量组(15.45、7.73、3.86g生药/kg)、阴性对照组、阳性对照组。受试药物组小鼠每天给药1次,连续4d经口灌胃给药,灌胃体积为0.2ml/10g。阳性对照组于处死前1天腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)。于末次给药后24h(阳性对照组于给予环磷酰胺后24h)颈椎脱臼法处死小鼠,取出胸骨骨髓制片,计数1000个多染红细胞,并记录微核发生率(‰),同时计数200个红细胞,求出多染红细胞/正染红细胞的比值。1.2.2物剂量组植物基因型根据预试结果,盐附子的高剂量组设为5mg生药/皿,以下依次作2倍稀释。试验设6个受试物剂量组(5.000、2.500、1.25、0.625、0.313、0.156mg生药/皿),1个自发对照组,1个阳性对照组,共8组。每组3个平行皿,实验结果以每皿回变菌落数表示。平行做加和不加S9的试验,试验重复1次。阳性对照药物使用情况见表1。1.2.3室外chl细胞染色体畸变试验依据盐附子LD2结果2.1小鼠骨髓微核试验试验结果显示:阳性对照组小鼠骨髓细胞微核发生率明显高于阴性对照组,且差异有统计学意义(P﹤0.05)。盐附子各剂量组小鼠骨髓细胞微核发生率与阴性对照组比较无明显升高,差异无统计学意义(P﹥0.05);各给药剂量组多染红细胞/正染红细胞的比值与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。表明盐附子对骨髓细胞无明显抑制作用。见表2。2.2不同剂量组回变菌落数的测定盐附子Ames试验结果见表3、4。盐附子,其制备工艺同药典,浓度为2.4g生药/ml。在加与不加S9的条件下,TA1535、TA97、TA98、TA100、TA102的自发回变菌落数均在正常范围内,5个菌株的阳性对照均高于相应的自发回变菌落数两倍以上,证明试验系统可靠。盐附子各剂量组回变菌落数均未高于相应菌株自发回变菌落数的两倍,且无剂量反应关系。试验重复一次,所得结论相同。2.3表6:表6盐附子体外CHL细胞染色体畸变试验结果见表5、6。表5、表6盐附子染色体畸变试验结果表明:在加S9和不加S9的情况下各剂量组的细胞染色体畸变率都低于5%,通过χ3盐附子在小鼠急性毒性试验中的作用附子具有强心、镇痛、抗炎、抗肿瘤、调节免疫功能的作用,其毒性也较大,主要毒性成分为脂溶性二脂类生物碱,毒性表现为神经和心血管系统的严重损害。盐附子、黑顺片、白附片是临床上常用附子的炮制品,其中又以盐附子最为常用在小鼠急性毒性试验中盐附子LD综