常用的菌种保藏方法 课件

常用的菌种保藏方法主讲教师：李蒙123斜面低温保藏法液体石蜡保藏法沙土保藏法目录CONTENTS4冷冻干燥保藏法5液氮冷冻保藏法Part01斜面低温保藏法特点：传代+低温保存适用范围：适合大多数微生物短期保存，如细菌、放线菌、酵母菌和霉菌等（实验室和工厂菌种室常用）保藏期：1-6个月（短期）放线菌、霉菌和有芽孢的细菌一般可保存6个月左右，无芽孢的细菌可保存1个月左右，酵母菌可保存3个月左右。1斜面低温保藏法操作：将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上；放置于合适温度下培养一定时间，等待菌充分生长，此阶段不可太久，否则菌种易衰退；培养到菌体或孢子生长丰满后，棉塞部分用油纸包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏；每间隔一段时间应重新移植、培养一次，如此不断更新。在一般情况下，各种微生物移植一次的时间依微生物的种类而有不同：无芽孢细菌1～2个月，芽孢菌、放线菌、担子菌3～6个月，酵母菌4～6个月，丝状真菌4～8个月1斜面低温保藏法优缺点：优点：操作简便，使用方便，不需特殊设备，能随时接种和及时观察菌种是否死亡或被污染等情况缺点：培养基的物理、化学特性不是严格恒定的，屡次传代会使微生物的代谢改变，而影响微生物的性状、导致变异或退化；污染杂菌机会增加；保藏时间短；人力、物力的花费较大等。1斜面低温保藏法Part02液体石蜡保藏法特点：石蜡油隔绝空气适用范围：各种微生物短期保藏（不适用于某些能够分解烃类的细菌）保藏期：1-2年液体石蜡具有隔绝空气、防止水分挥发的作用，因此保藏期比斜面保藏法的效果好。较适合好氧微生物的保藏，如酵母菌、霉菌可保藏2年以上。2液体石蜡保藏法2液体石蜡保藏法操作：将液体石蜡分装于三角烧瓶内，塞上棉塞，用牛皮纸包扎121.3℃灭菌30分钟，然后放在40℃温箱中，使水汽蒸发掉，备用将需要保藏的菌种，在最适宜的斜面培养基中培养，使得到健壮的菌体或孢子用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡，注入已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1cm为准，使菌种与空气隔绝将试管直立，置低温或室温下保存（有的微生物在室温下比冰箱中保存的时间还要长）2液体石蜡保藏法优缺点：优点：制作简单，不需特殊设备，且不需要经常移种传代缺点：保存时必须直立放置，所占位置较大，同时也不便携带；从液体石蜡下面取培养物移种后，接种环在火焰上烧灼时，培养物容易与残留的液体石蜡一起飞溅Part03沙土保藏法特点：沙土载体+干燥适用范围：能产生孢子或芽孢的微生物如霉菌、放线菌（因此多用于抗生素工业生产中）保藏期：1-2年左右但应用于营养细胞效果不佳3沙土保藏法3沙土保藏法操作：将沙与土酸洗后用自来水洗涤至中性烘干碾碎过筛，一般沙用80目过筛，土用30－100目过筛按沙与土的比例为1-2：1混合均匀，分装于小试管中，装料高度约为1厘米左右121°C间歇灭菌三次，灭菌试验合格后烘干备用。将斜面孢子制成孢子悬浮液接入沙土管中或将斜面孢子刮下直接与沙土混合干燥器中用真空泵抽干，放在冰箱内保存。3沙土保藏法优缺点：优点：材料简单、操作简便，不需特殊设备，能随时接种和及时观察菌种是否死亡或被污染等情况缺点：适用范围有限，只适宜于形成孢子和芽孢的菌种，不适用只有菌丝的真菌和无芽孢的细菌保存Part04冷冻干燥保藏法特点：低温+无氧+干燥适用范围：除了丝状微生物的菌丝体不适宜于本法外，其它大多数微生物均可采用此法进行菌种保藏保藏期：5-15年4冷冻干燥保藏法4冷冻干燥保藏法操作：微生物细胞与保护剂混合制成悬液，注入安瓿管中用低温酒精或干冰，使其迅速冻结在冷冻干燥机中进行低温减压干燥，待水升华后制成固体菌块（或菌粉）在真空条件下进行熔封，置于低温冰箱中保藏；保护剂一般采用脱脂牛奶或血清。保护剂的作用可能是在冷冻干燥的脱水过程中代替结合水而稳定细胞成分（细胞膜）的构型，防此细胞膜因为冻结而破坏。保护剂还可以起支持作用，使微生物疏松地固定在上面。4冷冻干燥保藏法优缺点：优点：保存时间长、适用范围较广缺点：需要专业设备、成本较高Part05液氮冷冻保藏法特点：超低温适用范围：适用于几乎所有微生物保藏期：超过10年5液氮冷冻保藏法5液氮冷冻保藏法操作：将菌种与保护剂一起制备成浓度大于108个/mL的菌悬液或孢子悬液分装于冻存管中，置于冰水浴中降温到0℃左右使用程序降温仪以1~2℃/min的速度降温至-35℃左右迅速把冻存管置于液