香草没药对p450活性的影响

香草没药对p450活性的影响

乳房和止痛药都具有活血止痛的功效。这两种药物通常用作复合剂，临床应用广泛。含有30ml片剂和未经处理的中药。近年研究发现乳香没药可引起动物肝损害1材料表面1.1试验药物1.2实验动物和动物Wistar大鼠和昆明种小鼠,SPF级,合格证号SCXK(津)2009-0001,购自天津市山川红实验动物科技有限公司。饲养于天津中医药大学实验动物中心,所用饲料为大鼠全价颗粒饲料为天津市华荣实验动物科技有限公司生产。1.3高效液相色谱法戊巴比妥钠(国药集团化学试剂有限公司进口分装);甲硝唑(中国药品生物制品检定所);非那西丁,氯唑沙宗(AlfaAesar);氨苯砜(Fluka);NADPH(Roche);TRIS(ANGUS);甲醇,乙腈(色谱纯,天津康科德科技有限公司);KCI,CaClAX205型分析天平(METTLERTOLEDO),JJ2000型精密电子天平(常熟双杰测试仪器厂),L8-80M型高速离心机(Beckman),N-EVAP111型氮吹仪(Organomation),Waters600E型高效液相(Waters2487紫外检测器)。2方法2.1苯巴比妥钠对大鼠睡眠的影响2.1.1连续使用苯巴比妥钠药物对大鼠睡眠的影响56只小鼠,雌雄各半,分为对照组和乳香+没药3.15,2.10,1.05g·kg2.1.2单次使用对戊二醇钠诱导小鼠睡眠的影响48只小鼠,雌雄各半,分为对照组和乳香、没药、乳香+没药(1∶1)混合物组,剂量均为3.15g·kg2.2影响大鼠cyp1a2、cyp2e1和cyp3a4的因素大鼠40只,雌雄各半,分为对照组、乳香组、没药组、乳香+没药(1∶1)混合组,给药组均以3.00g·kg2.2.1体外肝微粒体体系肝微粒体悬液、NADPH及混合底物工作液的磷酸缓冲液组成体外肝微粒体体系。取肝微粒体悬液60μL和含非那西丁、氯唑沙宗、氨苯砜均为4mg·L2.2.2回收率和精密度试验在失活肝微粒体中加入不同浓度底物混合物,按样品处理方法处理,检测底物的最低检测线。在线性范围内取高、中、低3个浓度底物混合后进行回收率、日内精密度,每个浓度5个样,每一浓度连续测定3d为日间精密度。色谱条件为AgilentTC-C18(5μm,4.6mm×150mm)色谱柱,流动相为乙腈-水(24∶76)流速1.0mL·min3结果3.1小鼠睡眠的影响因素乳香没药混合物连续使用,在不同剂量均可使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠只数减少,作用强度与用药剂量呈负相关(表1)。单次给药的结果表明,乳香和没药均可使小鼠入睡数增加,与对照组无显著性差异(表2)。3.2影响大鼠cyp1a2、cyp2e1和cyp3a4的因素3.2.1探针药的标准曲线方程及相关指标非那西丁、氯唑沙宗、氨苯砜和内标甲硝唑分离良好,出峰时间依次为甲硝唑3.168min,氨苯砜8.374min,非那西丁10.722min,氯唑沙宗19.454min,未受干扰。3个探针药的标准曲线方程及相关指标见表3。非那西丁回收率在95.22%~105.64%,氯唑沙宗在94.43%~106.58%,氨苯砜在98.49%~106.28%。非那西丁日内及日间RSD在2.97%~8.37%,氯唑沙宗在1.51%~10.84%,氨苯砜在2.59%~9.23%。3.2.2非那西丁和氯唑沙宗反应完毕后,乳香组、没药组、乳香+没药混合组肝微粒体体系中非那西丁和氯唑沙宗的浓度显著低于对照组,而氨苯砜则无显著差异。结果表明,无论是乳香、没药还是其混合物均可使大鼠CYP1A2,CYP2E1活性增强,而对CYP3A4则无显著影响。4乳液没药对戊巴比妥钠代谢的影响戊巴比妥钠代谢的快慢直接受P450活性的影响。小鼠连续ig给予乳香没药7d使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠只数减少,说明戊巴比妥钠在体内代谢加快,乳香没药连续使用可使P450活性增强,但这个诱导作用却与乳香没药的剂量呈现负相关性,表明乳香没药在剂量增大的同时也在抑制戊巴比妥钠在体内的代谢。乳香没药单次给药使戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠率升高更加证实了这一点,小鼠睡眠率升高说明戊巴比妥钠的代谢被乳香没药所抑制,而整个实验距离首次用药不足2h,乳香没药在此时间中对P450表达的影响可以忽略,可能是直接影响酶空间结构而导致其活性降低或者竞争性抑制戊巴比妥钠代谢。从乳香没药用药7d诱导P450活性增强来看,更可能是竞争性抑制,但这个推测尚需进一步研究证实。根据文献P450活性的改变对于联合用药的有效性和安全性有明显影响,乳香没药连