中药制剂的检查

第四章中药制剂的检查教学要求

1、掌握重金属、砷盐的检查原理和方法。2、熟悉《中国药典》现行版制剂通则的检查项目及特殊杂质的检查原理。3、了解农药残留量的检查原理和方法。4、了解黄曲霉毒素的检查方法制剂通则检查

一般杂质检查特殊杂质检查微生物限度检查主要内容第一节中药制剂杂质检查杂质危害人体健康或影响药物质量的物质一、杂质的来源及种类杂质分类一般杂质特殊杂质必须根据杂质对人体危害性和作用要求，对中药制剂杂质及其限量，做必要检查和规定。在自然界中分布较广泛，在多种药材的采集、收购、加工以及制剂的生产或贮存过程中容易引入的杂质，如酸、碱、水分、氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等在该制剂的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质.一般杂质特殊杂质①由中药材原料中带入；②在生产制备过程中引入；③贮存过程中受外界条件的影响而使中药制剂的理化性质改变而产生。杂质来源途径二、杂质的限量检查1.杂质限量药物中所含杂质的最大允许量，通常用百分之几或百万分之几来表示。2.限量检查规定一定限度，要求所检样品中某组分含量不超过此限度如规定黄连上清丸含重金属不得过百万分之二十五。三、杂质限量计算方法1.杂质限量检查方法1.对照法：取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，已确定杂质含量是否超过限量。2.灵敏度法：在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。该法不需要杂质对照品溶液。如乳酸中枸橼酸，草酸，磷酸或酒石酸的检查。2.杂质限量计算方法例1阿胶砷盐检查

取本品2.0g，加氢氧化钙1g，混合，加少量水，搅匀，干燥后先用小火烧灼使炭化，再在500～600℃炽灼使完全灰化，放冷，加盐酸3ml与适量的水使溶解成30ml，分取溶液10ml，加盐酸4ml与水14ml，依法检查（中国药典2005版附录ⅣF）。如果标准砷溶液（1µgAs/ml）取用量为2ml，求杂质限量。例2、黄连上清丸中重金属检查

取本品5丸，切碎，过二号筛，取适量，称定重量，照炽灼残渣检查法（中国药典2005版附录ⅣJ）炽灼至完全灰化。取遗留的残渣，依法检查（中国药典2000版附录ⅣE第二法），含重金属不得过百万分之二十五。如果标准铅溶液（10µgAs/ml）取用量为2ml，求供试品取样量。一般杂质检查方法2.弱酸性条件下（pH=3～3.5）能与硫代乙酰胺生成不溶性硫化物而显色的金属离子有：Ag+、As3+、As5+、Bi3+、Cu2+、Cd2+、Co2+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Sb2+、Sn2+、Sn4+等；一、重金属检查法1.重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。3.在碱性溶液中能与硫化钠作用生成不溶性硫化物而显色的有：Bi2+、Cd2+、Cu2+、Co2+、Fe3+、Hg2+、Ni2+、Pb2+、Zn2+等金属离子。4.在药品生产中遇到铅的机会较多，而且铅易积蓄中毒，故检查时以铅为代表。

①弱酸性条件下：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+

②碱性条件下：

Pb2++S2-→PbS↓（一）基本原理（二）检查方法：中国药典2010版规定重金属检查方法有三种。第一法：适用于供试品不经有机破坏，在酸性溶液中显色的重金属限量检查。

甲管乙管标准铅溶液+醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml+水或各药品项下规定的溶剂稀释成25ml供试品溶液25ml硫代乙酰胺试液各2ml摇匀放置2min同置白纸上,自上向下透视

乙管中显出的颜色不得比甲管更深第二法

适于供试品需灼烧破坏，取炽灼残渣项下遗留的残渣，经处理后在酸性溶液中显色的重金属限检查。放冷置水浴上蒸干微热溶解微热溶解取炽灼残渣项下遗留的残渣蒸干至氧化氮蒸汽除尽加硝酸0.5ml加水15ml加盐酸2ml移置纳氏比色管中滴加氨试液至对酚酞指示液显中性加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml加水稀释成25ml另取配制供试品溶液的试剂置瓷皿中蒸干加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml加水15ml移置纳氏比色管中加标准铅溶液一定量用水稀释成25ml以上两管溶液，照上述第一法检查第三法

