免疫血清制备专家讲座

试验目标和要求了解影响机体免疫应答强度原因;明确首次应答和再次应答抗体产生规律；制备牛血清白蛋白（BSA）抗血清；熟悉佐剂制备和动物免疫惯用方法；了解抗体检测惯用方法。免疫血清制备专家讲座第1页

在免疫学试验中,为制备抗体通常以抗原性物质给动物注射,经一定时间后,动物血清中可产生大量特异性抗体，这种含有特异性抗体血清称免疫血清。

试验原理免疫血清制备专家讲座第2页免疫应答影响原因

抗体产生通常与抗原质和量、动物种类以及接种路径有亲密关系。一、抗原分子结构和性质

1.分子量：分子量越大，免疫原性越强。2.化学组成及结构（1）蛋白质（2）多糖：含有免疫原性,较蛋白质弱。（3）核酸：多无免疫原性。3.结构复杂性4.分子构象

5.易靠近性

6.物理状态免疫血清制备专家讲座第3页二、宿主方面原因1.遗传原因同种动物不一样品系及不一样个体对同种抗原产生不一样强度免疫应答。2.其它原因年纪、性别与健康状态。三、免疫原剂量及进入路径（1）剂量1）剂量不足或过多均不引发免疫应答。2）重复进入引发强免疫应答。（2）路径：皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、呼吸道和口服免疫应答水平依次降低。免疫血清制备专家讲座第4页抗体产生普通规律首次应答和再次应答规律。

抗体产生次序规律：IgM-IgG-IgA-IgD-IgE免疫血清制备专家讲座第5页免疫血清制备专家讲座第6页首次应答和再次应答抗体产生比较免疫血清制备专家讲座第7页试验方案免疫佐剂制备及动物首次免疫（第一周）再次免疫及血清采集（第二周）血清采集及抗体检测（第三周）W1W2W3未免疫血清采集再次免疫血清采集首次免疫血清采集首次免疫再次免疫免疫血清制备专家讲座第8页试验材料动物：昆明鼠（每组一只），约20g／只。抗原：4mg／ml牛血清白蛋白（BSA)佐剂：完全福氏佐剂。其它：

PBS、1ml塑料管（保留血清用），无菌小试管，棉签，1ml注射器、12＃针头等。免疫血清制备专家讲座第9页试验流程12只小鼠小鼠眼眶取血制备血清2只2只8只W1W3W2首次免疫（1只/组）再次免疫免疫血清制备专家讲座第10页1.5mlBSA1.5ml完全福氏佐剂搅拌完全乳化第一周试验步骤

1.抗原制备滴于水中经久不散免疫血清制备专家讲座第11页

2.动物免疫用1ml注射器12＃针头吸出完全乳化抗原1ml；换4＃针头双后足垫和背部皮下接种，每处约10-20ul。(接种处先用碘酒、酒精消毒)将免疫后小鼠放回鼠笼。1ml注射器（内有乳化好抗原）贴好标签，4℃保留下次用。第一周试验步骤免疫血清制备专家讲座第12页免疫血清制备专家讲座第13页3.采集阴性血清（每班2只）用无菌小试管搜集未免疫小鼠血（眼眶放血法），标识后送准备室；2,000rpm离心

10分钟;吸收血清置1ml塑料管，做好标识;注意:老鼠断颈椎处死后放到楼梯口红桶第一周试验步骤免疫血清制备专家讲座第14页免疫血清制备专家讲座第15页免疫血清制备专家讲座第16页第二次课内容免疫血清制备专家讲座第17页抗原抗体反应抗原与抗体特异性结合，形成抗原抗体复合物。物质基础:1）抗原表位与抗体高变区间互补结合2）抗原表位与抗体高变区沟槽分子表面结合3）抗原抗体之间结协力4）亲水胶体转化为疏水胶体免疫血清制备专家讲座第18页抗原抗体结协力静电引力（electrostaticforces）范德华引力:作用最小（vanderWaalsinteractions）氢键:最具特异性（hydrogenbond）疏水作用力:作用最大（hydrophobicinteractions）抗原抗体结协力示意图免疫血清制备专家讲座第19页抗原抗体亲和力和亲协力亲和力：抗体分子上一个抗原结合点与对应抗原决定簇之间相适应而存在着引力，是抗原抗体间固有结协力亲协力：抗体结合部位与抗原表位之间结合强度免疫血清制备专家讲座第20页亲水胶体转化为疏水胶体抗原抗体结合后，使水化层表面电荷降低或消失，水化层变薄，电子云也消失，蛋白质由亲水胶体转化为疏水胶体。如再加入电解质，如NaCl，则深入使疏水胶体物相互靠拢，形成可见抗原抗体复合物。抗原(亲水胶体)

抗体(亲水胶体)抗原抗体复合物

(疏水胶体)电解质可见反应

+免疫血清制备专家讲座第21页抗原抗体反应普通规律特异性与交叉反应性；可逆性：表面结合，有可逆性；抗原抗体交叉反应示意图免疫血清制备专家讲座第22页适比性：适合百分比，反应才可见；阶段性：不可见可见反应；条件依赖性：PH，温度，电解质。抗原抗体反应百分比性示意图免疫血清制备专家讲座第23页血清制备：取首次免疫后小鼠2只，采集血清(方法同上),标识后冻存备用。再次免疫：其余小鼠于腹腔和背部皮下注射上次制备乳化抗原，每鼠注射0.5ml。第二周试验步骤免疫血清制备专家讲座第24页第三周试验步骤

血清制备：采集剩下小鼠血,将血置室