中国药品检验标操作规程紫外-可见分光光度法

中国药品检验标操作规程紫外-可见分光光度法

紫外—可见分光光度法简述紫外一可见分光光度法是通过被浏物质在紫外光区或可见光区的特定波特长或确定波长范围内的吸光度,对该物质进展定性和定量分析的方法。

本法在药品检验中主要用于药品的鉴别、检查和含量测定。

定量分析通常选择物质的最大吸取波特长测出吸光度,然后用比照品或吸取系数求算出被测物质的含量,多用于制剂的含量测定;对物质定性可用吸取峰波长或吸光度比值作为鉴别方法;假设该物质本身在紫外光区无吸取,而其杂质在紫外光区有相当强度的吸取,或杂质的吸取峰处该物质无吸取,则可用本法作杂质检查。

物质对紫外辐射的吸取是由于分子中原子的外层电子跃迁所产生,因此,紫外吸取主要准备于分子的电子构造,故紫外光谱又称电子光谱。

有机化合物分子构造中如含有共轭体系、芳香环等发色基团,均可在紫外区200~400或可见光区400~850产生吸取。

通常使用的紫外一可见分光光度计的工作波长范围为190—-定律为光的吸取定律,它是紫外分光光度法定量分析的依据,其数学表达式为:式中:—为吸光度;—为透光率;—为吸取系数;—为溶液浓度,—为光路长度。

如溶液的浓度为1%,光路长度,以表示。

如溶液的浓度为摩尔浓度,光路长度为时,则相应的吸取系数为摩尔吸取系数,以ε表示。

仪器紫外一可见分光光度计主要由光源、单色器、样品室、检测器、记录仪、显示系统和数据处理系统等局部组成。

为了满意紫外一可见光区全波长范围的测定,仪器备有两种光源,即氘灯和碘钨灯,前者用于紫外区,后者用于可见光区。

单色器通常由进光狭缝、出光狭缝、平行光装置、色散元件,聚焦透镜或反射镜等组成。

色散元件有棱镜和光栅两种,棱镜多用自然石英或熔融硅石制成,对200400波长光的色散力气很强,对600以上波长的光色散力气较差,棱镜色散所得的光谱为非匀捧光谱,光栅系将反射或透射光经衍射而到达色散作用,故常称为衍射光栅,光栅光谱是按波长作线性排列,故为匀排光谱,双光束仪器多用光栅为色散元件。

检测器有光电管和光电倍增管两种。

紫外一可见分光光度计依据其构造和测量操作方式的不同可分为单光束和双光束分光光度计两类。

单光束分光光度计有些仍为手工操作,即固定在某一波长,分别测量比较空白、样品或参比的透光率或吸光度,操作比较费时,用于绘制吸取光谱图时很不便利,和参比两光束,并先后到达检测器,检测器信号经调制分别成两光路对应信号,信号的比值可直接用记录仪记录,双光束分光光度计操作简洁,测量快速,自动化程度高,但作含量测定时,为求精确     起见,紫外一可见分光光度计波长精确     度允许误差,紫外区为士,500处士2。

波长精确     度检定方法用低压***灯检定关闭仪器光源,将***灯〔用笔式***灯最便利〕直接对准进光狭缝,如为双光束仪器,用单光束能量测定方式,承受波长扫描方式,扫描速度“慢”如15、响应“快”、最小狭缝宽度、量程0—100%,在200—800范围内单方向重复扫描3次,由仪器识别记录各峰值〔假设仪器无“峰检测”功能,必要时可对指定波进步行“单峰”扫描〕。

单光束仪器以751型为例,,透光率读数放在100〔或选择开关放在1,透光率放在10〕,关小狭缝,翻开光闸门,缓缓转动波长盘,查找***,假设与波长读数不符,应调整仪器左侧准直镜的波长调整螺丝,如波长向短波长方向移动,应顺时针方向旋转波长调整螺丝,如向长波方向移动,则应反时针方向旋转波长调整螺丝,调整好后,再按***灯的以下谱线测试,记录每条谱线与仪器波长读数的误差。

用于检定紫外一可见分光光度计的***灯谱线波长:、、、、、、、、、、〔紫色〕、〔蓝色〕、〔绿色〕、〔黄色〕。

,测量条件同上述低压***灯的方法,。

用氧化钬玻璃检定,,应考虑记录仪的时间常数,测定样品与校正时取同一扫描速度。

、、、、、、、,可供波长检定用。

氧化钬玻璃因制造的缘由,每片氧化钬的吸取峰波长有差异,另外,在放置过程中也会发生波长漂移,因此需定期由计量部门校验。

用高***酸钬溶液检定本法可供没有单光束测定功能的双光束紫外分光光度计波长精确     度检定用。

高***酸钬溶液的配制方法:取10%高***酸为溶剂,参加氧化钬23配成4%溶液即得。

高***酸钦溶液较强的吸取峰波长为241.13、、、、、、、、、、,但不是数据贮存型的〔指是直接将信号描记于记录纸上〕,记录的波长可能因记录笔滞后而非真实波长,为了精确     测定,建议承受定点检定而不用扫描方式。

吸光度精确     度周密称取在120℃枯燥至恒重的基准***钾约60,置100量瓶中,,用配对的1石英池,。

硫酸液为空白,在235、257、313、350分别测定吸光度,然后换算成,测得值应符合表1中规定的允差范围。

表1分光光度法允差范围波长〔〕吸取强度吸取系数〔〕~~~~、基线平直度、稳定度、绝缘电阻等项检定,按现行国家技术监视局“双光束紫外一可见分光光度计检定规程”检定,应符合有关项下的规定。