适用于检查能溶于碱而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的药品中的重金属检查。

置纳氏比色管中＋硫化钠试液5滴，摇匀

甲管乙管标准铅溶液适量＋氢氧化钠试液5ml＋水20ml供试品适量＋氢氧化钠试液5ml＋水20ml溶解乙管中显出的颜色不得比甲管更深（1）方法灵敏度标准铅液的用量以20µg（相当于标准铅溶液2ml）时加硫代乙酰胺试液后所显颜色最适合于目视法观察。（2）反应条件硫代乙酰胺试液与重金属反应的最佳pH值是3.5，硫代乙酰胺试液加入量以2ml时呈色最深，最佳显色时间为2分钟。（3）供试液有颜色时的处理供试品在加硫代乙酰胺试液以前如带色，可用稀焦糖液或加常用的指示剂调整标准溶液，使两者颜色一致。三、注意事项（4）其他离子的干扰①供试品中含有高铁盐，可加入抗坏血酸②使用盐酸超过1.0ml或使用氨试液超过2ml③供试品为铁盐（5）中药制剂中重金属检查的前处理将药品灼烧破坏，炽灼温度必须控制在500～600℃。③如需过滤，可加入对酚酞呈微碱性的饱和醋酸铵溶液，温热后用直径较小的定量滤纸滤过，或者选用玻砂漏斗过滤。④如供试品本身能生成不溶性硫化物时，影响重金属的检查，可加入适当的掩蔽剂。（6）其他①标准铅溶液临用前新配以防止硝酸铅水解；配制标准铅溶液使用的玻璃仪器，均不得含有铅。②硫化钠试液应采用分析纯的硫化钠配制，贮存在棕色瓶中可保存1～2个月。二、砷盐检查法

砷盐检查法系指用于药品中微量砷（以As计算）限量检查的方法。中国药典中规定的方法是古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC).1.基本原理：AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2OAsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黄色)AsH3+3HgBr2→3HBr3+As(HgBr)3(棕色)AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+（一）古蔡法4I-+Zn2+→[ZnI4]2-

Sn2++Zn→Sn+Zn2+2.检查方法：A为100ml标准磨口锥形瓶B为中空的标准磨口塞C为导气管,全长约180mmD为具孔的有机玻璃旋塞

E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖古蔡法装置中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为60～80mm）

顶端平面上放一片溴化汞试纸盖上旋塞E并旋紧样品溶液3.注意事项（1）

方法灵敏度

：0.75µg（以As计），2ml标准砷溶液；（2）

反应液的酸度及各种试液用量：2mol/L的盐酸液，含KI浓度为2.5%，SnC12浓度为0.3%，加入锌粒以2g为宜；（3）

反应温度和时间：25～40℃，45分；

（4）锌粒的影响：2mm左右粒径；（5）汞试纸的选择：中速定量滤纸，新鲜制备；（6）醋酸铅棉花的作用：除去H2S；（7）中药制剂中砷盐检查的前处理：①酸破坏法，②碱破坏法，③直接炭化法；（8）干扰物质：（9）其他：①关于所用仪器和试液，②关于同一套仪器，③关于标准砷溶液，④关于酸性氯化亚锡试液。

（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法）1.基本原理：二乙基二硫代氨基甲酸银二乙基二硫代氨基甲酸（简称Ag-DDC）（简称HDDC）2.检查方法：按《中国药典》2010年版23.注意事项：（1）有机碱液的选择：三乙胺（2）反应的温度和时间：25～40℃，45分钟三、干燥失重测定法1、药品的干燥失重：系指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的重量，主要是指水分、结晶水，但也包括其他挥发性的物质如乙醇等。

