氨基酸纸层析糖旋光度的测定

氨基酸纸层析糖旋光度的测定第1页，课件共25页，创作于2023年2月1.学习层析（色谱）分离技术。2.学习旋光度测定技术。实验目的：第2页，课件共25页，创作于2023年2月一、氨基酸的纸色谱

色谱法：根据不同溶质在固定相和流动相之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，在随着流动相经过固定相时，在两相之间形成多次平衡，被流动相带动移动的速度不同，达到分离效果的方法。固定相：固定不动，对样品产生保留作用的物质。流动相：带动样品，经过固定相的物质。色谱过程的实质：是样品在固定相中吸附与解析的过程。第3页，课件共25页，创作于2023年2月按分离机制，可分为：吸附色谱：分子在两相中吸附性能不同，进行分离分配色谱：分子在两相中分配系数不同，进行分离离子交换色谱：分子在两相中离子交换性能不同，进行分离体积排阻色谱：体积大的留在固定相的小孔内，体积小的先流出。亲和色谱：分子在两相中亲和力不同，进行分离。电泳色谱、电色谱：离子在电场中移动的速度不同进行分离色谱法分类第4页，课件共25页，创作于2023年2月按操作方式不同，又可分为：柱色谱气相色谱高效液相色谱薄层色谱纸色谱等固定相组分第5页，课件共25页，创作于2023年2月纸色谱：为分配色谱，滤纸为载体，固定相为滤纸上的水分，流动相（展开剂）为用水饱和过的有机溶剂。操作技术：上行法、下行法、环行法第6页，课件共25页，创作于2023年2月纸色谱、薄层色谱的一般操作步骤第7页，课件共25页，创作于2023年2月1.制板（纸）第8页，课件共25页，创作于2023年2月将一个1.5cm长、1cm宽的滤纸，剪成扇子状，并卷起来滤纸芯儿的制作第9页，课件共25页，创作于2023年2月在滤纸中央，用铅笔画一个半径0.5cm的圆圈（直径一角硬币大小）。在圆圈中心扎一个孔，插入准备好的滤纸芯儿。插入时，滤纸芯的扇花部分插进滤纸孔一小部分，以盖到培养皿上方时不碰到液体为准。第10页，课件共25页，创作于2023年2月2.点样毛细管点样：毛细管与板（纸）垂直，点样位置、点样距离：不被展开剂浸泡、以显色后点之间易分开为准。点样量、样品浓度：轻轻点一次即可。本次实验：点三个样品——两个标准样品，一个混合样品第11页，课件共25页，创作于2023年2月3.展开将薄层板斜放入层析缸中（或将滤纸挂在层析缸中），层析缸中流动相（展开剂）的量以不浸泡样点为宜。有些层析缸如下图，易进行先饱和后展开操作，提高重现性和避免边缘现象。边缘现象：两边高第12页，课件共25页，创作于2023年2月本次纸色谱实验展开步骤：1.在培养皿中加入适量展开剂2.把点好样的滤纸放到培养皿上，注意滤纸芯儿不能碰展开剂。盖上培养皿饱和5~10分钟。3.把滤纸芯儿压下去，使滤纸芯儿的另一端稍微扇开，并接触展开剂，开始展开。4.当流动相（展开剂）的前沿到达滤纸边1cm左右时，停止展开，立即取出滤纸，用铅笔画出展开剂前沿线。5.去溶剂：烘干展开剂前沿线饱和展开画出展开剂前沿第13页，课件共25页，创作于2023年2月4.显色可见光下观察紫外灯下观察显色剂显色：通用：10%硫酸乙醇溶液；碘蒸气；大部分有机样品：磷钼酸/乙醇溶液专用：碘化铋钾—生物碱；三氯化铁—黄酮；

茚三酮—氨基酸

显色操作：将茚三酮喷至滤纸润湿，不易流淌第14页，课件共25页，创作于2023年2月5.计算比移值Rf

值的意义：定性分析的指标评价展开剂选择是否合适、评价分离效果薄层层析：Rf0.30～0.80，△Rf≥0.05

纸层析：Rf0.05～0.85，△Rf≥0.05第15页，课件共25页，创作于2023年2月2、影响旋光度的因素测定波长、浓度、测定管长度、溶剂、温度比旋光度：旋光管长度，dm

第16页，课件共25页，创作于2023年2月第17页，课件共25页，创作于2023年2月第18页，课件共25页，创作于2023年2月1）按通电源，预热约5min2）零点误差校正选定并清洗测定管：用水洗（留意密封垫和玻璃透光片，不要宁得太紧，否则读数不准）装入水：排气泡，旋上螺盖（不易过紧）放入样品管槽：玻璃泡部位在上部①调零点视野确定零点误差：数值与误差方向检查旋光仪零位是否准确，即在旋光仪未放试管或放进充满蒸馏水的试管时，观察零度时视场亮度是否一致。如不一致，说明有零位误差，应在测量读数中减去或加上该偏差值。

4、旋光仪的使用和旋光度的测定方法第19页，课件共25页，创作于2023年2月②测定旋光读数：转动度盘、检偏镜、在视场中觅得亮度一致且暗的位置，再从度盘上读数。读数是正（顺时针方向旋转）的为右旋物质，读数是负（逆时针方向旋转）的为左旋物质。

第20页，课件共25页，创作于2023年2月读数方法：主尺分180格，每格1°；游标尺分10格，每大格0.1°，每小格0.05°

。1.先看游标尺0刻度线指向主尺的哪两个数之间：图中9和10之间则旋光度为9.x2.看游标尺刻度线与主尺刻度线重合的位置：图中游标尺的3

则代表0.30因此该物质旋光度为右旋9.30°第21页，课件共25页，创作于2023年2月1主尺逆时针旋转：左旋0刻度线，也是180度线刻度：(+)179.30(-)0.70第22页，课件共25页，创作于2023年2月右旋右旋左旋左旋+30°，-150°可以说刻度是右旋30度，或左旋150度实际旋光度是多少，再稀释一半物质后测定，是15度，表明就是右旋的第23页，课件共25页，创作于2023年2月（3）已知浓度的葡萄糖的测定：试样管润洗、装入10%葡萄糖溶液（0.1g/ml)，调零点视场并读数。（4）稀释葡萄糖的测定，确定旋光方向：取出样品管，加入葡萄糖的稀释溶液，调零点视场并读数。（5）未知浓度的葡萄糖的测定：取出样品管，加入不知浓度的葡萄糖溶液，调零点视场并读数。（6）结果处理：扣除零点误差：同方向减，异方向加。由已知样算出比旋光度，再结合未知样的旋光度，算出未知样的浓度。第2