日常使用中,对以上两项,即波长和吸光度精确     度应依据需要随时检查。

杂散光的检查可按表2所列的试剂和浓度,配制成水溶液,置1石英池中,在规定的波特长测定透光率,应符合表2中规定。

表2杂散光的检查及限度试剂浓度〔%,〕测定波速〔〕透光率〔%〕***〔性状项下〕按各品种项下规定的方法配制供试品溶液,在规定的波特长〔〕测定其吸光度,并计算吸取系数,应符合规定范围。

鉴别及检查按各品种项下的规定,测定供试品溶液的最大及最小吸取波长,有的并须测定其在最大吸取波长与最小吸取波特长的吸光度比值,均应符合规定。

含量测定比照晶比较法按各晶种项下规定的方法,分别配制供试品溶液和比照品溶液,比照品溶液中所含被测成分的量应为供试品溶液中被测成分标示量的100%10%以内,用同一溶剂,在规定的波特长测定供试品溶液和比照品溶液的吸光度。

吸取系数法按各品种项下配制供试品溶液,在规定的波长及该波长2处测定其吸光度,按各该品种在规定条件下给出的吸取系数计算含量。

用本法测定时,吸取系数通常应大于100,并留意仪器的校正和检定,如测定品种的吸取系数,需按后列“吸取系数测定法”的规定进展。

计算分光光度法按《中国药典》规定,计算分光光度法一般不宜用于含量测定,对于少数承受计算分光光度法的品种,应严格按各品种项下规定的方法进展。

用本法时应留意:有一些吸光度是在待测成分吸取曲线的上升或下降陡坡处测定,影响精度的因素较多,故应仔细操作,尽量使供试品和比照品的测定条件全都。

假设该品种不用比照品,如维生素测定法〔见《中国药典》附录〕,则应在测定前对仪器作仔细的校正和检定。

比色法供试品本身在紫外一可见光区没有强吸取,或在紫外光区虽有吸取但为了避开干扰或提高灵敏度,参加适当的显色剂,使反响产物的最大吸取移至可见光区。

用比色法测定时,由于显色时影响显色深浅的因素较多,应取供试品与比照品或标准品同时操作。

除另有规定外,比色法所用的空白系指用同体积的溶剂代替比照品或供试品溶液,然后依次参加等量的相应试剂,并用同样方法处理。

当吸光度和浓度关系不呈良好线性时,应取数份梯度量比照品溶液,用溶剂补充至同一体积,显色后测定各份溶液的吸光度,然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线,再依据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度,并求出其含量。

留意事项试验中所用的量瓶和移液管均应经检定校正、洗净后使用。

使用的石英吸取池必需洁净。

当吸取池中装入同一溶剂,在规定波长测定各吸取池的透光率,%以下者可配对使用,否则必需加以校正。

取吸取池时,手指拿毛玻璃面的两侧。

装样品溶液的体积以池体积的45为度,使用挥发性溶液时应加益,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭洁净,检视应无残留溶剂,为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面,可先用醮有空白溶剂的擦镜纸擦拭,然后再用干擦镜纸拭净。

吸取池放入样品室时应留意每次放入方向一样。

使用后用溶剂及水冲洗洁净,晾干,防尘保存,吸取池如污染不易洗净时可用硫酸发烟***3:11混合液稍加浸泡后,洗净备用。

如用铬酸钾清洁液清洗时,吸取池不宜在清洁液中长时间浸泡,否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸取池的光学外表,并应充分用水冲洗,以防铬酸钾吸附于吸取池外表。

含有杂原子的有机溶剂,通常均具有很强的末端吸取。

因此,当作溶剂使用时,它们的使用范围均不能小于截止使用波长。

例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205。

另外,当溶剂不纯时,也可能增加干扰吸取。

因此,在检查所用的溶剂在供试品所用的波长四周是否符合要求,立刻溶剂置1石英吸取池中,以空气为空白〔即空白光路中不置任何物质〕测定其吸光度,溶剂和吸取池的吸光度应符合表3规定。

表3以空气为空白测定溶剂在不同波特长的吸光度的规定波长范围〔〕220~240241~250251~300300以上吸光度≤≤≤≤,混合匀称的同批溶剂。

称量应按药典规定要求。

配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少,转移稀释时所取容积一般应不少于5。

含量测定时供试品应称取2份,如为比照品比较法,比照品一般也应称取2份。

吸取系数检查也应称取供试品2份,平行操作,每份结果对平均值的偏差应在%以内。

作鉴别或检查可取样品1份。

供试品溶液的浓度,,~,吸光度读数在此范围误差较小,并应结合所用仪器吸光度线性范围,配制相宜的读数浓度。

选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸取带半高宽的10%,否则测得的吸光度值会偏低,或以减小狭缝宽度时供试品溶液的吸光度不再增加为准,对于《中国药典》紫外分光光度法测定的大局部品种,可以使用2缝宽,但当吸取带的半高宽小于20时,则应使用较窄的狭缝,例如青霉素钾及钠的吸光度检查需用缝宽或更窄,否则其264的吸光度会偏低。

测定时除另有规定者外,应在规定的吸取峰2处,再测几点的吸光度,以核对供试品的吸取峰位置是否正确,并以吸光度最大的波长作为测定波长,除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波长2以内,否则应考虑试样的同一性、纯度以及仪器波长的精确     度。

用于制剂含量测定时,应留意供试液与比照液的值是否全都,如值对吸取有影响,则应调溶液的值全都后再测定吸光度。

结果计算比照品比较法可依据供试品溶液及比照品溶液的吸光度与比照品溶液的浓度以正比法算出供试品溶液的浓度,再计算含量。

式中:—为吸光度值;—为测试液浓度〔以计〕。

吸取系数法《中国药典》规定的吸取系数,系指,即在指定波长时,光路长度为1,试样浓度换算为1%时的吸光度值,故应先求被测样品的}盏值,再