2、水分：又可分为必要的水分，即结晶水或组成水分；不必要的水分，即附着水分或吸留的水分。3、进行干燥失重或水分测定的必要性药品中含有较大量的水分或其他挥发性物质时：

使药品的含量降低，影响使用剂量；引起药品水解或发霉变质，而使药品失效；含水量还可反映出制剂的生产工艺是否稳定，包装及贮存条件是否适宜等。故需进行干燥失重或水分测定。方法适用范围检查方法常压恒温干燥法适用于受热较稳定的中药制剂的测定将供试品置于烘箱中，在规定温度下进行干燥，干燥温度一般为105℃，干燥时间一般在达到指定温度±2℃干燥2~4小时，再称至恒重为止。干燥剂干燥法①硅胶干燥法②P2O5干燥法③硫酸干燥法适用于受热易分解或挥发性供试品检查将供试品置于干燥器内，利用干燥器内贮放的干燥剂，吸收供试品中的水分，干燥至恒重减压干燥法适用于熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的供试品检查将供试品置于减压干燥器中进行干燥，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。常用干燥失重测定法4、检查方法5、注意事项

（1）供试品的颗粒大小一般将颗粒控制在2mm以下，若供试品为较大结晶，为了避免在研磨过程中水分等损失，应先迅速捣碎成2mm以下的小粒。

（2）供试品用量除另有规定外，一般取供试品约1g。

（3）铺设的厚度应将供试品平铺在扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，如为疏松物质，厚度不可超过10mm。

（4）瓶盖的放置将称量瓶放入烘箱或干燥器中时，应将瓶盖取下，置称量瓶旁或将瓶盖半开进行干燥。取出时须将瓶盖盖好。在每次干燥后应先置干燥器内放冷至室温，然后称定重量。

（5）如供试品未达到规定的干燥温度即融化时，应先将供试品置较低的温度下干燥至大部分水分除去后，再按规定条件干燥。（6）减压时需注意压力变化，如真空度较高时，干燥器易爆炸！初次使用新干燥器时，宜用较厚的布包在外部，以防玻璃飞溅而引起伤害。（7）恒重系指供试品连续2次干燥后的重量差异在0.3mg以下，干燥至恒重的第2次及以后各次的称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。

四、水分测定法烘干法-----不含或含少量挥发性成分的供试品甲苯法-----含挥发性成分的供试品减压干燥--含挥发性成分的贵重药品干燥剂：P2O5

气相色谱法-散剂、颗粒剂、丸剂、片剂等各类型中药制剂中微量水分的测定

快速水分测定仪甲苯法装置注意事项

1.测定用的供试品，一般先破碎成直径不超过3mm的颗粒或碎片（破碎时不得使用高速粉碎机）。直径和长度在3mm以下者可不破碎。如使用减压干燥法需先经二号筛。

2.甲苯法中，为减少因甲苯与微量水混溶引起水分测定结果偏低，在测定前，甲苯需先加少量水，充分振摇使达饱和后放置，将水层分离弃去，经蒸馏后方可使用。

3.进行减压干燥时，减压操作宜逐渐进行，不可骤然大幅度减压。4.采用气相色谱法时需注意①无水乙醇含水量约3%，标准溶液与供试品溶液的配制需用同一批号试剂。无水乙醇中的含水量需要扣除。②含水量的计算采用外标法。五、炽灼残渣检查法

炽灼残渣（英国药典称为硫酸灰分）：

中药多由有机化合物组成，有机物经炽灼炭化，再加硫酸湿润,加热使硫酸蒸气除尽后，于高温（700～800℃）炽灼至完全灰化，使有机质破坏分解变为挥发性物质逸出，残留的非挥发性无机杂质（多为金属的氧化物或无机盐类）成为硫酸盐,称为炽灼残渣。取供试品1.0～2.0或各药品项下规定的重量，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温；除另有规定外，加硫酸0.5～1ml使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，在700～800℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在700～800℃炽灼至恒重，即可。如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500～600℃。

检查方法（1）取样量：一般为1～2g左右。（2）生药的灰化可以加一定量已恒重的纯砂或混以乙醇、甘油，使灰化完全。（3）如需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度必须控制在500～600℃。（4）具有挥发性的无机成分中药受热挥发或分解后残留非挥发性杂质，也可用炽灼残渣法检查。注意事项六、灰分测定法

1.总灰分：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，则其细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“生理灰分”即总灰分。2.酸不溶性灰分：中药经高温炽灼得到的总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸的灰分，称为酸不溶性灰分。3.检查方法：《中国药典》2010年版附录。（1）供试品需粉碎使其能通过2号筛。（2）供试品不易灰化时可加热水或10%硝酸铵溶液处理。注意事项第三节特殊杂质检查方法特殊杂质：指在该药品的生产和贮存过程中，根据其来源、生产工艺及药品的性质有可能引入的杂质。1.西洋参中掺有人参（西洋参中人参皂苷Rb1含量高；后者人参皂苷Rg1高）2.乌头酯型生物碱的检查(毒性较大)

（①制川乌、制草乌、制附子药材含有乌头碱不得高于0.15%；②附子理中丸）3.大黄流浸膏中土大黄苷的检查（取本品适量，加甲醇2ml，温浸10分钟，放冷，取上清液10µl，点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外灯（365nm）下检视，不得显持久的亮紫色荧光。）

大黄素土大黄苷常见农药的种类:

（1）有机氯类：DDT、六六六等；（2）有机磷类：敌敌畏、乐果等；（3）苯氧羧酸类除草剂：2，4-D；2，4，5-T等；按化学结构

（4）氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）等；（5）二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、福美锌等；（6）无机农药：磷化铝、砷酸钙等；（7）植物性农药：烟叶和尼古丁等；（8）其他：溴螨酯、氯化苦等。其中有机氯和有机磷类农药是长期残留的，故应测定其含量。第四节农药残留量的检查农药残留量的测定（1）残留农药的提取

①有机氯类农药：常用正己烷（或石油醚）、乙腈、丙酮、苯等，混合溶剂常用正己烷提取溶剂（或石油醚）-丙酮、乙腈-水等。②有机磷类农药：根据其极性采用相应极性的溶剂进行提取。提取方法：①索氏提取法②振荡提取法。（2）样品纯化

①液-液分配（LLP）：常用溶剂体系有二氯甲烷-丙酮/水、二氯甲烷-甲醇/水、乙腈-石油醚、乙腈-石油醚/水、二氯甲烷-乙腈/水等。②柱层析分离：常用吸附剂有弗罗里硅土（Florisil）Celite-Nuchar、硅胶、氧化铝，活性炭等。（3）

检测方法：以色谱分离方法为主，常用薄层色谱法气相色谱法。

薄层色谱法

a.层析系统有机氯农药：吸附剂：硅胶G、氧化铝、GF254等；展开剂：己烷、庚烷等；有机磷农药：吸附剂：硅胶G、氧化铝、硅藻土、纤维素粉和聚酰胺等，展开剂：丙酮、氯仿、乙腈、环己烷等。b.显色剂

有机氯农药：硝酸银。有机磷农药：刚果红、4-（对硝基苄基）吡啶（NBP）等。a.层析柱常用玻璃柱（柱长以1～2米为宜）或弹性毛细管柱。b.检测器常用电子捕获检测器。有机氯农药：常用DC-200、OV-17、QF-1、SE-30、OV-210等。配比一般为1.5-10%。c.固定液及其配比有机磷农药：常用10%DC-200、10%DC-200+15%QF-1、2%DEGS等。d.担体chromosorbWAWDMCS，目数一般用80-100目。有机氯农药：一般使用180-220℃，视农药而异，其中以200℃最常用e.柱温有机磷农药：测定对象不同，柱温变化较大。f.载气

常使用高纯氮（含氮99.99%）为载气，流速为50～150毫升/分钟。气相色谱法一、为何需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制？

干燥不够、贮存不当、制备和加工过程中处理不善，→污染→产生黄曲霉毒素黄曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性。二、黄曲霉毒素的基本结构